施程洪
- 作品数：9 被引量：26H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2009年
- 从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31000的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。
- 谢芳张强颜新敏吴国华李健朱海霞郭爱疆韩若婵施程洪鞠厚斌朱彩珠岳城才学鹏
- 关键词：山羊痘病毒P32基因毕赤酵母
- 山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31 kD的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。
- 谢芳张强颜新敏吴国华李健朱海霞郭爱疆韩若婵施程洪鞠厚斌朱彩珠岳城才学鹏
- 关键词：山羊痘病毒P32基因毕赤酵母
- 腔阔盘吸虫18S rRNA及亲缘关系分析
- 利用分子生物学技术,研究腔阔盘吸虫的分类。方法提取腔阔盘吸虫基因组DNA,利用保守引物, PCR扩增18S rRNA片段并测序。应用DNAStar和MEGA3软件,分析腔阔盘吸虫与其它双腔吸虫18S rRNA的同源性,在...
- 郑亚东骆学农施程洪宗瑞谦景志忠才学鹏
- 关键词：分子分类
- 文献传递
- 山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA复制非必需区的筛选被引量：2
- 2007年
- 提取山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA，用HindⅢ酶切，随机克隆到pUC18质粒中，限制性内切酶片段电泳分析和序列测定结果表明，克隆到4个不同大小的HindⅢ片段pUA、pUB、pUC和pUD。随后，将它们和羊痘病毒Pellor（AY077835）株进行了同源性比较，发现核苷酸同源性为90。0％～94．5％，氨基酸同源性为83．0％～91．4％。选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入P11P7.5-LacZ报告基因，构建了pUAl、pUBl、pUCl和pUDl共4个重组载体质粒。通过脂质体分别转染山羊痘病毒感染的BHK-21细胞，在X-gal存在条件下经蓝白斑筛选重组病毒，获得1株重组病毒，证明筛选出了1个复制非必需区片段。
- 施程洪张强吴国华颜新敏鞠厚斌李健朱海霞朱彩珠谢芳韩若婵才学鹏
- 关键词：山羊痘病毒基因克隆转染
- 山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定被引量：9
- 2007年
- 转移载体的构建是重组羊痘病毒构建的重要环节,在分析羊痘病毒基因组的基础上,以TK基因为插入靶序列,经PCR、酶切鉴定,获得了带有EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点的TK基因片段。将此片段与经相同酶切的pUC119载体连接,构建转移载体pUC119-TK,并且以此为基础构建表达绿色荧光蛋白山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP。将pTK-P7.5-GFP转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因得到表达,这为羊痘病毒载体系统的进一步开发奠定了基础。
- 鞠厚斌张强郑海学施程洪韩若婵谢芳吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠卫广森
- 关键词：羊痘病毒TK基因
- 羊痘病毒多重PCR检测方法的建立被引量：5
- 2008年
- 根据羊痘病毒(CaPV)末端反向重复序列中的一段序列和P32基因序列,设计合成了2对引物,通过确定最佳的PCR反应条件,建立了检测羊痘病毒核酸的多重PCR方法。结果显示,用这2对引物均能扩增出羊痘病毒相应的特异性片段,而用此PCR方法检测口蹄疫病毒和羊口疮病毒,结果均为阴性。与中和试验比较,建立的PCR方法具有更好的敏感性。表明,该PCR方法可对组织病料中的CaPV进行快速检测。
- 韩若婵张强吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠谢芳鞠厚斌施程洪才学鹏
- 关键词：羊痘病毒多重PCR特异性敏感性
- 山羊痘弱毒疫苗株TK基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2007年
- 以提取的山羊痘弱毒疫苗株HLJ—V9 DNA为模板，设计特异性引物并进行PCR扩增，获得了2078bp的DNA片段，并将PCR产物克隆至pGEM—T Easy载体。酶切鉴定、PCR鉴定和测序结果表明，成功获得了TK基因，获得的TK基因内存在一个Kpn Ⅰ酶切位点和编码区的早期转录终止信号TTTTTN（T）T。核苷酸和氨基酸同源性分析表明，弱毒疫苗毒株HLJ—V9 TK基因与参考毒株的同源性在95．5％～100％之间，说明羊痘病毒TK基因具有高度的保守性。
- 鞠厚斌张强袁明施程洪韩若婵谢芳吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠卫广森
- 关键词：山羊痘病毒TK基因
- 减毒羊痘病毒基因复制非必需片段的筛选与鉴定
- 羊痘/(山羊痘和绵羊痘/)是由羊痘病毒/(Capripoxvirus,CPV/)感染山羊和绵羊等偶蹄动物引起的一种急性、热性、接触性传染病,被世界动物卫生组织/(OIE/)列为A类传染病,我国将其列为一类传染病。
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- 施程洪
- 关键词：羊痘病毒转染
- 文献传递
- 腔阔盘吸虫18S rRNA及亲缘关系分析被引量：6
- 2006年
- 目的利用分子生物学技术,研究腔阔盘吸虫的分类。方法提取腔阔盘吸虫基因组DNA,利用保守引物,PCR扩增18SrRNA片段并测序。应用DNAStar和MEGA3软件,分析腔阔盘吸虫与其他双腔吸虫18SrRNA的同源性,在此基础上绘制出系统进化树,确定它们的进化关系。结果腔阔盘吸虫和其他双腔吸虫18SrRNA的同源性很高,其中腔阔盘吸虫和支双腔吸虫(D.dendriticum)的差异最大,为2.42%,而与愁体吸虫(L.collurionis)的差异较小,为1.75%;D.dendriticum和分叶短腺吸虫(B.lobatum)的进化关系相对较近,差异为1.09%。结论双腔科吸虫的18SrRNA序列非常保守,腔阔盘吸虫和L.collurionis的亲缘关系最近,而与B.lobatum和D.dendriticum在进化上关系相对较远。
- 郑亚东骆学农施程洪宗瑞谦景志忠才学鹏
- 关键词：RRNA分子分类
