刘细霞
- 作品数：19 被引量：25H指数：2
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 一种克百威的酶联免疫检测方法和试剂盒及其制备方法
- 本发明公开了一种克百威的酶联免疫检测方法和试剂盒及其制备方法。检测方法包括将克百威抗原包被于固相载体上、加入标样或待测样品，再加入克百威双功能基因工程抗体，反应后加入底物液进行显色，测定百分吸光度、根据克百威的标准曲线和...
- 孙远明杨金易王弘吴青雷红涛沈玉栋肖治理柳春红刘细霞
- 文献传递
- 一种克伦特罗的酶联免疫检测方法和试剂盒及其制备方法
- 本发明公开了一种克伦特罗的酶联免疫检测方法和试剂盒及其制备方法。检测方法包括将克伦特罗抗原包被于固相载体上、加入标样或待测样品，再加入克伦特罗双功能基因工程抗体，反应后加入底物液进行显色，测定百分吸光度、根据克伦特罗的标...
- 孙远明杨金易王弘雷红涛沈玉栋潘科肖治理柳春红梁燕刘细霞
- 文献传递
- 细交链孢菌酮酸酶联免疫吸附分析方法研究被引量：10
- 2012年
- 采用水合肼和乙醛酸依次对细交链孢菌酮酸(Tenuazonic acid,TeA)进行衍生化,设计合成了含有氮杂共轭双键偶联手臂,可增强免疫效果的半抗原TeAHGA。通过偶联载体蛋白BSA后的免疫原TeAHGA-BSA免疫新西兰大白兔,成功制备了特异性识别TeA水合肼衍生物TeAH的多克隆抗体;优化确立了ELISA最佳反应条件(TeAH-OVA为异源包被原、包被浓度0.156"g/L、药物稀释及反应缓冲液为PBS、一抗反应时间40min、二抗反应时间20min),建立了TeA间接竞争ELISA(icELISA)检测方法,其抑制中浓度(IC50)为1.61"g/L,检出限(LOD)为0.08"g/L,定量线性检测范围为0.19～12.89"g/L(IC20～IC80)。番茄、面粉样品平均添加回收率分别为67.2%～89.8%和74.8%～93.7%。
- 杨星星刘细霞王弘徐振林沈玉栋孙远明
- 关键词：半抗原多克隆抗体免疫分析
- 细交链孢菌酮酸的半抗原和抗原及其制备方法与应用
- 本发明公开了细交链孢菌酮酸的半抗原和抗原及其制备方法与应用。可作为细交链孢菌酮酸半抗原的化合物，具有如式I所示的结构。细交链孢菌酮酸的抗原是将TeAH和载体蛋白混合后溶解于PBS溶液中，滴入戊二醛溶液，搅拌反应，然后用生...
- 王弘刘细霞杨星星沈玉栋徐振林孙远明杨金易
- 细交链孢菌酮酸的半抗原和抗原及其制备方法与应用
- 本发明公开了细交链孢菌酮酸的半抗原和抗原及其制备方法与应用。可作为细交链孢菌酮酸半抗原的化合物，具有如式I所示的结构。细交链孢菌酮酸的抗原是将TeAH和载体蛋白混合后溶解于PBS溶液中，滴入戊二醛溶液，搅拌反应，然后用生...
- 王弘刘细霞杨星星沈玉栋徐振林孙远明杨金易
- 文献传递
- 抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定被引量：5
- 2008年
- 为构建克伦特罗(Clenbuterol,CBL)单链抗体(scFv)表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以pCANTAB5E-CBL质粒为模板,扩增CBL的scFv基因,与pPICZαA载体重组,然后以重组质粒pPICZαA-scFv为模板扩增scFv及其相连的6个组氨酸(6×His)片段,再与载体pBV220连接,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆质粒经酶切和PCR鉴定后进行目的片段的序列测定。重组菌经温度诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用竞争ELISA检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒pBV220-scFv含有插入片段,与原序列的同源性达99.8%。重组蛋白的分子量接近37kD,能够被抗His标签单克隆抗体特异性识别且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为4.55ng/mL。这说明我们成功构建了重组质粒pBV220-scFv并实现了其在大肠杆菌中的表达,为进一步进行CBL免疫法快速检测奠定了一定的基础。
- 王弘梁艳杨金易刘细霞张宏斌雷红涛沈玉栋孙远明
- 关键词：克伦特罗原核表达
- 抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建
- 2010年
- 目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(G1y4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对。结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,VH序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上。结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考。
- 罗翠红王弘刘细霞沈玉栋孙远明黄佳佳张宏斌
- 关键词：单链抗体噬菌体展示
- 农药克百威单链抗体基因构建及蛋白结构模拟
- 2009年
- 构建小分子农药克百威(CBF)单链抗体(scFv)基因cbf,进行蛋白质二级、三级预测并对其理化特性进行分析。采用重叠延伸PCR方法,以能特异性分泌抗CBF单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3为原料,构建抗CBFscFv基因cbf,进行测序,采用生物信息软件对氨基酸序列推导并进行结构预测,同时对理化性质进行分析。结果得出,抗CBFscFv基因cbl全长750bp,对应228个氨基酸,单链抗体分子量约为26315.1,等电点预测值5.66,为酸性蛋白质;二级结构显示抗克伦特罗单链抗体含α螺旋18处,β折叠108处,β转角24处,随机卷曲93处。cbf三级结构建模显示VL和VH符合scFv的结构特点,可观察到6个环区形成疏水的"口袋",具有抗原结合位点的空间构象。从而构建了一个抗CBFscFv基因cbf,应用信息学技术所获得的预测和分析结果为抗克伦特罗单链抗体的进一步表达、纯化和活性研究提供了大量的信息。
- 刘细霞杨金易王弘庞杰雷红涛沈玉栋孙远明
- 关键词：克百威单链抗体
- 原核表达抗克伦特罗重组单链抗体及其纯化研究被引量：2
- 2009年
- 目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鉴定重组抗体特性。方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体。以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和柱纯化后,经脉冲稀释法将其复性。超滤及透析浓缩蛋白复性液,经Ni-NTA亲和柱二次纯化,得到纯化重组目的蛋白。通过SDS-PAGE电泳分析重组目的蛋白纯度,采用Western blotting和间接竞争ELISA对所制备的抗克伦特罗重组单链抗体特异性进行鉴定。结果:以大肠杆菌Es-cherichia coli BL21(DE3)为宿主菌诱导表达重组单链抗体,产率最高,占菌体蛋白的31%。以1mol/L尿素洗涤包涵体,6mol/L盐酸胍为变性剂,经Ni-NTA亲和柱纯化,所得复性重组单链抗体蛋白的纯度达96%。Western blotting分析显示,纯化并复性后的单链抗体可与鼠抗His标签蛋白单克隆抗体发生特异性的结合反应。间接竞争ELSIA结果表明,该重组抗体IC50值为3.35ng/mL,与沙丁胺醇等结构类似物无交叉反应。结论:原核表达制备的抗克伦特罗重组单链抗体具有较好的抗原结合活性及特异性,为进一步开展克伦特罗的免疫快速检测研究奠定基础。
- 王弘刘细霞梁艳张宏斌孙远明陈舒迟
- 关键词：克伦特罗单链抗体原核表达纯化
- 核糖体展示抗细交链孢菌酮酸单链抗体库的构建、表达及特异性抗体筛选
- 细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid，TeA，化学名，3-乙酰基-4羟基-5-仲丁基吡咯啉-2-酮)是链格孢霉代谢物中毒性最大的毒素，易污染高粱、玉米、小麦、油菜籽、葵花籽、番茄和苹果等农作物。人摄入被TeA污...
- 刘细霞
- 关键词：食品安全核糖体展示单链抗体库碱性磷酸酶融合蛋白
