葛海良
- 作品数：149 被引量：402H指数：10
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市高等学校科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 大鼠IL-10真核表达载体在软骨细胞中的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 构建大鼠IL-10真核表达载体并在大鼠软骨细胞中进行表达。方法 将目的基因片段通过酶切连入真核表达载体pcDNA3,并以Super Fect Transfection Reagent介导转入大鼠软骨细胞表达,RT-PCR检测细胞中mRNA水平,及ELISA检测细胞培养上清液中的IL-10蛋白含量。结果 成功构建了大鼠IL-10真核表达载体,转入软骨细胞后,检测到细胞内IL-10mRNA转录,细胞培养24、48和72 h后,经ELISA检测上清液中IL-10蛋白含量分别为36、62和100 pg/mL。结论 大鼠IL-10真核表达载体的构建并在软骨细胞中表达,为研究IL-10诱导软骨细胞同种异体移植耐受奠定了基础。
- 赵阳柳子星王颖张惠珍王树军葛海良
- 关键词：大鼠软骨细胞真核表达
- 人卵巢癌cDNA表达文库的构建被引量：6
- 1998年
- 以polyA^+ mRNA提取试剂盒从卵巢癌组织中获得高质量的polyA^+ mRNA,并以此合成第1、2链cDNA.cDNA两端补平后加EcoR Ⅰ接头,Xbo酶切,通过分级分离去除<400bP的片段.取100ng cDNA与噬菌体表达载体Uni-ZAP XR连接,体外进行噬菌体DNA包装,并立即进行文库的滴定和扩增,获得卵巢癌cDNA表达文库.该文库原始重组子为10~6独立克隆;重组率>99%;并以引物PUCⅠ、PUCⅡ扩增插入片段,平均大小约为1.1kb.证实此cDNA表达文库合格.以PCR从此cDNA表达文库中筛选HLA-DPB和β-actin基因,获得成功.
- 张笑人葛海良王颖周光炎蔡晓敏谢毅柴建华
- 关键词：卵巢癌CDNA文库PCR
- 天花粉蛋白诱导的凋亡相关基因(GRETA)的分离被引量：3
- 2000年
- 天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)制备成免疫毒素后,可抑制肿瘤细胞的生长,已尝试用于治疗恶性肿瘤。在无细胞体系中TCS可通过抑制蛋白质的合成发挥毒性作用。对完整的活细胞,近来发现它可阻断激活信号传递中ZAP-70与CD3ζ链的物理结合,并能诱导人体外周血淋巴细胞发生凋亡。凋亡为一受基因控制的细胞程序性死亡,有关死亡信号传递通路中相关基因的分离是研究和阐明这一细胞自杀事件的有效途径,并有助于了解TCS的作用机理和探索其用于恶性肿瘤治疗的新方式。本文采用mRNA差别显示技术。
- 李学义王广庆葛海良王颖李宁丽朱琪陈玉林周光炎
- 关键词：天花粉蛋白基因分离肿瘤治疗
- 肿瘤相关抗原OVA66单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:制备和鉴定人卵巢癌cDNA文库筛选到的肿瘤相关抗原OVA66的单克隆抗体,为研究其生物学功能提供手段。方法:采用基因重组方法构建pET32b-OVA66重组表达质粒,经大肠杆菌诱导表达OVA66融合蛋白,利用Ni-TED亲和层析技术分离纯化His-OVA66融合蛋白;采用经典的杂交瘤技术制备OVA66单克隆抗体;ELISA和Western blotting鉴定单克隆抗体的生物学和免疫学特性,并对OVA66单克隆抗体在细胞免疫荧光法、流式细胞术和免疫组化等方法中进行了初步应用。结果:成功构建重组表达载体pET32b-OVA66,并诱导表达和纯化OVA66融合蛋白。制备获得两株小鼠OVA66单克隆抗体杂交廇细胞株5F4和4G9。两株细胞分泌的抗体亚类均为IgG1,轻链为κ型,亲和力常数Ka分别为2.96×1010和0.4×1010L/mol,初步表位分析结果显示两者针对不同的抗原表位;两株抗体均可以采用细胞免疫荧光和流式细胞术检测OVA66的表达,5F4还可通过免疫组织化学检测肿瘤组织中OVA66的表达。结论:成功制备两株特异性的小鼠OVA66单克隆抗体杂交瘤细胞株,为进一步研究OVA66的生物学特性和临床应用奠定了基础。
- 荣婷婷陈惠娟张惠珍刘争春张勇王树军王颖葛海良
- 关键词：肿瘤相关抗原OVA66单克隆抗体原核表达蛋白纯化ELISA
- 腺病毒介导IL-1ra基因对小鼠局灶性脑缺血模型中ICAM-1表达抑制作用被引量：1
- 2001年
- 目的 IL 1可诱导内皮细胞粘附分子表达 ,促进缺血部位炎症和局部细胞损伤 ,应用腺病毒介导IL 1ra基因观察其对小鼠局灶性脑缺血后内皮细胞ICAM 1蛋白表达的抑制作用。方法 构建携带外源性基因、复制缺陷的人腺病毒 ,并将其作为载体介导IL 1ra基因、EcoliLacZ基因或以生理盐水分别注射于成年CD 1小鼠右侧脑室。 5d后 ,对实验小鼠分别进行脑血管腔内栓塞术 ,造成持续性中动脉栓塞 ,缺血程度由激光多普勒流量仪确定。采用组织病理切片观察病灶部位白细胞浸润和炎症反应现象 ,免疫组化染色测定血管内皮细胞ICAM 1蛋白表达和用Western印迹进行定量分析。结果 病灶侧皮质区血管内皮细胞ICAM 1蛋白表达量在IL 1ra基因组有明显下降且局部炎症反应轻微 ,与LacZ基因组和生理盐水组比较差异有显著性。ICAM 1蛋白定量分析表明 ,前组比后两组下降 5 0 %左右。但正常侧和病灶侧的脑基质神经节区无明显差异。结论 IL 1ra基因表达蛋白通过抑制IL 1的生物学功能 ,明显下调脑缺血皮质区ICAM 1蛋白表达 ,有助于减轻局部炎症。
- 葛海良徐龙Wen YEGuoyuan YANG
- 关键词：基因治疗IL-1受体拮抗剂细胞间粘附分子-1大脑中动脉栓塞
- 机体防御与免疫整合课程的实践与研究被引量：2
- 2018年
- 机体防御与免疫课程属于基础医学的横向整合课程之一,对课程内容、教学形式和考核方式均进行了改进。文章分析了国内外医学免疫学课程的实施现状,总结了该课程的实践成果。
- 陈广洁谢长宜钮晓音蒋黎华聂红路丽明席晔斌葛海良
- 关键词：整合课程免疫学教学改革
- 紫杉醇联合顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞的免疫原性被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨紫杉醇联合顺铂诱导凋亡的卵巢癌细胞被DCs交叉提呈后能否促进免疫应答。方法:常规贴壁法刺激正常人外周血单核细胞分化诱导为DCs,6d后将DCs和紫杉醇联合顺铂体外诱导的凋亡人卵巢癌细胞HO8910共同培养(凋亡组),并以冻融细胞共培养DCs组(冻融组)或单独DCs组(空白组)作对照,以激光共聚焦扫描和流式细胞仪检测不同培养组DCs的分化和成熟程度。分别将各组成熟DCs与同一来源的磁珠分选的CD8+T细胞共培养,3H-TdR掺入法检测其增殖能力;LDH释放反应检测CTL对肿瘤细胞的杀伤能力;同时应用ELISPOT图像分析仪检测致敏后CD8+T细胞INF-γ的分泌能力。结果:(1)紫杉醇联合顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞可被DCs有效吞噬,并促进DCs的成熟及其抗原提呈作用;(2)3H-TdR检测显示凋亡肿瘤细胞能诱导CD8+T细胞增殖(P<0.05);(3)LDH释放实验与ELISPOT图像分析均证明凋亡肿瘤细胞诱导的CTL杀伤活性显著强于冻融组和空白组细胞(P<0.01)。结论:紫杉醇联合顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞具有较强的免疫原性,可促进DCs分化和成熟,进一步促进CD8+T细胞增殖、分泌与杀伤功能。
- 冯勤梅王颖葛海良吴霞狄文
- 关键词：紫杉醇顺铂凋亡树突状细胞CTL免疫应答
- 《机体防御与免疫》整合课程的实施与研究
- 目的 :为顺应学校的教学改革,提高医学生的基础临床教学更好融合,整合式课程《机体防御与免疫》整合了免疫学知识和免疫系统的组织胚胎学知识,与其他七个模块、八个器官系统整合课程组合在一起,强化了基础阶段的学习,为医学生进入临...
- 陈广洁蒋黎华张勇钮晓音席晔斌葛海良
- 关键词：整合课程免疫学教学改革
- 文献传递
- 探讨高表达肿瘤抗原基因OVA66对WISH细胞生物学特征的影响被引量：1
- 2007年
- 目的分析转染OVA66基因WISH细胞的生物学特征变化,探讨该基因的功能。方法采用脂质体方法将重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染正常人羊膜细胞系WISH,经G418稳定筛选、克隆和扩增。采用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光等方法检测目的基因及其蛋白的表达,通过电镜分析细胞超微结构,体外侵袭实验检测细胞生长特性和侵袭能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力,并应用基因芯片技术检测相关基因差异表达。结果RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1-OVA66细胞OVA66基因呈高表达;Western bloting显示OVA66蛋白处出现明显的条带;电镜检测表明该基因可明显增强WISH细胞增殖能力;体外侵袭实验显示,该基因可增强WISH细胞的侵袭转移能力;软琼脂克隆形成实验表明OVA66基因可以促进单克隆性生长能力;基因芯片提示,该基因高表达影响某些基因的异常表达。结论提示OVA66基因高表达可促进细胞的增殖,利于肿瘤的侵袭和转移。
- 汤军桥李美星王树军张惠珍王颖张勇葛海良
- 关键词：OVA66肿瘤相关基因基因芯片
- 肿瘤相关抗原OVA66在人肿瘤组织中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的分析肿瘤相关抗原OVA66在人肿瘤组织中的表达特征,探讨其临床应用价值。方法采用免疫组织化学法检测多种组织肿瘤芯片和肿瘤组织标本(包括胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌和卵巢癌)及其相应的非肿瘤组织中OVA66蛋白的表达,分析其表达与组织的良恶性以及肿瘤转移和临床病理特征的关系。结果 OVA66蛋白在胃、肠、卵巢、膀胱和肾的肿瘤组织中的表达显著高于正常组织,在肺和乳腺肿瘤组织中表达较弱。膀胱癌OVA66的表达与膀胱癌的病理分级呈现相关性,肠癌和膀胱癌的淋巴转移组表达阳性率略高于未转移组,但差异无统计学意义。结论 OVA66蛋白在多数肿瘤组织中均呈高表达,在膀胱癌中与肿瘤病理分级相关,提示OVA66有可能成为新的肿瘤标志物应用于多种肿瘤的辅助诊断。
- 荣婷婷饶威陈惠娟王颖张勇沈立松葛海良
- 关键词：OVA66组织芯片免疫组织化学
