刘广
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华中科技大学同济医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 汉坦病毒H8205株IL-2/G1融合基因在Vero细胞中的稳定表达
- 2005年
- 目的探讨外源性IL-2/G1融合基因在非洲绿猴肾细胞(Vero)获得稳定表达的可行性,为汉坦病毒基因工程疫苗的研制提供一定的实验基础。方法将汉坦病毒H8205株G1的cDNA重组人源IL-2基因后克隆到真核表达载体pcDNA3.1/His,形成重组真核表达质粒pcDNA3.1/His-IL-2-G1,在脂质体介导下,将其导入Vero细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,并继续培养6周,然后通过间接免疫荧光、ELSIA、SDS-PAGE电泳等方法检测IL-2-G1基因在Vero细胞中的稳定表达情况。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1/His-IL-2-G1,其片段插入方向正确。经间接免疫荧光和SDS-PAGE电泳证实,转染了真核表达质粒pcDNA3.1/His-IL-2-G1后在Vero细胞培养上清和胞浆中有融合蛋白的表达,其相对分子量为78000u,与预期的相符合。经人IL-2ELISA检测试剂盒检测证实在培养上清和细胞裂解物所表达的融合蛋白有IL-2特性。结论在脂质体介导下,外源性IL-2/G1融合基因能够成功导入Vero细胞并获得稳定表达。
- 胡洪波张泽华黄汉菊贾珉刘广
- 关键词：汉坦病毒VERO细胞
