陈坚
- 作品数：18 被引量：26H指数：4
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划“十一五”国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪细小病毒PCR检测方法的建立及应用被引量：6
- 2008年
- 根据已报道猪细小病毒基因组序列,设计合成了一对特异引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,确定PCR检测的最佳条件,成功扩增出预期的1980bp片断。特异性和敏感性试验结果发现:该方法特异、敏感,可以检测到0.9TCID50、0.001个HA的病毒。用该方法对用ZH株免疫妊娠母猪后第7、14、21天血液及胎儿样品进行检测,在血液和所采组织样品中均未检测到PPV病毒抗原,说明ZH株免疫后不产生病毒血症,也不能通过胎盘垂直传染给仔猪。
- 刘业兵陈坚郑杰宁宜宝杨汉春
- 关键词：猪细小病毒PCR
- 基因芯片技术及其在动物微生物研究中的应用被引量：3
- 2010年
- 介绍了基因芯片技术及其在动物微生物研究中病原体检测和分型、致病机理、宿主与病原体的相互影响以及耐药性检测等方面的应用情况,分析了限制该技术应用和发展的主要问题,并对其应用前景作了展望。
- 陈坚刘业兵宁宜宝
- 关键词：基因芯片动物微生物
- 双重RT-PCR方法检测猪流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒被引量：4
- 2010年
- 为建立特异、敏感的猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank登录的SIVM基因保守序列和PRRSV美洲型毒株的N基因保守序列,设计合成了2对特异引物,通过对扩增条件的优化,建立检测SIV和PRRSV的双重RT-PCR方法。检测结果显示:该方法可同时扩增出SIV(345bp)和PRRSV(520bp)的特异性片段;而猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型及阴性鸡胚尿囊液核酸扩增结果均为阴性;对SIV和PRRSV2种病毒混合液的最小检出量分别为102EID50/0.1mL和103TCID50/0.1mL。应用双重RT-PCR和病毒分离法对12份临床疑似样品进行对比检测,结果表明:除双重RT-PCR检测到双阳性的3份混合感染病料中1份未分离到PRRSV外,其余2份均分离出病毒。证明该方法具有良好的特异性、敏感性,可以用于临床样品的早期快速检测。
- 罗俊刘业兵陈坚宁宜宝
- 关键词：猪流感病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒双重RT-PCR
- 猪流感RT-PCR诊断方法的建立被引量：3
- 2009年
- 根据GenBank上发表的多株猪流感病毒(SIV)序列,在保守区域设计1对引物,并对RT-PCR反应条件进行优化,建立了可检测出多种亚型猪源流感病毒的RT-PCR方法。通过对反应产物测序分析,与预期结果相符,证明该方法具有很强的特异性;该方法可以检测出约1个TCID50的猪流感病毒,显示较高的敏感性。通过对12份临床样品进行检测,结果发现:该方法和其他两种方法分离病毒符合率相当。本研究建立的猪流感RT-PCR诊断方法具有高特异性和敏感性,适用于SIV的诊断应用和推广。
- 陈坚刘业兵张磊罗俊宁宜宝
- 关键词：猪流感RT-PCR
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株GDr株的致弱培育
- 本发明涉及一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株GDr株的致弱培育。本发明是将由我国分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征野毒株经过全面鉴定后，再将其在Marc145细胞中连续传代后使其毒力减弱获得弱毒疫苗株GDr株病毒...
- 宁宜宝刘业兵李嘉爱陈坚赖月辉郑杰张磊罗俊韩明远沈青春张志刚
- 文献传递
- 猪瘟兔化弱毒细胞源疫苗体外效检替代方法的建立和应用
- 目前,按照我国《兽药典》规定,猪瘟活疫苗效力检验有两种方法,一种是通过兔子对猪瘟兔化弱毒感染后体温升高的特性,利用替代动物兔检测猪瘟疫苗的兔体感染量( RID)来判定猪瘟活疫苗的效力；另一种方法就是用猪瘟疫苗免疫猪,然后...
- 王海光宁宜宝吴文福赖月辉王芳黄秋雪陈坚
- 关键词：免疫效力
- HP-PRRSV GD株及传代致弱毒株GDr180株在SPF仔猪体内的动态分布研究
- 本研究旨在利用实时荧光定量PCR技术对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD株及其传代致弱毒株GDrl80株在SPF仔猪体内动态分布的规律和特点进行研究。笔者将GD株和GDrl 80株分别人工感染35日龄SPF仔猪，后于3d...
- 刘灿英聪宁宜宝张磊王海光陈坚
- 关键词：仔猪荧光定量PCR动态监测
- 猪细小病毒PCR检测方法的建立及应用
- 根据已报道猪细小病毒基因组序列,设计合成了一对特异引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,确定PCR检测的最佳条件,成功的扩增出预期的1,980bp片断。特异性和敏感性试验结果发现:该方法特异、敏感,可以检测到0.9 TC...
- 刘业兵陈坚郑杰宁宜宝杨汉春
- 关键词：猪细小病毒PCR
- 文献传递
- 脉冲场凝胶电泳在沙门氏菌流行病学中的应用被引量：4
- 2010年
- 脉冲场凝胶电泳是20世纪80年代发展起来的一种可用于分离10 kb至10 Mb分子质量DNA的新型凝胶电泳技术,已广泛应用于细菌分子分型、种群特异性鉴定及遗传分析等方面。文章介绍了脉冲场凝胶电泳的技术、应用状况及目前沙门氏菌的分型现状,并阐述了该技术在沙门氏菌流行病学研究方面的应用及发展前景。
- 陈瑞熊惠军宋立陈坚
- 关键词：脉冲场凝胶电泳沙门氏菌分子分型流行病学
- SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法检测猪细小病毒被引量：6
- 2011年
- 为建立特异敏感的猪细小病毒(PPV)的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,本研究根据GenBank上PPV NS1保守序列设计合成了1对引物,利用本实验室构建的重组质粒(pMD18-T-PPV NS1)为标准模板,对反应条件进行优化,绘制标准曲线,并进行熔解曲线分析,建立了PPV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法。分别进行了特异性、敏感性及重复性检验,结果表明,本方法具有良好的特异性,与PRRSV、CSFV、PRV、PCV-2、SIV及阴性对照均为阴性;其最低检出量为7copies/μL,比PCR敏感100倍,且批内和批间重复性良好。用该方法对15份临床病料进行检测,并与常规PCR、环介导等温扩增(LAMP)方法进行对比,显示该方法灵敏度高、成本低,能够对样品组织中病毒进行定量检测,为快速检测PPV提供了有效的技术手段。
- 陈坚刘业兵张志刚姜晓晨张晓杰
- 关键词：猪细小病毒SYBR
