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丁雪妮

作品数:7 被引量:15H指数:2
供职机构:南京农业大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
相关领域:农业科学医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇期刊文章
  • 2篇专利
  • 1篇学位论文

领域

  • 5篇农业科学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 7篇大豆
  • 4篇农杆菌
  • 4篇农杆菌介导
  • 3篇育种
  • 3篇转基因
  • 3篇花叶
  • 3篇花叶病
  • 3篇花叶病毒
  • 3篇基因
  • 3篇GATEWA...
  • 3篇大豆花叶
  • 3篇大豆花叶病
  • 3篇大豆花叶病毒
  • 3篇大豆遗传
  • 3篇大豆遗传转化
  • 3篇RNAI
  • 2篇转基因大豆
  • 2篇马铃薯
  • 2篇马铃薯Y病毒
  • 2篇马铃薯Y病毒...

机构

  • 7篇南京农业大学

作者

  • 7篇丁雪妮
  • 6篇智海剑
  • 6篇高乐
  • 5篇翟锐
  • 4篇李凯
  • 3篇廖文林
  • 2篇王涛
  • 1篇栾鹤翔
  • 1篇王涛
  • 1篇章红运
  • 1篇郑明洁
  • 1篇殷金龙

传媒

  • 2篇大豆科学
  • 1篇植物保护学报
  • 1篇华北农学报

年份

  • 1篇2022
  • 1篇2019
  • 2篇2016
  • 1篇2015
  • 2篇2014
7 条 记 录,以下是 1-7
排序方式:
大豆翻译起始因子4E 干扰片段克隆及其 RNAi载体构建被引量:2
2014年
应用基于RNA干扰( RNA interference,RNAi)原理的大豆转基因技术,能够在转录水平沉默同源靶基因,这为转基因抗病毒作物的培育提供了新的策略。通过比对已报道的能与病毒VPg发生互作的10种植物的eIF4E氨基酸序列,确定出大豆eIF4E的保守区间为62~237位氨基酸序列,克隆出406 bp的干扰片段eIF4Ei(含58 bp特异性重组序列attB),进而采用GATEWAY技术构建了干扰表达载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-eIF4Ei。之后通过测序证实干扰片段eIF4Ei在载体构建过程中没有发生变异;酶切试验证实终端质粒的2个ccdB位点均被eIF4Ei置换;用启动子和终止子设计的引物对含有重组质粒的菌液进行PCR扩增,证实2个干扰片段以相反的方向插入到终端质粒中。从而证明反向重复的干扰表达载体构建成功,为应用基于RNAi原理的大豆转基因技术培育对大豆花叶病毒具有抗性的大豆新种质提供了基础材料。
高乐翟锐丁雪妮李凯章红运王涛智海剑
关键词:大豆花叶病毒RNA干扰GATEWAY技术
农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化被引量:8
2015年
利用农杆菌菌株EHAl05,对17个栽培大豆品种的大豆子叶节进行了侵染,从大豆基因型、氯气灭菌时间、外植体状态、菌株活力、侵染浓度、侵染时间、共培养时间等方面进行了优化。结果表明:氯气灭菌14~18h,可在不影响大豆种子活力的同时最大限度的减少污染;暗处理1d的外植体活力高于光照处理5~7d的外植体;菌液浓度(OD600nm)在0.8~1.0且侵染浓度OD600nm)为0.6~0.8时GUS瞬时表达率最高;适宜的侵染时间和共培养天数分圳为30min和4d。在上述优化研究基础上,形成一套综合的转基因体系,该体系的最高转化率可达3.33%。不同处理下的GUS瞬时表达率以及17个大豆品种的丛生芽诱导率综合评价显示,适宜转化的基因型为TL-1、HC-3、HC-6、Wil-liams82。
翟锐高乐丁雪妮廖文林郑明洁陆智文智海剑
关键词:大豆子叶节
一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法
本发明公开了一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。该方法是通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆;优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片...
智海剑高乐落金艳丁雪妮李凯王涛翟锐
大豆花叶病毒CP基因RNAi载体的构建及大豆遗传转化被引量:5
2014年
为获得含有大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)CP基因干扰片段的转基因大豆新材料,对11个SMV流行株系的CP基因进行了核苷酸序列比对,采用GATEWAY技术构建了RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-CPi,对重组载体测序比对,通过酶切以及PCR方法鉴定载体,并利用农杆菌介导的转基因体系进行大豆遗传转化。克隆出264 bp高度保守的CPi干扰片段,通过测序证实其与目标序列的匹配度达到100%;重组质粒经过XbaⅠ单酶切后出现783 bp和10818bp两条带,经过EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后出现2256bp和9346bp两条带,说明2个ccdB结合位点均被CPi取代;PCR反应得到474 bp和460 bp两条带,说明CPi以反向重复形式与pB7GWIWG2(Ⅱ)组合。共获得10棵T0代转基因幼苗,经除草剂涂抹、PCR、PAT/bar转基因检测试纸检测后,6株为阳性,表明该方法可筛选出对大豆花叶病毒具有抗性的转基因大豆新种质,为SMV抗病育种工程提供良好的亲本材料。
高乐翟锐丁雪妮李凯廖文林智海剑
关键词:大豆花叶病毒CP基因RNAIGATEWAY技术
农杆菌介导RNAi抗SMV真核翻译起始因子eIF4E大豆遗传转化的研究
大豆[Glycine max(L.)Merr.]起源于中国,在我国已有五千多年的栽培历史,是全球重要的油料作物和粮食作物。大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是一种全球性的大豆病毒,由SMV诱...
丁雪妮
关键词:大豆抗病育种
文献传递
一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法
本发明公开了一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。该方法是通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆;优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片...
智海剑高乐落金艳丁雪妮李凯王涛翟锐
大豆翻译延伸因子GmEF1A干扰载体的构建及大豆遗传转化被引量:2
2016年
研究发现GmeEF1A与大豆花叶病毒的P3蛋白存在互作关系,并且参与SMV在大豆体内的繁殖。通过大豆GmeEF1A基因5个拷贝的核苷酸和氨基酸序列比对,确定其保守区间,克隆得到180 bp的干扰片段GmeEF1Ai。利用GATEWAY技术构建RNA干扰(RNA interference,RNAi)表达载体pB7GWIWG2(II)-e EF1Ai,并通过农杆菌介导的子叶节转化法导入到受体大豆品种天隆1号中。测序结果显示重组质粒中插入的干扰片段GmeEF1Ai与目标序列完全符合,通过PCR和酶切验证表明GmeEF1Ai是以反向重复形式插入到表达载体中。经转化获得组培苗8株,PCR、除草剂涂抹和PAT/bar试纸条多重检测确认7株为阳性。绝对荧光定量结果显示,阳性苗中4株为单拷贝。GmeEF1A基因表达量分析结果显示GmeEF1Ai载体对GmeEF1A的5个拷贝基因有不同程度的阻抑。这不仅为验证GmeEF1A基因在大豆受SMV侵染时的功能提供试验材料,也为大豆抗病育种提供新的种质。
廖文林栾鹤翔高乐丁雪妮宋英培殷金龙牛浩鹏智海剑
关键词:大豆花叶病毒RNAIGATEWAY技术
共1页<1>
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