朱云娟
- 作品数：33 被引量：43H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人促甲状腺激素受体膜外区N端基因免疫诱导Balb／c小鼠实验性格雷夫斯病被引量：2
- 2008年
- 目的观察人促甲状腺激素受体（human thyrotropin receptor，hTSHR）膜外区N端（氨基酸29-280区域）的抗原性及其与格雷夫斯病（Graves病）发病的关系。方法提取人正常甲状腺组织总RNA．反转录后进行PCR，扩增产物与表达载体pcDNA3．1进行连接得到重组质粒pcDNA3．1／hTSHR188-940bp。用重组质粒免疫Balb／c小鼠，检测小鼠血清中甲状腺素（thyroxin，T4）、抗TSHR抗体（anti-TSHR antibody，TRAb）、甲状腺刺激抗体（thyroid stimulating antibody，TSAb）水平的变化，光镜下观察甲状腺组织的结构变化。结果 PCR扩增得到hTSHR膜外区N端753bp的基因片段hTSHRl％～％bD，该片段与表达载体pcDNA3．1连接后，经HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHR180-940bp片段插入序列和方向正确。用pcDNA3．1／hTSHR180-940bp免疫Balb／c小鼠后发现，血清TRAb水平从第6周（0．148±0．018）开始升高，到第10周（0．134±0．011）一直维持在比较高的水平，与第0周（0．106±0．006）比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。血清T4、TSAb水平在第10周[（62．20±12．77）μg／L、1．392±0．615]出现明显升高，与第0周[（41．02±7．97）μg／L、0．864±0．076]比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。甲状腺病理学检查发现大部分小鼠甲状腺滤泡上皮增生，滤泡腔增大，偶见炎细胞浸润。结论TSHR188-940bp编码的hTSHR膜外区N端氨基酸29-280区域抗原决定簇使机体产生TSAb，从而导致甲状腺功能亢进，出现类Graves病表现，说明偈HR的这个区域与Graves病密切相关，可能是导致该病的重要因素。
- 朱云娟赵紫琴李兰英陆凤先姚智
- 关键词：受体促甲状腺素格雷夫斯病
- 反义肽核酸对促甲状腺激素受体mRNA表达的影响
- 2012年
- 目的探讨反义肽核酸（asPNA）对大鼠甲状腺细胞的细胞膜表面促甲状腺激素受体（TSHR）表达的影响。方法设计两种与TSHRmRNA不同片段互补的asPNA，分别为核定位信号-asPNA1（NLS—asPNA1）和NLS．asPNA2，另外合成一段非相关的干扰肽核酸（NLS—scrPNA）序列，用荧光显微镜观察NLS—asPNA能否进入细胞，采用噻唑蓝法检测asPNA对细胞是否具有毒性作用，然后用实时定量RT—PCR检测NLS—asPNA对TSHRmRNA表达的影响。结果荧光显微镜观察发现，asPNA可以进入到细胞中去。噻唑蓝法检测发现asPNA对细胞没有毒性作用。实时定量RT—PCR结果显示，NLS—asPNA1和NLS—asPNA2可以抑制TSHRmRNA表达，表现为随着NLS—asPNA与细胞培养时间的延长，TSHRcDNA的拷贝数逐渐下降，且呈现时间依赖性，而NLS．scrPNA对TSHRtuRNA的表达没有明显的影响。结论NLS—asPNA可以进入到细胞中去，并且能够下调TSHRmRNA的表达。
- 黄丽娟陈宁叶静沈炳玲朱云娟孟涛张志洋朱学良
- 关键词：受体促甲状腺素RNA信使
- 过继转移日本血吸虫感染鼠DC亚群对过敏性哮喘肺组织病理改变及CCL2表达的抑制作用被引量：2
- 2012年
- 目的通过过继转移日本血吸虫感染鼠树突状细胞(DC)亚群,探讨DC亚群在抑制过敏性哮喘中的作用。方法用CD8α和CD11c磁珠分离纯化日本血吸虫感染鼠DC亚群,分别获得CD8α-CD11c+DC和CD8α+CD11c+DC。将24只BALB/c小鼠随机分为4组:A组为健康对照组,CD8α-DC/OVA组(B组)为过继转移日本血吸虫感染鼠DCCD8α-CD11c+亚群并诱发过敏性哮喘组,CD8α+DC/OVA组(C组)为过继转移日本血吸虫感染鼠DC CD8α+CD11c+亚群并诱发过敏性哮喘组,OVA组(D组)为单纯诱发过敏性哮喘组。B、C两组小鼠分别经尾静脉过继转移5×105 DC亚群,1h后B、C和D组均开始诱发哮喘。4周后处死小鼠,取左肺做病理切片和免疫组织化学染色,观察炎症变化,检测肺组织CCL2表达情况。结果与C组和D组比较,B组肺部炎症显著减轻,按照Underwood标准,A、B、C和D等4组总评分分别为0、7.67±2.34、11.17±1.47和11.75±2.22,差异有统计学意义(P<0.05)。4组小鼠肺组织CCL2平均吸光度值分别为0.0327±0.0154、0.3967±0.0250、0.5274±0.0281和0.5631±0.0282,差异有统计学意义(P<0.05)。结论日本血吸虫感染鼠CD8α-CD11c+DC亚群对过敏性哮喘小鼠肺组织病理改变及CCL2的表达有抑制作用。
- 申妍姣刘俊燕杨秀珍朱云娟李娜路平李路远王世忠吴增强安桂珍纪伟华刘佩梅
- 关键词：过敏性哮喘树突状细胞亚群过继转移免疫组化
- CD4^+ CD25^+调节性T细胞在血吸虫可溶性虫卵抗原影响哮喘中的作用研究被引量：8
- 2011年
- 目的研究血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)与哮喘发生的关系及其对CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)及相关基因Foxp3表达的影响。方法 BALB/C小鼠腹腔及足垫共注射SEA 50μg/只,每周1次,共4次。对照组注射生理盐水。然后用卵清白蛋白(OVA)诱导小鼠产生过敏性哮喘。剖杀小鼠,取肺组织,做病理学检查;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),涂片、染色后进行细胞分类计数;分离脾细胞,用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)占CD4+T细胞的比例;提取脾脏RNA,以逆转录得到的cDNA为模板扩增Foxp3基因,检测脾脏Foxp3mRNA表达水平。结果 SEA免疫并OVA致哮喘组小鼠肺组织炎症较OVA单纯哮喘对照组轻,只有少量炎性细胞浸润。BALF涂片染色检查SEA免疫组BALF中的细胞密度低于对照组,其中嗜酸粒细胞占总细胞数的(2.22±1.52)%,对照组占(19.93±4.08)%,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测SEA免疫组小鼠脾细胞中CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞总数的(32.24±2.19)%,对照组占(27.41±2.87)%,差异有统计学意义(P<0.05);PCR检测SEA免疫组脾细胞Foxp3mRNA表达水平高于对照组。结论 SEA对哮喘的发生有一定抑制作用,可能通过CD4+CD25+Treg影响机体的免疫调节机制。
- 朱云娟杨秀珍刘霞吴增强纪伟华安桂珍沈悦云刘金霞李健刘佩梅
- 关键词：调节性T细胞哮喘FOXP3
- 过继转移日本血吸虫感染鼠CD8α^-DC抑制OVA诱导的过敏性哮喘研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum,SJ)感染鼠树突状细胞(Dendritic cell,DC)亚型对过敏性哮喘的抑制作用及其机制。方法采用MACS方法从SJ感染鼠脾脏中提取CD8α+DC(SJCD8α+DC)和CD8α-DC(SJCD8α-DC),分别过继转移给BALB/c小鼠,并用OVA诱发哮喘(SJCD8α+组和SJCD8α-组),以正常组(Normal组)和单纯诱发哮喘组(Asthma组)作为对照。取各组小鼠肺组织作石蜡切片,HE染色后观察肺组织病理变化。采用qRTPCR检测SJCD8α+DC和SJCD8α-DC中IL-12和IL-10mRNA水平,以正常鼠CD8α+DC(NCD8α+DC)和正常鼠CD8α-DC(NCD8α-DC)作为对照。用ELISA方法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)和脾细胞培养上清中IL-10水平。结果肺组织病理学检查显示DC过继转移组过敏性哮喘被抑制,其中SJCD8α-组的抑制效果强于SJCD8α+组。SJCD8α-DC IL-10mRNA表达水平高于SJCD8α+DC(P<0.05)。并且,SJCD8α-组的BALF和脾细胞培养上清中IL-10蛋白表达水平明显高于SJCD8α+组(P<0.01,P<0.01)。SJCD8α-DC和SJCD8α+DC的IL-10mRNA水平分别为1.73±0.24和1.03±0.03(GAPDH%)。SJCD8α-组和SJCD8α+组的BALF IL-10蛋白水平分别为411.21±6.38pg/ml和202.88±25.30pg/ml,两组的脾细胞培养上清中IL-10蛋白水平分别为841.53±7.75pg/ml和254.16±21.46pg/ml。结论过继转移SJCD8α-DC可能通过高表达IL-10抑制OVA诱导的过敏性哮喘。
- 樊蒙雨路平陈苓苓纪伟华任继玲朱云娟胡立志刘佩梅
- 关键词：日本血吸虫过敏性哮喘
- 日本血吸虫可溶性虫卵抗原免疫小鼠CD11c^+CD8_α^-DC对过敏性哮喘的抑制作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫小鼠CD11c+CD8α-树突状细胞(DC)亚群对卵清白蛋白(OVA)诱发的过敏性哮喘的抑制作用。方法 BALB/c小鼠经腹腔及足垫注射SEA 50μg/只,每周1次,共4次。用抗体包被的免疫磁珠分离小鼠脾CD11c+CD8α+DC与CD11c+CD8α-DC亚群。另取18只BALB/c小鼠,随机分为4组,A组为健康对照组,B组为OVA致敏单纯哮喘组,C组为过继转移SEA免疫CD11c+CD8α+DC组,D组为过继转移SEA免疫CD11c+CD8α-DC组。C、D组小鼠分别经尾静脉过继转移5×105个CD11c+CD8α+DC和5×105个CD11c+CD8α-DC,1h后B、C、D组小鼠同时用OVA诱发哮喘,4周后剖杀,取肺组织,做病理切片,经苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察肺部炎症变化。结果 A组小鼠肺组织无炎症反应;B组小鼠肺组织炎症反应广泛且严重,在支气管及肺泡周围有大量炎性细胞浸润;C组小鼠肺组织炎症反应仍较明显;D组小鼠肺组织炎症反应较B、C组显著减轻,仅有少量炎细胞浸润。4组小鼠按照Underwood标准进行病理评分,总分分别为0、14.00±1.00、12.33±0.58和7.20±1.30,差异有统计学意义(P<0.05)。结论日本血吸虫SEA免疫小鼠CD11c+CD8α-DC亚群对过敏性哮喘有抑制作用。
- 李娜安桂珍朱云娟刘俊燕任继玲杨秀珍吴增强纪伟华申妍娇路平李路远刘佩梅
- 关键词：血吸虫可溶性虫卵抗原过敏性哮喘
- TSHR反义肽核酸对Graves'病动物模型的治疗作用
- 目的：制备Graves’病动物模型，研究TSHRasPNA对Graves’病动物模型的治疗作用。
方法：1.将两个hTSHR膜外区片段(氨基酸29-280，氨基酸314-418)基因的cDNA序列重组到真核表达...
- 朱云娟
- 关键词：肽核酸基因免疫动物模型
- 抗弓形虫速殖子单克隆抗体的制备与特性研究
- 该实验利用杂交瘤技术制备了抗弓形虫速殖子单克隆抗体(Mab).采用间接ELISA法对其活性进行了测定,利用琼脂糖免疫双扩散方法鉴定其亚类,并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析...
- 朱云娟
- 关键词：弓形虫单克隆抗体SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 血吸虫可溶性虫卵抗原对哮喘的抑制作用及机制研究
- 2012年
- 目的研究血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)对哮喘发生的抑制作用及免疫调节机制。方法BALB/C小鼠腹腔及足垫注射SEA 50μg/只,每周1次,共4次。对照组注射生理盐水。然后用卵清白蛋白(OVA)诱导小鼠产生过敏性哮喘,剖杀小鼠,取肺组织进行病理学检查;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),涂片、染色后进行细胞分类计数;分离脾细胞,用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)占CD4+T细胞的比例。结果 SEA免疫并OVA致哮喘组小鼠肺组织炎症明显轻于OVA单纯哮喘对照组,只有少量炎性细胞浸润。BALF涂片染色后发现SEA免疫组BALF中的细胞密度低于对照组,其中嗜酸性粒细胞占总细胞数的比例(2.2±1.5)%明显低于对照组(19.9±4.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测结果发现SEA免疫组小鼠脾细胞中CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞总数的(32.2±2.2)%,明显高于对照组(27.4±2.9)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SEA对哮喘的发生有一定的抑制作用,其机制可能是通过CD4+CD25+调节性T细胞影响机体的免疫调节机制。
- 朱云娟杨秀珍刘霞吴增强纪伟华安桂珍沈悦云刘金霞刘佩梅
- 关键词：哮喘
- 实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达被引量：1
- 2005年
- 目的:建立外标准法SYBRGREENI实时定量(real-time)RT-PCR方法,以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB/c小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达的影响。方法:取正常BALB/c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA,逆转录后进行PCR,得到333bp扩增产物。经回收纯化后作为real-timePCR的标准品,稀释为106、105、104、103、102、101拷贝,制作标准曲线;并同时进行普通PCR,比较其灵敏度。优化反应条件使溶解曲线有特异扩增。检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达。结果:建立的外标准法SYBRGREENI实时定量RT-PCR方法可以灵敏的检测到10copy的核酸,灵敏度为普通PCR的104倍;溶解曲线只有特异峰,溶解温度为82.9℃。没有明显的引物二聚体和非特异峰出现。不同标准点批间变异系数范围为5.8%￣14.3%(n=6)。与对照组比较,TSHR大分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺组织TSHRmRNA水平显著升高(P<0.05)。结论:外标准法SYBRGREENI实时定量RT-PCR具有灵敏度高,特异性强,重复性好的特点,比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHRmRNA的水平。
- 朱云娟黄丽娟陈宁沈炳玲陆凤先
- 关键词：TSHRMRNASYBR
