许桂丽
- 作品数：14 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省社会发展科技计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO细胞中的表达、纯化及其免疫活性被引量：1
- 2014年
- 目的在CHO细胞中表达单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,纯化后检测其免疫活性。方法利用ANTHEWIN等软件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,筛选抗原表位富集、且亲水性较好的蛋白胞外区片段,选择真核和原核生物均偏爱的密码子,通过OptimumGene软件对基因进行序列优化,化学合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR扩增后,插入pMCE5载体,构建重组表达质粒pMCE5-gC2,转染至CHO细胞中进行真核表达。表达的重组gC2蛋白经亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将纯化的重组gC2蛋白分别于第0、2、4周经腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作为对照,采用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFNγ(代表Th1细胞因子)和IL-4(代表Th2细胞因子)的细胞频率。结果重组表达质粒pMCE5-gC2经菌落PCR、双酶切(EcoRⅠ/NotⅠ)及测序证实构建正确;纯化的重组gC2蛋白相对分子质量约为90 000,纯度约为85%,浓度为40μg/ml,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;通过3次免疫,小鼠产生了高水平的血清抗体,与免疫前相比,差异均有统计学意义(P<0.001);免疫小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的细胞频率分别为(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106个细胞,均显著高于对照组(P<0.001)。结论在CHO细胞中表达了重组gC2蛋白,纯化的蛋白能够激发小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,为进一步研制HSV亚单位疫苗奠定了基础。
- 周洁蔡冉徐悦玥潘英李素芹尚彦红许桂丽袁敬宇马颖张素芬李越希
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞免疫活性
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型gC蛋白在哺乳动物细胞中的表达及免疫原性检测
- 目的 在哺乳动物细胞中表达并纯化单纯疱疹病毒Ⅱ型表面糖蛋白C(glycoprotein C,gC)胞外抗原表位富集区片段,对其免疫活性进行分析。方法 优化筛选HSV-2 gC蛋白胞外抗原富集区基因序列并化学合成,以pMC...
- 周洁潘英李素芹李越希许桂丽蔡冉张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷
- 关键词：单纯疱疹病毒真核表达免疫原性
- 肺炎衣原体特异性抗原表位的筛选及表达鉴定
- 许桂丽潘英李素芹李越希蔡冉周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷
- 金黄色葡萄球菌外膜蛋白FnBPA表达及单克隆抗体的制备
- <正>目的:金黄色葡萄球菌(又称金葡菌)是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,它寄生于人类皮肤和鼻粘膜表面,占医院感染和社区获得性感染的大部分。金葡菌也是引起食物中毒的重要因素。目前对金葡菌的检测方法有传统...
- 许桂丽蔡冉周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷潘英李素芹李越希
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌表面蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
- 2014年
- 目的在原核细胞中表达金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin-binding protein A,FnBPA),制备其多克隆抗体。方法筛选FnBPA抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa,分别转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High Affinity GST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的FnBPA-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以FnBPA-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性。结果经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa构建正确;在相对分子质量约42 000和19 000处,分别可见FnBPA-GST和FnBPA-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的30%和20%,均以可溶性形式表达,纯度均在90%以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清。结论2种标签的融合蛋白均具有较好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为金黄色葡萄球菌检测方法的建立奠定了基础。
- 许桂丽蔡冉周洁马颖袁敬宇徐悦玥张素芬尚彦红潘英李素芹李越希
- 关键词：金黄色葡萄球菌多克隆抗体
- 金黄色葡萄球菌外膜蛋白的表达及单克隆抗体的制备
- 金黄色葡萄球菌FnBPA(纤连蛋白结合蛋白)的两种原核表达载体,制备其单克隆抗体(mAb)并对其特异性进行鉴定.筛选FnBPA的抗原表位富集区,优化基因序列,分别构建FnBPA-pGEX4T-2和FnBPA-pET28a...
- 许桂丽潘英李素芹李越希蔡冉周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷
- 关键词：金黄色葡萄球菌外膜蛋白单克隆抗体
- HSV-1 gD1,HSV-2 gC2、gD2蛋白真核表达纯化、免疫原性检测及联合免疫效果检测
- 周洁潘英李素芹李越希许桂丽蔡冉张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷
- 大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H7抗原的表达纯化及抗血清制备
- 本研究应用生物信息学分析工具对大肠杆菌O157：H7鞭毛蛋白H抗原(flic基因)抗原表位进行分析,筛选出抗原表位较富集的胞外区片段；优化基因序列,使其适合在原核载体中表达.构建重组质粒pgex4t-2-flic和pet...
- 蔡冉潘英李素芹李越希许桂丽周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷
- 关键词：大肠杆菌O157:H7FLIC
- 抗大肠杆菌0157:H7鞭毛蛋白H抗原单克隆抗体的制备和鉴定
- 蔡冉潘英李素芹李越希许桂丽周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷
- 关键词：O157:H7FLIC单克隆抗体
- 大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H7抗原的原核表达和纯化
- <正>目的:鞭毛蛋白(H7)是肠出血性大肠杆菌重要的毒力因子,其编码基因为flic。主要由三部分区域组成:两端高度保守的C1区和C2区及中间高变C3区。H7鞭毛在启动O157:H7与肠道黏膜、黏液或者同时与两者结合过程中...
- 蔡冉许桂丽周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷潘英李素芹李越希
- 文献传递
