刘彦文
- 作品数：30 被引量：84H指数：7
- 供职机构：中山医科大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 弓形体RH株抗原基因SAG1的扩增克隆及鉴定被引量：1
- 2001年
- 目的 :体外扩增弓形体主要表面抗原 SAG1基因 ,构建 pc DNA3- SAG1真核表达质粒 ,为研制弓形体疫苗奠定基础。方法 :采用 PCR技术 ,自行设计一对寡核酸引物 (P1,P2 ) ,从弓形体 RH株基因组 DNA中特异扩增出编码SAG1抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用 Eco R1和 Hind 双酶切后 ,克隆到真核表达质粒 pc DNA3中 ,转化入大肠杆菌 TG1,用氨苄青霉素和 PCR初筛 ,将 PCR扩增阳性的重组子分别用 Sac1单酶切、Eco R1和 Hind 双酶切鉴定。结果成功地构建真核型表达质粒 pc DNA 3- SAG1,从而为进一步 SAG1重组抗原的体外表达创造有利条件。结果 :从 RH株基因组 DNA中特异扩增出编码 SAG1的全基因序列 ,扩增目的基因片段大小与预期长度(10 2 5 bp) ,相符 ;将分离、纯化的目的基因片段 SAG1插入 pc DNA3质粒 Hind 和 Eco R1位点 ,构建重组质粒pc DNA3- SAG1。结论 :成功构建重组质粒 pc DNA3-
- 周永安陈观今刘彦文罗树红
- 关键词：弓形体基因扩增基因克隆
- 编码弓形虫ROP1蛋白基因的体外扩增、克隆及在E.coli中的表达被引量：10
- 1999年
- 目的构建弓形虫棒状体蛋白（ＲＯＰ１）基因重组质粒并在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达。方法用ＲＨ株接种小鼠，收集腹水，纯化速殖子，抽提基因组ＤＮＡ；据ＲＯＰ１基因序列设计合成一对引物，将上、下游引物分别引入ＥｃｏＲＩ，ＢａｍＨＩ酶切位点，用ＰＣＲ技术从ＲＨ株基因组ＤＮＡ中扩增编码ＲＯＰ１的基因片段，插入ｐＢＶ２２０质粒，转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞，于氨苄阳性ＬＢ培养平板上筛选阳性克隆，酶切鉴定；经温度诱导在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹分析。结果ＲＯＰ１基因体外扩增产物大小与预期值相符，约７５６ｂｐ；构建成功ｐＢＶ２２０－ＲＯＰ１重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹显示特异蛋白条带的分子量约４３ｋＤ，表达产量约占菌体蛋白１３．２３％。结论从弓形虫基因组ＤＮＡ中获取ＲＯＰ１基因，并成功构建ｐＢＶ２２０－ＲＯＰ１重组质粒，诱导表达ＲＯＰ１非融合蛋白，为进一步分离纯化、用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究做好准备。
- 郭虹陈观今刘彦文郑焕钦罗树红
- 关键词：弓形体基因克隆基因重组
- 绿色荧光蛋白基因gfp真核表达载体pcT K GFP的构建被引量：2
- 1999年
- 目的：构建携带绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐ） 的真核表达载体ｐｃＴＫＧＦＰ，为利用绿色荧光蛋白标记在实验动物体内进行自杀性基因治疗的研究和转基因动物打靶载体的构建提供基因材料。方法：采用ＰＣＲ技术从商品质粒ｐＥＧＰＣ１ 中扩增出ｇｆｐ（７９９ ｂｐ），ＰＣＲ产物用ＸｂａⅠ和ＢａｍＨⅠ双酶切后定向克隆至真核表达载体ｐｃＴＫ，重组质粒ｐｃＴＫＧＦＰ用限制性内切酶和ＤＮＡ序列分析进行鉴定。结果：部分ＤＮＡ 序列分析证明ＰＣＲ产物为ｇｆｐ，成功筛选到携带ｇｆｐ 的真核表达载体ｐｃＴＫＧＦＰ。结论：ｐｃＴＫＧＦＰ真核表达载体的构建，为利用绿色荧光蛋白标记在实验动物体内进行自杀性基因治疗的研究和转基因动物打靶载体的构建奠定了基础。
- 刘彦文卢春彬林勇都同功黄冰陈系古
- 关键词：GFP基因治疗
- 杆状病毒异源重组及其宿主专一性机理的研究
- 刘彦文
- 关键词：宿主范围
- 恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫鼠体内抗原定位研究
- 2001年
- 目的 用恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫小鼠 ,观察其在宿主体内各组织的抗原分布情况。方法 提取目的基因PfCSP在HeLa细胞中的表达产物 ,免疫注射BALB/c小鼠。取免疫后 4周及 7周小鼠心脏、肝脏、脑、脾及肌肉 ,通过免疫酶组织化学法及间接免疫荧光法检测组织内的抗原。结果 免疫 7周后的BALB/c小鼠肝脏组织枯否氏细胞内及肝细胞膜上可见棕黄色特异性抗原 -抗体反应 ,而免疫鼠心、脑、肌肉未出现明显的阳性反应。结论 恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达蛋白能被肝实质细胞特异性识别 。
- 方政刘彦文鄂群史玉坤余新炳
- 关键词：恶性疟原虫环子孢子蛋白基因表达产物抗原定位
- 杆状病毒异源重组引起DNA片段缺失
- 斜纹夜蛾(Spodoptera litura)核型多角体病毒(SlNPV)只能感染斜纹夜蛾幼虫,不能感染甜菜夜蛾(Spodopterae exigua)幼虫和甜菜夜蛾细胞(SE-1);甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)...
- 刘彦文庞义蒲蛰龙
- 关键词：杆状病毒
- 文献传递
- 弓形虫ROP1基因的体外扩增及克隆
- 1997年
- 弓形虫棒状体蛋白（ROP1）存在于速殖子棒状体内。根其已知基因序列设计合成一对引物，用PCR技术从弓形虫RH及ZS2株的基因组DNA中扩增出编码ROP1的基因片段，将扩增产物与pBV220原核高效表达质粒重组，构建成功pBV200-RCP1重组子，转化大肠杆菌TG1，DHSα，以进一步诱导表达RCP1非融合蛋白，用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究。
- 郭虹陈观今刘彦文郑焕钦
- 关键词：弓形虫克隆寄生虫
- 全文增补中
- 弓形虫ZS1株抗原基因的扩增及克隆被引量：1
- 1997年
- 本文采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物(P1，P2)，从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用FxcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化人大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定。结果成功地构成建真棱型表达质粒pcDNA-P30，从而为进一步进行重组P30抗原的体外表达创造有利条件。
- 周永安陈观今刘彦文罗树红郑焕钦
- 关键词：弓形虫抗原基因克隆聚合酶链反应
- 全文增补中
- 恶性疟原虫FCC1/HN株CSP抗原基因表达产物在小鼠体内的免疫应答研究被引量：4
- 1999年
- 目的： 利用ｐｃＤＮＡ３ 质粒作为载体， 在人宫颈癌细胞（ＨｅＬａ 细胞） 中高效表达恶性疟原虫环子孢子蛋白 （ＣＳＰ）， 观察表达产物诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠免疫的应答水平。方法： 目的基因ＰｆＣＳＰ在ＨｅＬａ 细胞中表达， 将纯化的表达产物免疫接种小鼠， 通过ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 分析、Ｔ 淋巴细胞增殖实验、ＮＫ 细胞活性检测和Ｔ淋巴细胞亚群测定， 观察其诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生体液免疫和细胞免疫的应答水平。结果： ＥＬＩＳＡ 检测抗体滴度达１∶６ ４００；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 结果在３８．３ ｋＤａ 相应位置出现较清晰的显色条带；表达产物能特异刺激小鼠脾淋巴细胞增殖、ＣＤ４＋ 与ＣＤ８＋ 细胞有所增加， 并能提高小鼠ＮＫ细胞活性。结论： 真核表达系统ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ／ＨｅＬａ表达产物能特异刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫的应答，
- 方政余新炳刘彦文罗树红
- 关键词：恶性疟原虫环子孢子蛋白HELA细胞
- 恶性疟原虫FCC-1／HN株EBA-175基因特异序列的克隆及其鉴定
- 1997年
- 根据恶性疟原虫红细胞结合抗原EBA-175基因编码序列设计并合成一对引物，通过聚合群链反应(PCR)技术对恶性疟原虫FCC-1／HN株的EBA-175基因进行扩增，用HindⅢ和BarnHⅠ同时消化扩增产物，定向克隆PCDN3载体，转化至感受态大肠杆菌TG1，经抗性筛选和质粒大小快速凝胶电泳鉴定初步获得重组克隆，再经PCR鉴定和HindⅢ／BarnHⅠ酶切鉴定，证实所得的重组克隆含有编码恶性疟原虫FCC-1／HN株EBA-175基因部分序列。
- 陈海峰余新炳刘彦文吕芳丽方建民
- 关键词：恶性疟原虫克隆流行病疫苗抗原
- 全文增补中
