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热休克蛋白70对X射线照射下wtp53蛋白的影响被引量：1: 2001年; 目的　探讨反义热休克蛋白 70 (hsc70 )在X射线照射下对野生型p5 3(wtp5 3)的影响。方法　利用脂质体方法将本室构建的反义hsc70真核表达重组质粒pXAhsc70转染wtp5 3的MCF 7乳腺癌细胞 ,PCR证实外源DNA存在。Westernblot检测hsc70蛋白下降程度。X射线照射转染细胞后 ,检测wtp5 3蛋白的表达情况及半衰期变化。结果　转染重组质粒的细胞中hsc70蛋白下降 5 3% ;不同剂量X射线照射下 ,反义hsc70的存在能够提高wtp5 3的表达 ;4Gy相同剂量照射后 ,转染反义hsc70重组质粒的细胞中wtp5 3的半衰期延长。结论　反义hsc70能够上调wtp5 3的表达、稳定X射线照射下的wtp5 3蛋白并延长其半衰期 ;推测hsc70可能参与了wtp5; 赵玫范云霞黄常志徐枫杜菲林梁; 关键词：反义RNA 热休克蛋白70 X射线照射肿瘤

反义hsc70抑瘤效应的研究: 本研究探讨反义hsc70 RNA对人乳腺癌细胞的体外增殖和体内成瘤能力的影响,观察反义hsc70 RNA对MCF7/Adr人乳腺癌细胞耐药性影响,研究其与突变型P53稳定性和肿瘤耐药之间的关系.; 范云霞赵玫茆灿泉徐枫杜菲周纯乔绘红黄常志; 关键词：肿瘤细胞耐药性乳腺癌细胞; 文献传递

反义HSC70与mtP53和肿瘤耐药关系的探讨被引量：3: 2001年; 目的　观察反义HSC 70RNA对MCF7/Adr人乳腺癌细胞耐药性影响 ,探讨其与突变型p5 3稳定性和肿瘤耐药间的关系。方法　利用DNA重组技术将人HSC70cDNA片段反向克隆至真核表达载体pLXSN中 ,构建反义人HSC70真核表达质粒pX AHSC70。用脂质体方法将重组质粒转染至MCF7/Adr人乳腺癌细胞内 ,以PCR确定转染细胞中外源DNA存在后 ,Westernblot检测HSC70蛋白的抑制程度。MTT法检测细胞耐药性的影响。p5 3稳定性实验分析反义HSC70RNA对突变型p5 3半衰期的改变。结果　经G418筛选获得稳定表达反义HSC70RNA的细胞株MAc70 ,与空载体MAX细胞相比 ,HSC70蛋白表达下降 42 % ,细胞耐药性显著下降。p5 3稳定性实验表明 ,其胞内突变型p5 3含量下降 ,半衰期缩短 ,稳定性明显下降。结论　反义HSC70RNA能够明显降低HSC70蛋白表达 ,导致乳腺癌细胞的耐药性下降 ,提示HSC70可能通过增强突变型p5 3稳定性的途径而参与MCF7/Adr乳腺癌细胞的耐药。; 范云霞赵玫黄常志施一江袁兴华徐枫杜菲; 关键词：MTP53 反义RNA 乳腺癌

Hsp70、mtP53稳定性与肿瘤及化疗敏感性的关系: 目的:观察反义热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对人MCF7/Adr人乳腺癌细胞的生物学特性的影响,探讨其抗肿瘤作用.观察反义hsp70对MCF7/Adr人乳腺癌细胞耐药性影响,探讨...; 黄常志范云霞赵玫茆灿泉徐枫杜菲林梁; 文献传递

细菌荧光酶报告基因载体构建及在Hela细胞中的表达: 1999年; 采用ＰＣＲ点突变技术，构建含有细菌荧光酶融合ｌｕｘＡＢ报告基因的重组哺乳动物载体ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ，脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染和Ｇ４１８抗性筛选稳定转染的Ｈｅｌａ细胞。ＰＣＲ和酶切电泳证明构建的正确性；经稳定转染ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ的Ｈｅｌａ细胞，用发光仪可测得较强的发光强度（最大值为４．１２ｍＶ／４０μｇ细胞总蛋白粗提物）。而亲本及ｐｃＤＮＡ３稳定转染的Ｈｅｌａ细胞则在本底值范围，ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ稳定转染与亲本及ｐｃＤＮＡ３稳定转染的Ｈｅｌａ细胞在细胞形态和培养条件等方面无明显差异。本工作为细菌荧光酶作为报告基因在肿瘤细胞中的表达和应用建立了基础。; 茆灿泉杨树德赵玫范云霞徐枫杨华卫黄常志; 关键词：报告基因 PCR

热休克蛋白90α(HSP90α)在大肠杆菌中的表达被引量：4: 2000年; 目的 :探讨热休克蛋白 90α的生物学功能 ,获得高质量及充足的HSP90α蛋白。方法 :采用PCR的方法扩增HSP90αcDNA5’端 42 4bp片段 ,在起始密码子位置制造一个NcoI酶切位点 ,将PCR产物克隆到中间载体 ,再通过合适的酶切位点将其余片段连接到此载体 ,形成一个带有NcoI突变位点的HSP90αcDNA全长克隆。最终将HSP90α全部编码cDNA插入到pET 16b表达载体中。结果 :经诱导表达 ,SDS PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约 83kD处有一诱导蛋白带。WesternBlot证明表达产物与抗HSP90α抗血清有特异的免疫反应。结论 :构建成了T7启动子控制下的HSP90α表达质粒。; 乔绘红赵玫施一江袁兴华范云霞周纯徐枫黄常志; 关键词：热休克蛋白大肠杆菌肿瘤免疫方法

热休克蛋白与肿瘤免疫治疗: 2001年; 生物体为适应外界环境以获得一个相对稳定的内部环境,在进化过程中产生了许多精巧的机制,其中之一就是热休克反应。在热诱导下果蝇染色体发生膨泡,1974年Tissieres证明该膨泡与新合成的一类蛋白相关联。自此随着研究的深入,发现生物体从微生物、植物至人都存在这一类反应,而且基因产物都相当保守,热休克现象的机理也被进一步阐明:细胞内存在大量异常构象的蛋白,这一原因直接导致了另一大类蛋白质的合成,即热休克蛋白(heatshock protein, HSPs)。; 徐枫黄常杰; 关键词：热休克蛋白肿瘤免疫治疗肿瘤免疫

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徐枫