刘慧琳
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 肝脏特异性表达载体的构建及Western blotting检测被引量：1
- 2011年
- 研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表达的载体,用来表达siRNA。将目标载体分别转染肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MDB-MB-231、人胚肾细胞293,在蛋白质水平上检验siRNA抑制的组织特异性。Western blotting结果证实,siEGFP在肝组织来源的细胞系HepG2中抑制效率明显高于其他两组细胞。构建的载体可以在肝癌细胞系中特异性的表达siRNA,而在其他组织细胞中不表达,实现了组织特异性。进一步将siEGFP替换为抑制HBV表达的siRNA,同样可以实现肝脏特异性的表达。
- 张利涛刘慧琳曹以诚
- 关键词：RNAIEGFPWESTERNBLOTTING
- 家族9纤维素酶结构域重组
- 木质纤维素是自然界中分布最广泛、含量最丰富的可再生资源。通过以生物信息学为指导的人工定向进化和结构功能域重组的方法可以提高纤维素酶的效率,降低利用木质纤维素生产燃料乙醇的成本。来源于白蚁的纤维素酶NtEG具有较高的纤维素...
- 刘慧琳
- 关键词：结合域重组PCR
- 文献传递
- 白蚁纤维素酶结构域重组研究被引量：2
- 2011年
- 对来源于白蚁Nasutitermes takasagoensis的纤维素酶NtEG和来源于Thermomonospora fusca的耐热性纤维素酶E4进行同源建模和序列比较,利用重组PCR技术将E4的结合域与NtEG的催化域进行结构域重组,形成重组纤维素酶。并将得到的重组体置于毕氏酵母X33中表达并检测其催化效率。结果表明:重组纤维素酶的相对分子质量约为59 ku;用羧甲基纤维素法、滤纸法、微晶纤维素测得重组纤维素酶的活性分别为17.1、5.4、4.6 U/mL;重组纤维素酶可在毕赤酵母中成功表达。
- 刘慧琳曹以诚杨磊黄昱阳曾炳佳
- 关键词：结合域重组PCR
- 肝脏特异性基因疫苗研究
- 2010年
- 本研究构建了肝脏特异性表达的载体,为进一步构建肝脏特异性的siRNA载体做前期准备。通过PCR方法扩增得到人Alpha-1抗胰蛋白酶(human-α1-anti-Trypsin)启动子片段(以下简称hAAT启动子)。回收纯化后克隆到pCDNA6载体中,同时以EGFP作为标记蛋白。将构建好的载体分别转染到肝癌细胞HePG2、乳腺癌细胞MDA-MB-231和肺癌细胞A549中,验证其在肝脏中特异性表达的能力。然后在荧光显微镜下观察。结果表明:载体在肝癌细胞中能很好的表达EGFP,在肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MDA-MB-231中不表达EGFP。说明采用human-α1-anti-Trypsin启动子可以实现目的基因在肝癌细胞中特异性表达,这项研究应用于抗肝癌、肝炎的siRNA基因治疗,将有利于显著提高治疗效果,减少对身体的副作用。
- 张利涛刘慧琳曹以诚
- 关键词：特异性表达HEPG2EGFP
