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球形与螺旋形幽门螺杆菌基因表达差异的研究被引量：17: 2003年; 目的 :从基因转录水平了解球形幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)基因表达的变化。方法 :幽门螺杆菌标准株NCTC 116 37和 2株临床分离株 ,经抗生素—灭滴灵诱导球变。提取等菌量螺旋形和球形Hp的RNA ,RT PCR扩增Hp 2 5种基因 ,这些基因包括毒力基因 (kat、aphA、rdxA、frxA、cysS、ureB、glmM、cagA、vacA、fldA、iceA1、hpaA、fliD、napA、oipA、alpAB、babB、hopZ) ;看家基因 (scoB、atpD、glnA、recA)和功能不明的外膜蛋白基因 (hopW、hopX)。扩增产物经分子定量成像系统进行扫描定量。结果和结论 :等菌量的球形HpRNA量比螺旋形Hp减少。NCTC 116 37、F4 4和F4 9菌株的螺旋菌分别有 2 5、2 0、19个基因RT PCR阳性 ,对应的球形菌相应的基因RT PCR也为阳性。定量分析结果表明 :被检测的基因在球形菌中的表达均比螺旋菌降低。提示球形菌致病性的降低与基因的低表达有关。 3株球形菌不同基因表达的变化并不完全一致 ,表达量变化较小且各菌间较一致的是glmM、oipA、glnA ;表达量变化较大且菌间较一致的基因是 :napA、sodB、recA、fliD。; 佘菲菲丁惠林建银刘君炎陈月秀; 关键词：球形幽门螺杆菌基因表达

幽门螺杆菌glmM DNA重组质粒的构建及体外表达: 2006年; 目的构建幽门螺杆菌(Hp)pVAX1-glmMDNA重组质粒,体外转染SGC-7901细胞并鉴定其表达蛋白的抗原性。方法RT-PCR方法从国际标准株NCTC11637中获取glmM全长基因,克隆插入T载体。测序后经酶切、连接反应将glmM的开放读码框架定向克隆入真核表达载体pVAX1,酶切初步鉴定后测序确认。通过脂质体法将pVAX1-glmMDNA重组质粒转染SGC-7901细胞,检测其转染效率,确定转染成功后RT-PCR法检测glmM在转录水平的表达,ELISA法鉴定表达蛋白的抗原性。结果DNA测序结果显示扩增出的glmM全长基因与GenBank公布的HpglmM序列有96%的同源性。PCR、酶切和测序结果证实glmM目的基因成功克隆入真核表达载体pVAX1。重组质粒转染的细胞经RT-PCR扩增获得1.4kb片段,与目的基因大小相符。ELISA结果显示重组质粒转染细胞的超声破碎物及培养上清液中抗原的滴度比对照组高2倍以上。结论成功构建了pVAX1-glmMDNA重组质粒,其表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究其抗Hp感染的效果及制备相应有效DNA疫苗奠定基础。; 吴小茜佘菲菲丁惠张静陈月秀; 关键词：幽门螺杆菌

幽门螺杆菌oipA DNA重组质粒的构建及免疫保护作用被引量：3: 2006年; 目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)oipADNA重组质粒在防御Hp感染中的作用。方法:将HpoipA基因的开放读码框架定向克隆入pVAX1载体,获得的重组子pVAX1oipA转染SGC7901细胞,用RTPCR及ELISA方法检测细胞oipA转录及翻译水平的表达。抽提纯化重组质粒pVAX1oipA,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠(100μg/只)每周1次,共3次,以质粒pVAX1(空载组)和生理盐水(空白组)做对照,分别于末次注射1个月和2个月后ELISA法检测血清中相应抗体。在证实有免疫应答的基础上,以HpSS1攻击小鼠(0.5×1090.5ml/只)3次,于末次攻击4周后,取胃黏膜组织作细菌学(包括胃黏膜快速尿素酶试验、细菌培养鉴定)和组织学检测。结果:pVAX1oipA转染的SGC7901细胞在转录水平和翻译水平均有相应的表达;免疫小鼠产生抗oipA抗体。免疫小鼠经细菌攻击后,实验组、空载组和空白组胃黏膜组织快速尿素酶实验阳性率分别为0(0/10)、90%(9/10)和100%(5/5),细菌培养阳性率分别为20%(2/10)、90%(9/10)和100%(5/5),组织学检测结果:空载组和空白组小鼠胃黏膜均出现轻度或重度糜烂,而实验组小鼠胃黏膜80%(8/10)正常,显示oipADNA重组子具有免疫保护作用。结论:oipADNA重组子能有效诱导抗Hp保护性免疫反应。; 吴小茜佘菲菲丁惠张静陈月秀; 关键词：幽门螺杆菌 OIPA DNA 免疫保护

球形幽门螺杆菌高表达基因的筛选及其克隆与真核表达: 目的:从基因转录水平了解球形幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)基因表达的变化,选择在球形菌中相对高表达的两个基因克隆入真核表达载体并检测其表达,为抗球形菌DNA疫苗的研制奠定基础.方法:1.幽门...; 丁惠; 关键词：球形幽门螺杆菌 RT-PCR 基因表达; 文献传递

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丁惠