盖树鹏 作品数:87 被引量:689 H指数:16 供职机构: 青岛农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山东省农业良种工程项目 山东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 文化科学 轻工技术与工程 更多>>
牡丹休眠相关基因PsGRASs筛选、克隆和表达特性分析 被引量:7 2019年 通过筛选、克隆牡丹PsGRASs基因并进行表达模式分析,初步解析其是否参与牡丹休眠解除,以期为牡丹反季节催花提供候选基因。利用HMM(Hidden Markov Model)模型,基于GRAS基因家族的种子(Pfam号为PF03514)序列,利用BioEdit软件对牡丹花芽休眠的454测序转录组数据进行本地检索,筛选到2个具有GRAS结构域的序列。通过RACE扩增得到了其全长cDNA,其中PsGRAS1序列为2 308 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)为1 848 bp,编码615个氨基酸;PsGRAS2为2 034bp,ORF为1560bp,编码518个氨基酸,两个编码PsGRASs蛋白的同源性为19.87%。进化树结果表明,PsGRAS1蛋白与拟南芥GRAS家族中的DELLA亚家族的GAI和RGLs聚到一个大的分支,PsGRAS2蛋白与拟南芥HAMs(AtSCL6/15/22/26/27)并为一支,说明PsGRAS1和PsGRAS2来自GRAS家族的两个不同分支。组织表达结果显示PsGRAS1和PsGRAS2在牡丹初花期不同组织中表达水平不同,PsGRAS1在叶中表达水平最高,在雄蕊中最低;而PsGRAS2在苞片中表达水平最高,在花瓣中最低。在牡丹花芽休眠解除过程中,PsGRAS1呈下调趋势,低温28 d表达水平最低,而PsGRAS2呈先上调后下调趋势,低温14 d表达水平最高。在外源GA3处理7 d的牡丹花芽中,PsGRAS1的表达显著下降,而PsGRAS2显著提高。这表明PsGRAS1和PsGRAS2都参与了休眠过程,但功能不同。 吴红 刘春英 付祥梅 盖树鹏 张玉喜关键词:GRAS 休眠 赤霉素 基因工程实践教学改革的探索 被引量:1 2012年 本文立足于培养学生实践和创新能力,从优化实验教学内容和教学体系,完善教学设计,丰富实践教学形式,改革考核方式等方面对基因工程实验教学进行了改革探索,取得了较好效果。 盖树鹏关键词:基因工程 实践教学 牡丹丙酮酸脱氢酶基因PsPDH的克隆和表达特性分析 被引量:1 2016年 根据454测序得到的丙酮酸脱氢酶基因PDH的部分cDNA片段设计引物,运用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术扩增得到牡丹(Paeonia suffruticosa)PDH基因的全长cDNA,命名为PsPDH。PsPDH cDNA序列全长为1 313 bp,包括132 bp的5′非编码区、173 bp的3′非编码区和1 008 bp的编码区,共编码335个氨基酸,其分子量为35.844 kDa。推测的氨基酸序列包括17个可能的磷酸化位点,其中包括12个Ser位点,这可能与活性位点的调节有关。亚细胞定位预测该蛋白位于线粒体基质中。同源性比对表明,PsPDH与葡萄(Vitis vinifera)VvPDH同源性最高,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtPDH的相似性最低。实时定量PCR(quantitative real-time PCR)结果表明PsPDH基因在初花期叶片、根和心皮中表达水平较高,在人工低温处理14 d的牡丹花芽中表达水平最高,PDH的酶活力变化趋势与该基因表达趋势一致,可见,PsPDH基因的活化可能是促进花芽休眠解除的原因。本研究为深入解析休眠解除中呼吸代谢的调控提供参考。 杨丽金 甘甜 盖树鹏 刘春英 张玉喜关键词:克隆 生物信息学分析 酶活力 牡丹PsWRKY基因的克隆和表达特性分析 被引量:8 2015年 以课题组前期454高通量测序筛选到的类WRKY基因的部分c DNA序列为基础,通过RACE扩增、测序和序列拼接获得了牡丹1 091 bp Ps WRKY基因全长c DNA,包括5′UTR区57 bp,3′UTR区92 bp,编码框942 bp,推测编码313个氨基酸序列。生物信息学分析结果表明Ps WRKY基因推测氨基酸序列中不具有信号肽序列,暗示其不是分泌性蛋白;在氨基酸序列中存在核定位信号,与亚细胞定位预测结果相一致,这与其作为转录因子行使功能相关。与其他已知植物的WRKY蛋白的同源性分析结果表明牡丹Ps WRKY与葡萄Vv WRKY的同源性最高,为54%。实时定量PCR分析Ps WRKY基因的表达特性结果显示Ps WRKY基因在初花期牡丹的叶片和心皮中转录水平较高。在人工低温处理的牡丹花芽的休眠解除过程中,PsWRKY基因受低温诱导,且转录水平在整个休眠进程中呈上调表达趋势。研究结果为进一步解析牡丹花芽的休眠解除的分子机制提供理论依据。 石红梅 战新梅 管世铭 盖树鹏 刘春英 张玉喜关键词:PS WRKY RACE 生物信息学分析 休眠解除过程中牡丹花芽均一化酵母杂交文库的构建 被引量:1 2012年 以不同低温处理的牡丹花芽为试材,采用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术结合SMARTTM(switching mecha-nism at 5'end of RNA transcript)建库技术合成cDNA,cDNA与pGADT7-Rec重组并转化酵母AH109,构建了冬季牡丹低温累积进程中的花芽均一化cDNA文库。经检测,原始文库滴度为1.77×106cfu/ml,库容量为2.3×108。对管家基因18S rRNA均一化前后丰度检测表明,均一化程度>26,随机挑取了188个克隆,PCR方法测得文库重组率大于95%,插入片段平均长度1200bp,构建的文库质量较高。该文库为进一步通过酵母杂交技术筛选低温解除牡丹休眠进程中受低温调控的转录因子和互作蛋白,进而为构建低温解除休眠的基因调控网络奠定了基础。 盖树鹏 穆平 张风 董磊 郑国生关键词:休眠 一种促进反季节牡丹花芽萌动和枝条生长的方法 本发明公开了一种促进反季节牡丹花芽萌动和枝条生长的方法,属于植物领域,所述方法对牡丹进行低温处理14d然后再用50μmol/L的5‑氮胞苷涂抹处理,连续处理5d,每天涂抹一次,可以降低牡丹花芽甲基化水平,提前解除休眠,发... 盖树鹏 张玉喜 刘春英 盖伟玲文献传递 6个玉米杂交种种子纯度的SSR鉴定 被引量:20 2010年 玉米杂交种纯度是影响玉米产业发展的重要因素之一,建立快速、准确可靠的纯度检测技术是控制杂交种纯度的有效措施。从30对SSR引物中筛选出6对表现为双亲互补型的引物,建立了6份杂交种纯度鉴定的SSR体系。Umc1002、bnlg1112、bnlg238、Umc1153、phi072、bnlg240可分别用于玉米杂交种农大108、浚单20、郑单958、莱农14、莱农15和鲁玉16的纯度检测。双亲互补型等位变异基因频率在0.028~0.072之间,可较准确地检出样品中的自交株和大部分异型株。SSR鉴定玉米杂交种纯度结果略低于幼苗鉴定,但二者差异不显著,相关系数为r=0.8434。本试验建立的SSR技术体系可用于6个玉米杂交种纯度的快速检测。 盖树鹏 盖伟玲 王日新关键词:玉米 杂交种 SSR 纯度 木本植物芽内休眠机制的研究进展 被引量:3 2008年 木本植物芽的内休眠是植物经过长期演化而获得的一种对环境及季节性变化的生物学适应性,其机制较为复杂。了解内休眠的机制,调控芽的休眠与萌发,具有重要的理论意义和应用价值。在探讨内休眠概念的基础上,重点阐述内休眠诱导及解除的影响因素、内休眠过程中的代谢变化、顶端分生组织内细胞间通讯及细胞周期调控、内休眠相关基因等方面的研究进展,提出今后内休眠调控机制的研究重点。 黄鑫 戴思兰 郑国生 盖树鹏SRAP构建玉米杂交种指纹图谱的研究 被引量:19 2009年 SRAP(相关序列扩增多态性)是近年来发展起来的一种新型的DNA标记技术,作者旨在探讨SRAP技术用于玉米品种鉴定的可行性,并建立相应技术体系。采用25个引物组合对19个玉米杂交种进行了SRAP扩增。19个引物组合扩增出了多态性条带,共扩增出152条多态性条带,平均每个引物组合产生8条多态性带,多态性频率从44.4%(me4/em3)~91.7%(me4/em1)。19个引物组合检测到的平均PIC为0.879,而引物组合me4/em1可区分供试的所有19个玉米品种。进一步筛选了5对引物,构建了供试材料的指纹图谱,为SRAP用于玉米鉴定奠定了基础。SRAP具有很高的分辨率,而且操作简便、稳定可靠,具备了用于作物品种鉴定的条件,用于玉米品种鉴定是可行的,可作为SSR技术的重要补充。 黄进勇 盖树鹏 张恩盈 夏连胜关键词:玉米杂交种 SRAP 指纹图谱 重组CP多克隆抗体在马铃薯卷叶病毒DAS-ELISA检测中的应用 被引量:11 2011年 先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用于感染PLRV病叶的检测,DAS-ELISA反应呈阳性,结果表明,用重组CP制备的多克隆抗体可成功地用于PLRV的DAS-ELISA检测。本研究为PLRV重组CP多克隆抗体的大量制备及ELISA检测奠定了基础。 李楠楠 左玉玲 隋炯明 盖树鹏 樊连梅 李广存 郭宝太关键词:马铃薯卷叶病毒 多克隆抗体 酶标抗体 DAS-ELISA