李仲艺
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划厦门市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 重组人乳头瘤病毒31型L1蛋白的基础及应用研究
- 人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)是一种小的无包膜DNA病毒，能够引起生殖器部位的多种良性及恶性病变。其中以宫颈癌危害最为严重。目前，世界范围内每年宫颈癌新发病例约50万，位居女性常见癌症的第...
- 李仲艺
- 关键词：人乳头瘤病毒L1蛋白宫颈癌
- 人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析被引量：10
- 2009年
- 利用大肠杆菌表达系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,经过纯化和重组装过程获得HPV18病毒样颗粒(VLPs),研究其免疫原性和诱发中和抗体生成的水平。首先,提取HPV18的基因组DNA,通过PCR扩增获得HPV18 L1基因片段,将其插入pTrxFus表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达HPV18 L1蛋白;其次,通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和疏水相互作用层析获得高纯度的HPV18 L1蛋白,而后透析去除预先加入的还原剂DTT,使HPV18 L1蛋白自发组装成VLPs;最后,通过动态光散射技术和透射电子显微镜鉴定HPV18 VLPs的大小和形态,利用假病毒细胞中和实验评价HPV18 VLPs在实验动物体内的免疫原性和中和抗体生成水平。结果表明,HPV18L1蛋白可以在大肠杆菌表达系统中以可溶形式表达,经过纯化的HPV18 L1蛋白可以自发组装成为半径约为29.34nm、与HPV病毒外观相似的VLP。该VLPs在小鼠体内的中和抗体半数有效剂量为0.006μg,在兔及山羊体内诱导中和抗体滴度高达107。总之,本研究利用原核表达系统可简便高效地获得具有高度免疫原性的HPV18 VLPs,为HPV18预防性疫苗的开发奠定了基础,具有重要的应用意义。
- 谢明辉李少伟沈文通李仲艺庄玉娣莫小兵顾颖吴婷张军夏宁邵
- 关键词：大肠杆菌表达系统人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒免疫原性中和抗体
- 重组毕赤酵母高密度发酵表达H5N1禽流感病毒糖蛋白被引量：4
- 2009年
- 在10L发酵罐中,对高致病性禽流感病毒H5N1糖蛋白HA1在重组毕赤酵母中的表达发酵工艺进行了研究。通过分批补料培养方法探讨不同培养温度、诱导温度、补料方式、微量元素等因素对菌体的生长以及重组蛋白表达和活性的影响。结果表明,菌种培养和诱导温度均为25oC时,菌体的生长、分泌表达量和与广谱中和抗体的反应活性较好;微量元素是影响重组HA1蛋白生物活性的重要因素;通过优化高密度发酵工艺,H5N1病毒糖蛋白HA1在发酵罐中的表达量比摇瓶培养提高10.5倍,达到约120mg/L,为大规模制备高致病性禽流感病毒的HA1蛋白奠定了基础。
- 杨坤宇何芳萍李少伟张佳鸿林庆山陈振钦李仲艺张军夏宁邵
- 关键词：毕赤酵母高致病性禽流感病毒H5N1HA1
- 大肠杆菌来源的人乳头瘤病毒11型病毒样颗粒的制备及其免疫原性被引量：7
- 2009年
- 【目的】利用大肠杆菌表达系统制备人乳头瘤病毒11型病毒样颗粒(HPV11VLPs),并对其免疫原性和所诱导中和抗体的型交叉反应性进行研究。【方法】在大肠杆菌ER2566中非融合表达HPV11-L1蛋白,并通过离子交换层析,疏水相互作用层析其进行纯化。纯化后的HPV11-L1经体外组装形成病毒样颗粒,通过动态光散射,透射电镜检测其形态,并通过多种HPV型别假病毒中和实验评价HPV11VLPs的免疫原性及型交叉反应性。【结果】HPV11-L1蛋白在大肠杆菌中可以以可溶形式表达。经过硫酸铵沉淀、离子交换和疏水相互作用色谱纯化,目的蛋白纯度能够达到95%以上。纯化的HPV11-L1蛋白去除还原剂DTT后,能够在体外自发组装成为直径约50nm、与天然病毒颗粒形态高度相似的VLPs。动物实验结果显示,该病毒样颗粒在小鼠体内的中和抗体半数有效剂量(ED50)为0.031μg,在小鼠体内可诱导高达106的中和抗体滴度,这些中和抗体与HPV6有较好的交叉反应,与HPV18有一定的交叉反应,而与HPV16没有明显的交叉反应,这一结果与分子进化树的分析相一致。【结论】本研究利用原核表达系统获得了具有较高免疫原性的HPV11VLPs,为HPV11预防性疫苗的研制奠定了良好的基础。
- 杨春燕李少伟王晋魏旻希黄博庄玉娣李仲艺潘晖榕张军夏宁邵
- 关键词：人乳头瘤病毒11型大肠杆菌表达系统病毒样颗粒免疫原性
