裘秀春
- 作品数：133 被引量：485H指数：13
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学建筑科学更多>>
- microRNA-194模拟物对成骨肉瘤细胞系SOSP_9607生物学特性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:观察miR-194模拟物对于成骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-194模拟物(hsa-miR-194mimics)转染成骨肉瘤细胞系SOSP_9607,增强SOSP_9607细胞内miR-194的活性。结果:与对照组比较,实验组细胞的增殖能力明显下降。实验组凋亡率(10.1±0.22)%与阴性对照组凋亡率(3.3±0.19)%相比明显增高(P<0.01)。与对照组比较,实验组细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论:通过转染miR-194模拟物增强SOSP_9607细胞中miR-194的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。
- 靳雷高杰刘云燕马琼杨彤涛裘秀春范清宇马保安
- 关键词：骨肉瘤细胞增殖细胞凋亡
- SOX9基因真核表达载体转染诱导BMSCs分化为类髓核细胞被引量：8
- 2010年
- 目的椎间盘退行性变的生物学治疗方法是骨科学研究热点,寻找一种有效诱导BMSCs向椎间盘细胞分化的方法成为应用细胞移植治疗椎间盘退变的必要前提。探讨重组质粒pcDNA3.1IE-SOX9 Flag体外转染诱导兔BMSCs向类髓核细胞分化的影响。方法构建真核表达载体pcDNA3.1IE-SOX9 Flag。取1月龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs,体外诱导BMSCs向成骨细胞分化并鉴定;流式细胞仪检测细胞表面标记。将第3代BMSCs随机分为转染组、阴性对照组和空白对照组。转染组转染pcDNA3.1IE-SOX9Flag重组质粒,阴性对照组转染质粒pcDNA3.1,空白对照组不转染任何质粒。将构建好的重组质粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag转染第3代BMSCs,72h后加入浓度为500mg/L的G418筛选7d后,改为浓度200mg/L的G418维持筛选压力并培养转染细胞。取各组BMSCs采用RT-PCR检测SOX9和Ⅱ型胶原基因(Col2al)的mRNA表达,Western blot检测SOX9蛋白的表达,免疫组织化学染色观察Ⅱ型胶原的表达。结果 BMSCs成骨诱导7d后ALP染色呈阳性;CD44表达阳性,CD34和CD45表达阴性。成功构建了真核表达载体pcDNA3.1IE-SOX9Flag。将重组质粒转染兔BMSCs,72h后转染效率为34.32%±1.75%;转染2周后BMSCs形态改变,呈多角形或椭圆形,细胞体积增大,增殖速度减缓,与椎间盘髓核细胞生长特点十分接近。RT-PCR鉴定发现转染组细胞SOX9 mRNA和Col2al mRNA表达阳性,对照组均为阴性。Westernblot检测发现转染组SOX9基因蛋白表达阳性,对照组未见表达。转染组BMSCs的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性。结论 SOX9基因真核表达载体成功转染兔BMSCs,被转染的干细胞向类髓核细胞分化,为进一步研究应用BMSCs移植治疗椎间盘退行性变奠定了理论基础。
- 张琦钱济先文艳华裘秀春马保安范清宇
- 关键词：BMSCSSOX9基因转染髓核细胞椎间盘退行性变
- 靶向IL-11Rα的特异性造影剂在乳腺癌成像中的应用
- 马琼裘秀春Wei Wang范清宇Shi Ke
- 抗人脊索瘤杂交瘤细胞系的建立及其单抗在病理诊断中的应用
- 2010年
- 目的:建立一株高特异性抗人脊索瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞系,检测其在人脊索瘤组织中及其它骨肿瘤中的特异结合程度。方法:以人脊索瘤细胞株CM-319为抗原,免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤技术,研制出一株MAb-6F2杂交瘤细胞系。通过免疫组织化学方法检测了MAb-6F2在4种不同骨肿瘤石蜡切片和人正常髓核组织上的结合反应。结果:MAb-6F2在骨肉瘤组织上的结合率仅为10%;在软骨肉瘤上的结合率为10%;在骨样骨瘤组织上的结合率为10%;在脊索瘤组织上的结合率为100%;在正常髓核组织上为阴性;MAb-6F2在脊索瘤组织上的结合反应显著高于其它骨肿瘤(P<0.01)。结论:MAb-6F2在人脊索瘤组织中的特异性高结合,可以为脊索瘤的诊断提供新的手段。
- 刘云燕杨连甲裘秀春文艳华张殿忠范清宇
- 关键词：脊索瘤单克隆抗体免疫组织化学
- 人源抗HER2单链抗体／鱼精蛋白截短体融合蛋白的表达、纯化及鉴定
- 2012年
- 在人类乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2（HER2）和受体趋化因子4（CXCR4）的表达成正相关，由于HER2与CXCR4／CXCL-12轴在乳腺癌骨转移中的重要作用，使其成为可供选择的肿瘤治疗靶点。本研究将HER2单链抗体（ScFv）与鱼精蛋白截短体（tP）融合，以期获得同时具有抗原与核酸结合活性的ScFv-tP融合蛋白，核酸与该融合蛋白结合后，有望实现小分子干扰RNA（siRNA）的靶向递送，对HER2与CXCR4／CXCL-12轴进行RNA干扰（RNAi），为新型抗肿瘤药物应用于临床提供资料。
- 姜扩陈锐阎博蔡承魁贠喆王芳杨安钢裘秀春
- 关键词：融合蛋白鱼精蛋白单链抗体人类表皮生长因子受体CXCR4RNA干扰
- 重组tBid融合蛋白基因的构建及其在HeLa细胞中的分泌表达
- 2006年
- 目的:构建重组的Immuno-tBid基因,并检测其在HeLa细胞中的分泌表达。方法:将肿瘤表面抗原HER2的单链抗体基因与绿脓杆菌外毒素PE的转膜结构域基因(PE253-364aa)和tBid基因连接,并在5'端连接前导肽基因,构建成Immuno-tBid(e23sFv-PEII-tBid61/tBid76)基因。将其克隆到pCMV载体并转染HeLa细胞,G418筛选获得阳性克隆,Genomic-PCR和RT-PCR分别扩增相应的重组基因片段。建株的HeLa细胞培养上清进行蛋白G琼脂糖凝胶免疫沉淀,Western Blot检测。并通过间接免疫荧光染色和细胞计数观察建株的HeLa细胞生长和形态变化。结果:成功构建了重组的Immuno-tBid基因的真核表达载体(pCMV-e23sFv-PEII(253-364)-tBid61/tBid76)。稳定转染HeLa细胞,获得G418抗性的阳性HeLa细胞克隆,Genomic-PCR检测证实目的基因已整合到细胞基因组中。RT-PCR检测表明目的基因在RNA水平上的表达。细胞培养上清进行蛋白G琼脂糖凝胶免疫沉淀,Western Blot检测,证实建株的HeLa细胞可以通过分泌途径产生Immuno-tBid蛋白。间接免疫荧光染色和核染色结果显示,分泌Immuno-tBid蛋白的HeLa细胞呈标准的S型曲线生长,形态正常。结论:成功构建了重组的Immuno-tBid基因,建株的HeLa细胞可以通过分泌途径产生Immuno-tBid蛋白。
- 裘秀春许彦鸣于翠娟赵晶孟艳玲杨彤涛龙华马保安周勇王成济杨安钢范清宇
- 关键词：TBID抗原分泌表达
- YM155对骨肉瘤细胞系F5M2增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨YM155对人骨肉瘤细胞系F5M2的作用及其机制。方法:体外培养人骨肉瘤细胞系F5M2,不同浓度YM155处理人骨肉瘤细胞系F5M2,用MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测survivin mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测survivin、caspase-3蛋白的表达。结果:YM155可抑制人骨肉瘤细胞F5M2的增殖,且呈剂量依赖性。随着YM155浓度的升高,人骨肉瘤细胞F5M2凋亡率明显增加,同时能够降低survivin在mRNA水平和蛋白水平的表达,以及激活caspase-3。结论:YM155能够有效抑制人骨肉瘤细胞F5M2增殖,并诱导其凋亡,其可能机制为下调骨肉瘤细胞系F5M2survivin的表达,继而激活caspase凋亡信号通路。
- 陈洁彭诗元贠喆马琼文艳华裘秀春周勇
- 关键词：骨肉瘤SURVIVIN增殖凋亡
- 格尔德霉素增强子宫颈癌HeLa细胞热疗效的影响
- 2007年
- 背景与目的:苯醌安莎霉素类如格尔德霉素(geldanamycin,GA)通过抑制热休克蛋白(heat shock protain90,HSP90)从而导致细胞内信号调节通路网络的多点阻断,如导致涉及细胞增殖、细胞周期调节及幸存调节等众多效应蛋白的降解。前期研究证明HSP90可作为抗肿瘤治疗的一个分子靶位。本研究以子宫颈癌HeLa细胞为研究对象,观察HSP90分子伴侣复合物阻止剂格尔德霉素能否增强加热对HeLa细胞的杀伤效应。方法:采用四唑盐比色实验(MTT)、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、吖啶橙荧光染色等方法观察比较应用单纯热疗组、GA组、热疗联合GA组对HeLa细胞活力、凋亡率及细胞形态学的影响。结果:四唑盐比色实验观察到加热与GA化疗间有交互作用,加热联合GA组显著增强单独加热对HeLa细胞杀伤效应(P<0.01);Annexin V-FITC染色流式细胞术结果显示加热联合GA组、单纯加热组、单纯GA治疗组所致细胞凋亡率分别为92.1%、52.2%及26.8%。用吖啶橙荧光染色法观察到加热联合GA组明显见HeLa细胞固缩着色不均而且较深,细胞核浓缩、裂解等凋亡特征。结论:HSP90分子伴侣复合物阻止剂GA能增强热诱导的HeLa细胞的杀伤作用。
- 苟永胜裘秀春马保安周勇张明华钱济先青晓芬任民范清宇
- 关键词：子宫颈癌细胞
- 人抗HER2单链抗体精氨酸九聚体融合蛋白的基因构建表达及鉴定
- :构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性.方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30,在大...
- 周勇姜扩裘秀春
- 关键词：蛋白基因
- 周期性静水压对人软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:以正常成人软骨细胞及OA软骨细胞为研究对象,探讨在静水压作用下正常软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的变化,以及与OA软骨细胞之间的差异。同时观察在力学信号刺激下软骨细胞的IL-1β和MMP-3代谢有无相关性。方法:将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为加压组和对照组。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。将加压组细胞放入高压恒温静水压加压系统,冲入含有95%的空气和5%的CO2混合气体,以10MPa进行加压2h,共加压5d。分别于加压前、加压第3天、加压第5天后取加压组、对照组和OA组细胞培养液检测IL-1β、MMP-3含量。同时采用MTT法分析3组细胞的增殖情况。对三组细胞中IL-1β与MMP-3的水平做双变量相关分析,采用方差分析对三组标本间的IL-1β、MMP-3含量进行比较。结果:各组细胞IL-1β与MMP-3两者间存在正相关关系。OA组细胞中IL-1β与MMP-3含量高于加压组和对照组,加压组高于对照组。加压组、OA组软骨细胞的生长曲线与对照组相比增殖高峰降低,平台时间缩短。结论:10MPa间歇性静水压加压可抑制软骨细胞增殖,增加IL-1β与MMP-3分泌。
- 肖春颜世举靳雷王鑫裘秀春范清宇马保安
- 关键词：IL-1ΒMMP-3
