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改进生物化学教学方法,提高军医学员的综合素质被引量：3: 2009年; 培养高综合素质的军队高级医学人才是军医大学的主要任务,作者在生物化学课堂教学的过程中通过课前调研、课堂教化及课外引导,充分掌握生物化学教学在当前大学生素质教育过程中的薄弱环节,通过改进传统教学方法,将综合素质培养融合于科学知识的传授过程中。; 李渝萍戴双双张艳赵力陈彬连继勤何凤田; 关键词：生物化学教学方法

索拉非尼诱导肝癌HepG2细胞自噬的机制及意义被引量：4: 2013年; 目的探讨索拉非尼诱导肝癌HepG2细胞自噬的机制及意义。方法用GFP-LC3质粒转染HepG2细胞后观察索拉非尼对自噬小体形成的影响;免疫共沉淀法检测索拉非尼对Mcl-1与Beclin1之间相互作用的影响;使用siRNA沉默自噬相关基因Atg5或用氯喹(CQ)抑制自噬后观察索拉非尼抗肝癌细胞的效应;Western blot检测自噬与凋亡相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3、Mcl-1与PARP表达的变化。结果索拉非尼处理HepG2细胞后LC3-Ⅱ蛋白表达量呈剂量依赖性增强,索拉非尼处理后转染GFP-LC3的HepG2细胞中出现明显的自噬小体样点状荧光,Western blot结果显示索拉非尼处理后HepG2细胞中Mcl-1表达下调,Beclin1无明显变化,Co-IP证实在HepG2细胞中Mcl-1和Beclin1间存在蛋白相互作用,索拉非尼能减弱Mcl-1和Beclin1的结合。抑制自噬后能明显增强索拉非尼的杀细胞效应。结论索拉非尼可能通过下调Mcl-1来诱导肝癌HepG2细胞自噬,抑制自噬后可显著增强索拉非尼的杀细胞效应。; 秦利燕王滨倪振洪连继勤宋方洲袁成福刘革力; 关键词：索拉非尼自噬 MCL-1

二氯乙酸盐激活ROS-JNK通路增强索拉非尼对肝癌细胞增殖的抑制作用被引量：1: 2019年; 目的探讨二氯乙酸盐(dichloroacetate,DCA)与索拉非尼(sorafenib)联合使用对肝癌细胞Hep3B增殖抑制的效果及可能机制。方法将Hep3B细胞分为对照组(DMSO)、DCA处理组(5 mmol/L)、索拉非尼处理组(10μmol/L)和联合组(5 mmol/L DCA联合10μmol/L索拉非尼)4个组,处理24 h后,在显微镜下观察各组细胞形态;采用CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡;通过Western blot检测凋亡相关蛋白PARP的表达和p-JNK的水平;采用活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞ROS的变化;用流式细胞仪检测加入抗氧化剂和阻断JNK通路后的细胞凋亡的变化。结果 DCA和索拉非尼联合处理24 h能够显著改变细胞形态,杀伤细胞。与对照组和单独用药组比较,联合组显著增强对肝癌Hep3B细胞的增殖抑制效果(P<0.05),明显增加Hep3B细胞中PARP的剪切与JNK的磷酸化水平,胞内ROS水平也明显升高;联合使用抗氧化剂NAC可显著抑制DCA和索拉非尼处理导致的JNK磷酸化水平升高和对Hep3B细胞的增殖抑制效果。结论 DCA和索拉非尼联合使用可显著抑制肝癌细胞Hep3B的增殖,其机制可能与激活ROS-JNK通路有关。; 孙梁博姚洁李涛陈岺曦陈岺曦闫小晶何凤田; 关键词：二氯乙酸盐索拉非尼肝癌细胞增殖

Bcl-2与自噬的研究进展被引量：9: 2016年; B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2）是一种含有多个BH结构域的抗凋亡蛋白。最近研究表明,Bcl-2蛋白还与细胞的自噬过程密切相关,与自噬信号途径中的多个分子进行相互调节,发挥抗自噬的作用。本文综述了Bcl-2与自噬关系的相关研究进展。1 Bcl-2及其家族蛋白Bcl-2家族蛋白是目前研究得最深入、最广泛的调控线粒体途径凋亡的一类分子,; 倪振洪何凤田连继勤; 关键词：基因,BCL-2 自噬

hLNα4LG1基因克隆、表达及生物学活性检测被引量：1: 2006年; 目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,W estern b lot对表达蛋白进行鉴定。用N i-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测。结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带。与对照组相比,N i-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用。结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础。; 连继勤戴旭芳李晓辉何凤田; 关键词：基因克隆原核表达

鼠层粘蛋白α5链E_3、LG_4、LG_5片段的克隆及表达: 2004年; 从鼠的肝脏组织中提取总 RNA,采用 RT- PCR获得了鼠层粘蛋白 ( laminin)α5链的 E3 ( L G4 - 5)、L G4 和 L G5等 3个基因片段 ,与 NCBI数据库参考序列相比 ,同源性在 99%以上。将 E3 ( L G4 ,5)、L G4 和 L G5定向克隆到原核高效表达载体 Pet- 2 8a中 ,构建 Pet- 2 8a- E3 、Pet- 2 8a- L G4 、Pet- 2 8a- L G5等 3个原核表达质粒。将表达质粒转化表达受体菌 BL2 1中 ,IPTG诱导表达。收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western- blotting分析 ,结果显示 ,这 3段基因在原核细胞中成功表达 ,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的 2 0 %以上。大量提取包涵体 ,纯化后免疫家兔 ,8周后得多克隆抗体 ,间接 EL ISA在抗体稀释到 1∶ 1 2 80; 孙兆增张玉静展德文张艳宇连继勤; 关键词：层粘蛋白克隆细胞基质信号分子

以学科兴趣小组培养临床五年制学生科研思维及创新能力被引量：5: 2013年; 在临床医学五年制学生的培养过程中科研思维及创新能力的培养是学生基本素质和后续长远发展的关键环节,在基础课程阶段开展学科兴趣小组是达到这一目标的有效措施。在五年制学生中通过开展生物化学兴趣小组,可取得较理想的效果,开启了学生的科研思维,培养了其创新能力。; 黄刚连继勤龚薇付晓红何凤田; 关键词：生物化学

左旋棉酚通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬及意义被引量：1: 2012年; 目的探讨左旋棉酚诱导淋巴瘤Daudi细胞发生自噬可能机制及对细胞存活率的影响。方法采用CCK-8法检测左旋棉酚在体外对Daudi细胞增殖抑制作用的影响;采用台盼蓝排斥实验检测不同处理对细胞存活率的影响;Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3、ERK和磷酸化ERK的表达情况;AO染色观察经左旋棉酚处理后Daudi细胞酸性小体的变化情况。结果左旋棉酚能剂量依赖性地抑制Daudi细胞的增殖和促进细胞死亡;AO染色后经左旋棉酚处理的细胞内可观察到大量的酸性小体形成;Western blot显示左旋棉酚能显著上调自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达及增强磷酸化ERK的水平,抑制ERK的磷酸化能下调LC3Ⅱ的表达;ERK抑制剂U0126及自噬抑制剂CQ和3-MA均能显著增强左旋棉酚的杀细胞效力。结论左旋棉酚可能通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬,抑制ERK介导的自噬能够显著增强左旋棉酚的抗瘤效应。; 倪振洪王滨丁雯程攀科连继勤何凤田; 关键词：左旋棉酚 BURKITT淋巴瘤自噬

毕赤酵母表达系统被引量：3: 2007年; 毕赤酵母表达系统是一种优秀的重组蛋白表达系统,近年来被广泛应用于重组蛋白的表达。现就巴斯德毕赤酵母表达系统的特点及其用于外源蛋白表达的基本策略作一综述。; 彭彦孟连继勤; 关键词：毕赤酵母重组蛋白

人层粘连蛋白α4链LG3-4组件的克隆和表达被引量：2: 2005年; 目的　利用基因工程技术获得重组人层粘连蛋白α4链LG3 4组件(humanlamininAlpha4LG3 4Module ,hLNα4LG3 4)蛋白并检测其抗原性。方法　采用RT PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG3 4的cDNA片段,T A克隆法将其插入pMD 18T载体进行测序。亚克隆法构建原核表达载体pET 2 8a LG3 4,在BL2 1(DE3 )中表达hLNα4LG3 4融合蛋白。融合蛋白经SDS PAGE鉴定、Ni NTA亲和层析纯化及Western印迹分析。结果　成功获得hLNα4LG3 4cDNA片段,与Gen Bank中序列同源性为98% ,突变碱基不改变蛋白的氨基酸序列。12 %SDS PAGE电泳检测显示:经IPTG诱导后BL2 1(DE3 ) /pET2 8a LG3 4细菌裂解液总蛋白中出现一条分子量为44×10 3的新蛋白带,纯化后目的蛋白纯度达95 %以上,且Western印迹可特异地检测到目的蛋白所对应转移带。结论　成功表达和纯化了hLNα4LG3 4蛋白,从而为研究LG组件在疾病发生过程中的作用及其功能位点打下了基础。; 戴旭芳连继勤张玉静胡仲明; 关键词：克隆

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