王青青
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- BK通道对大鼠膀胱Cajal间质细胞兴奋性的调控作用被引量：2
- 2014年
- 目的观察BK通道在大鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)中的表达,探讨其对膀胱ICCs的调节功能。方法健康雌性清洁SD大鼠48只,Western blot和免疫荧光双标观测膀胱ICCs BK通道表达情况,膜片钳记录膀胱ICCs BK通道电流,激光共聚焦检测膀胱ICCs钙内流。结果膀胱ICCs表达起主要功能的BK通道α、β1亚基,记录到ICCs上BK通道外向电流。通道特异性阻断剂蝎毒素(IBTX)可明显抑制膀胱ICCs细胞BK电流,+80 mV下药物作用后相对电流由(23.627±3.897)pA降低为(3.603±1.885)pA(P<0.05)。IBTX可增加膀胱ICCs钙离子内流,胞内钙荧光强度(F1/F0)从(1.00±0.07)增加到(1.84±0.45),(P<0.05)。结论膀胱ICCs表达BK通道,阻断BK通道可增加膀胱ICCs的兴奋性。
- 白新宇董兴有王亮赵江赵滨王青青李龙坤
- 关键词：大电导钙激活钾通道膀胱膜片钳
- 改良大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离法及膜片钳应用被引量：3
- 2013年
- 目的改良大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离方法,为利用膜片钳技术研究膀胱疾病提供必要的技术平台。方法采用木瓜蛋白酶和胶原酶Ⅱ,采用一步法和二步法,分别消化5只新生和成年Wistar大鼠膀胱组织,在膜片钳工作台上分别对平滑肌细胞钠钙交换体电流行全细胞记录。结果建立了稳定的新生和成年大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离方法。新生大鼠钠钙交换体(Na+/Ca2+exchanger,NCX)电流密度(pA/pF)为[(0.21±0.07),n=4],成年大鼠NCX电流密度为[(0.19±0.06),n=6],差异有统计学意义(P<0.05)。KB-R7943在5μm浓度下,有阻滞NCX正向模式的能力。结论本方法改良了大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离,并成功应用于膜片钳技术检测。
- 钟晓王青青何鹏邓建平李龙坤黄赤兵宋波
- 关键词：膀胱平滑肌膜片钳
- 钙库调控的钙离子通道对大鼠膀胱平滑肌收缩性调控的研究被引量：5
- 2014年
- 目的分析胞内钙库调控的钙离子通道(store operated calcium channels,SOCCs)在大鼠膀胱平滑肌中的功能。方法 RT-PCR检测SOCCs相关蛋白基因表达;使用SOCCs的激动剂CPA(10μmol/L)以及抑制剂SKF-96365(10μmol/L),采用离体肌条的方法观察其肌肉的收缩,全细胞膜片钳技术观察膀胱平滑肌细胞电流,激光共聚焦显微镜观察其膀胱平滑肌细胞内钙离子变化。结果 RT-PCR检测到TRPC3、TRPC4和STIM1基因表达。加入CPA激活SOCCs后,离体肌条实验结果显示膀胱平滑肌离体肌条收缩频率为(5.937 5±1.108 0)/min,比加入CPA前明显增加(P<0.05),收缩幅度为(0.067 1±0.027 0)g,比加入CPA前明显降低(P<0.05);膜片钳实验结果显示钙电流较加入CPA前显著增加,-80 mV电流密度为(-3.127 1±0.908 7)pA/pF,20 mV电流密度为(1.048 1±0.322 5)pA/pF(P<0.05);激光共聚焦显微镜实验结果显示钙离子相对荧光(1.150 7±0.212 1)较加入CPA前显著增加(P<0.05)。加入抑制剂SKF-96365抑制SOCCs后,离体肌条收缩频率为(5.081 3±1.129 5)/min,较加入CPA后显著减缓(P<0.05),收缩幅度为(0.079 0±0.033 0)g,较加入CPA后显著增加(P<0.05);膜片钳显示钙电流较加入CPA后显著减少,-80 mV电流密度为(-2.678 1±0.804 4)pA/pF,20 mV电流密度为(0.907 7±0.346 2)pA/pF(P<0.05);激光共聚焦显微镜实验结果显示细胞内钙离子相对荧光(1.028 9±0.204 7)较加入CPA后显著减少(P<0.05)。结论膀胱平滑肌中可以表达SOCCs相关的通道,膀胱平滑肌的收缩性受到SOCCs的影响。
- 赵滨白新宇董兴有王青青李龙坤宋波
- 关键词：膀胱平滑肌钙离子
- 长链非编码RNA KCNQ1DN对尿源干细胞的干性调控研究被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1DN在尿源干细胞干性调控中的作用。方法:收集健康成人(n=6)尿液,提取尿源干细胞并传代培养,分别收集P3、P5和P7代尿源干细胞,并应用实时荧光定量PCR(RTPCR)检测KCNQ1DN基因表达水平。构建靶向干扰KCNQ1DN的慢病毒载体LV3-shKCNQ1DN,转染P2代尿源干细胞并培养96小时后荧光显微镜观察感染效率,RT-PCR检测KCNQ1DN的表达,CCK8法检测细胞的增殖,RT-PCR和Western blotting检测干性相关转录因子c-Myc、Nanog、Rex1的mRNA及蛋白的表达。结果:随着尿源干细胞传代代数的增加,KCNQ1DN的表达量逐渐升高(P<0.05)。shKCNQ1DN转染尿源干细胞后KCNQ1DN的表达显著降低(P<0.01),敲低尿源干细胞中KCNQ1DN的表达能够促进尿源干细胞的增殖并上调干性相关转录因子c-Myc、Nanog和Rex1mRNA及蛋白的表达。结论:随着尿源干细胞的生长,长链非编码RNA KCNQ1DN的表达逐步被激活,并对尿源干细胞的干性起到负性调控作用。
- 吴清剑陈伟杨帆方针强赵江王青青杨振兴张远宁李龙坤
- 关键词：干性长链非编码RNA
