徐俊杰
- 作品数：109 被引量：186H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 杀菌通透性增加蛋白基因的克隆及在CHO细胞中的表达被引量：5
- 2001年
- 从一名健康中国人外周血白细胞中克隆出杀菌 通透性增加蛋白 (BPI)基因 ,全长1 45 2bp,编码 2 7个氨基酸的信号肽和 45 6个氨基酸成熟蛋白。序列比较发现 ,此序列与国外发表的序列有 6个核苷酸的差异 ,编码蛋白有 4个氨基酸的差异。构建真核表达质粒 ,在CHO细胞中实现BPI基因的稳定表达。对重组蛋白初步纯化后进行杀菌实验 ,结果表明重组蛋白具有与天然蛋白同样的生物活性。
- 徐俊杰徐静王海涛
- 关键词：基因克隆CHO细胞
- 特异靶向AML1-ETO+细胞的渗透肽的表达纯化与筛选
- 细胞渗透肽(cell penetrating proteins,CPP)是一类由5～30个氨基酸组成的短肽,具有特殊的细胞膜穿透作用。研究发现其能够将药物大分子物质转运到细胞内,在细胞生物学和细胞免疫学,尤其是在药物开发...
- 赵陶然董韵竹张金龙吴诗坡侯利华赵兴卉徐俊杰陈薇
- 关键词：AML1-ETO白血病蛋白表达
- 文献传递
- 乙肝核心蛋白与结核抗原或抗原片段的重组融合蛋白及用途
- 本发明涉及乙肝核心蛋白和结核分枝杆菌抗原或抗原片段所构成的一种或数种重组融合蛋白，所述的结核抗原或抗原片段以单抗原或抗原片段，或者组合在一起的多种抗原或抗原片段的形式插入到乙肝核心蛋白的相同或不同的许可位点。本发明所述的...
- 陈薇徐俊杰殷瑛张军董大勇李浩侯利华付玲
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒NS3区辅助性T细胞抗原表位的应答被引量：3
- 2000年
- 目的观察2例慢性HCV携带者及1例HCVRNA转阴者外周血淋巴细胞对HCVNS3区辅助性T细胞抗原表位的应答。方法用血清学方法检测患者的HLA分型。根据计算机软件分析和文献资料 ,合成了1个位于HCVNS3区长度为14个氨基酸的辅助性T细胞表位 ,与在GeneBank中已发表的34个HCV全长序列进行了比较。用T细胞增殖实验方法检测对这一表位的应答。结果3例患者的MHCII类分子不完全相同。这一表位在已发表的34个HCV全长序列中高度保守 ,只在4个序列有1个氨基酸的差异。本实验发现 ,无论是两例长期HCV患者 ,还是1例HCVRNA转阴者 ,对此多肽的刺激均有较强的应答 ,刺激指数均大于3 ,而8例正常对照组均小于1.6。结论对HCVNS3区的这一辅助性T细胞表位的应答强度 ,不仅与HCV的自限性有关 ,而且与慢性HCV感染的发病状况有关。
- 汪涛齐连权徐俊杰郭华章金伯泉王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒表位T细胞NS3区抗原
- 丙型肝炎病毒NS3区C末端HLA-11限制性CTL表位的作用
- 2000年
- 目的 研究丙型肝炎病毒 (hepatitis C virus,HCV)非结构 3区 (NS3) C末端 HL A- 11限制的细胞毒 T细胞(CTL )表位在 HCV感染中的作用 .方法 血清学方法检测 3例患者的 HL A分型 ,他们均存在 HL A- A11表型 ,以 HL A- 11结合基序为依据 ,预测了 HL A- 11限制的 CTL 表位 . 2例慢性患者 5 a内 3个时间点和 3a内 2个时间点及转阴患者的血清样本 ,用反转录 PCR扩增出 HCV基因片段 ,Sanger法测定核苷酸序列 ,并翻译成蛋白质 .结果 慢性 HCV感染者 2例预测的 HL A- A11限制的 CTL 表位都未发生明显改变 ,而在1例 HCV转阴者存在 1个改变的 HL A- 11限制性 CTL表位(序列为 IIL THPVTK) ,然而经 T细胞增殖实验表明此表位不是 T细胞表位 .结论 在 HCV NS3蛋白 C末端可能不存在与 HCV转归有关的 HL A- A11限制的 CTL
- 汪涛郭华章徐俊杰齐连权王国力金伯泉王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒表位细胞毒T细胞
- 稳定表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的RAW264.7细胞系的建立被引量：2
- 2011年
- 为研究结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis分泌蛋白ESAT-6(Early secreted antigenic target of 6 kDa)对巨噬细胞相关功能的影响,将正确构建的重组质粒pEGFP-C1-ESAT-6和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-ESAT6融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blotting方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。结果证实EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,为后续的ESAT-6调控巨噬细胞机理研究提供了平台。
- 李浩殷瑛董大勇张军付玲蔡晨光王猛徐俊杰陈薇
- 关键词：ESAT-6RAW264.7稳定转染
- 人、猴、兔BPI活性部位基因的克隆和序列分析被引量：3
- 2001年
- 为比较不同动物来源杀菌 /通透性增加蛋白 (BPI)的活性部位在基因组成上的差异 ,为今后对人BPI进行分子改构打下基础 ,分别从人、恒河猴和家兔外周血白细胞中克隆出BPI全长或活性部位基因 ,进行序列分析和比较 ,并进行蛋白二级结构预测。结果发现 :猴、兔BPI活性部位序列与人序列在核苷酸水平的同源性分别为 94%和77% ,在氨基酸水平的同源性分别为 88%和 6 2 % ;人氨基酸序列中包含一个糖基化位点 ,而猴、兔序列没有 ;兔序列比人、猴序列少一个氨基酸 ;
- 徐俊杰徐静王海涛
- 关键词：基因克隆活性部位BPI
- 抗炭疽保护性抗原单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2007年
- 目的:克隆并分析抗重组炭疽芽孢杆菌保护性抗原(rPA)单克隆抗体4B2、5E1和2A8轻、重链可变区基因。方法:从分泌抗rPA特异性单抗的杂交瘤细胞株4B2、5E1和2A8中提取总RNA;利用RT-PCR技术克隆抗rPA单抗4B2、5E1和2A8的VL、VH基因,并将其连入pMD18-T载体中进行测序分析。结果:4B2VL基因全长378bp,VH基因全长414bp;5E1VL基因全长420bp,VH基因全长426bp;2A8VL基因全长384bp,VH基因全长342bp。通过分析,这些基因均符合小鼠IgGV区基因的特征,含有4个框架区、3个抗原互补决定区,而且抗体特征性的半胱氨酸残基的数量和位置也正确。结论:克隆了抗rPA单抗4B2、5E1和2A8的VL、VH基因,为下一步构建多种形式的基因工程抗体奠定了良好的基础。
- 李冰李建民徐俊杰刘树玲张羽付玲陈薇
- 关键词：炭疽芽胞杆菌单克隆抗体
- 结核分枝杆菌分泌蛋白EspB在RAW264.7细胞中的稳定表达
- 2011年
- 【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系,为研究EspB蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB,然后将重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blot方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。【结果】EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,成功获得了能够稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系。【结论】本试验利用脂质体介导的方法,将构建的重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1转染至Raw264.7细胞系中,获得了稳定表达EGFP-EspB融合蛋白的巨噬细胞系,为阐明EspB分泌蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用以及EspB与巨噬细胞蛋白之间的相互作用提供了研究平台。
- 李浩殷瑛董大勇张军付玲任军徐俊杰陈薇
- 关键词：EGFPRAW264.7稳定转染
- 结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6对小鼠巨噬细胞凋亡的诱导作用被引量：2
- 2014年
- 【目的】研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6(early secreted antigenic target of 6 kD)对小鼠巨噬细胞凋亡的影响及机理。【方法】应用流式细胞仪分析稳定表达ESAT-6和经重组ESAT-6蛋白作用的小鼠RAW264.7细胞的凋亡;应用Caspase-3检测试剂盒检测caspase-3活性变化;进一步应用Western blotting分析稳转细胞系ESAT-6表达情况。【结果】RAW-EGFP-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和RAW-EGFP细胞系(P<0.05);RAW-flag-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和相应对照细胞系(P<0.01)。10μg/ml重组ESAT-6可显著诱导RAW264.7细胞凋亡,而5μg/ml重组ESAT-6无明显诱导细胞凋亡效果。稳转细胞系RAW-flag-ESAT-6细胞内flag-ESAT-6浓度大约只有500 ng/ml。【结论】胞内低水平表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6可依赖caspase-3信号通路诱导小鼠RAW264.7细胞凋亡。
- 屈野殷瑛李浩杨秀旭董大勇徐俊杰陈薇
- 关键词：ESAT-6CASPASE-3流式细胞仪
