付永锋
- 作品数：16 被引量：34H指数：3
- 供职机构：复旦大学上海医学院更多>>
- 发文基金：卫生行业科研专项国家高技术研究发展计划上海市公共卫生优秀青年人才培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 白纹伊蚊唾液变应原三磷酸腺苷双磷酸酶基因的克隆与原核表达
- 背景蚊叮咬能够诱发速发型超敏反应,如瘙痒的风团;或者迟发型超敏反应,如硬化性的丘疹;蚊子叮咬过敏的患者还会出现较大的皮肤局部反应甚至全身多脏器的过敏反应,极大影响了人们的生活质
- 董芳付永锋程训佳
- 文献传递
- 室内主要变应原的克隆、表达及生物活性检测
- 目的屋尘螨和蜚蠊是最常见的吸入性变应原,也是最常见的室内变应原,在诱发哮喘及其它变态反应性疾病起主要作用。重组变应原的制备和活性检测以及检测过敏性患者血清对这些变应原的反应性和这些变应原之间的交叉反应性,对建立具有国际标...
- 程训佳蔡俊龙付永锋冯萌
- 文献传递
- 4种呼吸道病毒悬液芯片检测方法的建立被引量：9
- 2013年
- 目的建立一种基于悬液芯片的呼吸道病毒多重检测方法,对4种呼吸道病毒或亚型进行快速检测和鉴定,包括人类偏肺病毒,呼吸道合胞病毒,流感病毒A和流感病毒B。方法依据NCBI公开数据库上各病毒的基因序列信息,设计并合成相关引物探针序列。抽提病毒RNA,经反转录后对目的序列进行PCR扩增,产物与核酸探针微球组杂交后于BioPlex 200检测荧光信号值。结果优化了多重PCR方法,hMPV、RSV与IfB的悬液芯片检测灵敏度约3DNA拷贝,IfA的悬液芯片检测灵敏度约30DNA拷贝。4种病毒或亚型同时检测的特异性高,省时,无交叉反应。17个经传统方法鉴定为呼吸道病毒的临床标本用悬液芯片检测16个阳性,检出率94.1%。标本经测序分析验证,结果与悬液芯片法一致。结论建立的同时检测4种呼吸道病毒或亚型的悬液芯片方法特异性高,为快速筛查和鉴定呼吸道病毒提供了新的手段。
- 陈沁裘敏燕付永锋徐锦居丽雯程训佳李瑶
- 关键词：呼吸道病毒多重PCR
- 入源抗IgE抗体的制备和研究
- 目的近年来,过敏性疾病的发病率逐年上升,极大地危害着人们的健康。以IgE分子作为靶点获得的抗过敏药物发展较为迅速,为此本研究构建人免疫球蛋白G基因文库,以重组的IgE C3-C4抗原对该基因文库进行筛选得到特异性的高亲和...
- 程训佳杨彬章黎付永锋
- 文献传递
- 诺氏内阿米巴仓鼠肝脓肿模型的炎症反应特点
- 目的肠道原虫诺氏内阿米巴具有引起阿米巴肝脓肿的致病潜力,在野生和圈养的猕猴中都有较高的感染率。目前已有一例动物园非人灵长类动物饲养员感染诺氏内阿米巴的病例报道,提示诺氏内阿米巴有人兽共患的潜力。因此,深入评估和比较诺氏内...
- 管悦冯萌付永锋程训佳
- 关键词：溶组织内阿米巴阿米巴肝脓肿巨噬细胞
- 文献传递
- 基于微视频的“翻转课堂”在人体寄生虫学实验教学中的探索与应用被引量：10
- 2020年
- 在人体寄生虫学实验课程中,利用互联网完成网上课程平台建设,将实验课重要知识点进行整合,制作标本类和操作类共计23个微视频,上传至课程平台,作为线上教学内容,供学生课前观看预习。采用多方位全程学习测评,结合问卷反馈全面评估课程改革后的教学效果。结果表明,采用基于微视频的"翻转课堂"教学法后,预防医学与基础医学专业学生的实验考试成绩明显提高,优于传统教学法。对于实验考试成绩低分段的同学进行分析,标本视频和操作视频的观看次数与在线测试成绩明显相关(P<0.01)。问卷结果表明,大部分学生认为线上微视频对线下课堂的标本学习(262/264, 99.24%),实践操作(264/264, 100%)很有帮助;81.20%(217/264)的学生表示喜欢"翻转课堂"的学习方式;对于微视频学习占用业余时间的情况,95.69%(255/264)学生表示可以接受。该教学方法有助于提升学生的学习成绩和实践技能,也受到学生的欢迎。但对于学有余力的同学,提升效果不显著,提示我们需要进一步分析原因,完善"翻转课堂"教学改革,惠及更多学生。
- 马淑兰冯萌蔡俊龙付永锋毛佐华程训佳
- 关键词：人体寄生虫学实验教学
- 大容量人免疫球蛋白G基因文库的构建及初步应用
- 2009年
- 目的从大容量人免疫球蛋白G基因文库中获得尘螨2类变应原特异的IgG Fab片段。方法通过DNA重组技术,从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入pFab1-His2相应位置,构建人免疫球蛋白G基因文库;以重组粉尘螨2类变应原(rDer f2)作为抗原,采用克隆印迹法对抗体库进行筛选,ELISA验证以获得阳性克隆;提取阳性克隆质粒,进行核苷酸序列测定并推算氨基酸序列,Kabat数据库分析轻、重链基因的同源性,表面等离子共振BIAcore检测纯化的Fab片段与rDer f2的亲和力。结果从9×108库容的人免疫球蛋白G基因文库中筛选1.28×106个克隆,获得2个可与尘螨变应原特异结合的阳性克隆AM1和AM2。序列比较显示2个克隆的重链完全同源;同源性分析显示,AM1、AM2轻链可变区近似系分别为K2-30和K1-12,重链可变区近似系为VH3-30;BIAcore检测显示,2个克隆的Fab片段与rDer f2的结合常数分别为6.1×107和5.7×107,解离常数分别为3.1×10-8和4.1×10-8。结论从未经免疫的大容量人免疫球蛋白G基因文库获得具有较高亲和力的尘螨变应原特异的IgG Fab片段。
- 邵红霞付永锋Hiroshi Tachibana程训佳
- 关键词：尘螨变应原变应性哮喘
- 热带剥爪螨变应原Blot 5的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:克隆热带剥爪螨主要变应原Blot 5基因,表达纯化该蛋白,并检测其免疫活性。方法:提取热带剥爪螨总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Blot 5编码基因,将其连入原核表达载体pET-19b,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21 Star(DE3)pLysS,IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析纯化重组变应原Blot 5。用Dot blot、Western blot和ELISA等方法检测重组变应原Blot 5免疫活性。结果:Dot blot和Western blot结果表明重组变应原Blot 5和热带剥爪螨粗提液都能和Blot 5鼠单克隆抗体结合。重组变应原Blot 5检测69份热带剥爪螨过敏患者血清和21份户尘螨过敏患者血清中的特异性IgE,阳性率分别为29.0%和33.3%。结论:表达和纯化了具有与天然蛋白相似的免疫活性的重组热带剥爪螨变应原Blot 5,可用于热带剥爪螨变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础。
- 蔡俊龙杨彬邓宜红陈实罗慕侠李勤付永锋程训佳
- 关键词：重组变应原BLOT
- 多主枝孢霉重组变应原Cla h8的制备及其免疫活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:通过基因工程手段,获得重组多主枝孢霉变应原蛋白Cla h8,有利于进行变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础。方法:从多主枝孢霉菌体中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Cla h8编码基因,将其连入pET-19b载体。转入大肠杆菌BL21 Star(DE3)pLysS,经诱导表达后,进行提纯复性,用Western blot和Dot-blot检测其免疫活性。结果:重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白可以与多主枝孢霉过敏患者的血清中IgE和IgG抗体特异性结合,与天然蛋白具有相似的免疫活性。结论:制备并获得了具有生物学活性的可溶性重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白,可用于多主枝孢霉变应原的标准化,克服天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。
- 杨柳付永锋李雪萍冯萌程训佳
- 关键词：蛋白表达
- 上海市徐汇区公共卫生从业人员弓形虫感染的血清学调查分析被引量：2
- 2012年
- 随机抽取2010年12月-2011年3月上海市徐汇区公共卫生从业人员448名，采集静脉血，ELISA法检测血清弓形虫特异性kG抗体，抽检的448名公共卫生从业人员中，弓形虫IgG阳性率为10.3％（46／448）。不同来源地（上海、安徽、江苏、河南和四川等）和性别人员之间感染率差异均无统计学意义（P〉0．05）。≥30年龄组阳性率（14．9％，29／195）明显高于〈30年龄组阳性率（6．7％，17／253）（P〈0．05），30-39岁年龄组最高，为15．8％（16／101）。食品生产加工行业从业人员阳性率（12．6％，36／286）显著高于非食品生产加工行业从业人员阳性率（6．2％，10／162）（P〈0．05）。
- 陶艳琳赵雪涛付永锋汤宇帆李申生程训佳
- 关键词：刚地弓形虫弓形虫病血清学调查
