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谷雨妹
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供职机构:
北京协和医院
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发文基金:
卫生部卫生公益性行业科研专项
国家教育部博士点基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
张强
北京协和医院
马怡晖
郑州大学第一附属医院
卢朝辉
北京协和医院
陈杰
北京协和医院
赵武干
北京协和医院
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靶向泛素化降解K-Ras癌蛋白对胰腺癌细胞体内、外生长的影响
目的构建靶向泛素化降解K-Ras癌蛋白的融合型泛素连接酶E3并研究其对胰腺癌细胞体内、外生长的影响。方法构建融合型泛素连接酶E3表达载体,分别选取Raf-1(Ras下游效应分子)中能与Ras相结合的氨基酸序列及RING-...
谷雨妹
马怡晖
赵武干
张强
卢朝辉
陈杰
文献传递
靶向敲减Ras癌蛋白融合型泛素连接酶E3的构建
2012年
目的应用蛋白质敲减技术原理,构建理论上能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合型泛素连接酶E3的真核表达载体。方法选取Raf-1、PI3K、RalGDS中能够与Ras蛋白相互作用的结合结构域和具有泛素连接酶活性的F-Box及U-Box作为功能结构域,采用分子克隆技术依次将其连入pcDNA3.1中构建融合蛋白表达载体,双酶切、PCR和测序技术检测连入核苷酸片段的正确性,Western blot检测融合蛋白表达载体在真核细胞内表达的正确性和作用有效性。结果成功获得6个融合蛋白E3表达载体,5个能够在真核细胞内有效表达,其中(RBD+CRD)Raf-1-U-Box-pcDNA3.1能够敲减人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中Ras蛋白。结论成功构建能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合蛋白表达载体,为下一步应用蛋白质敲减技术奠定了实验基础。
马怡晖
张强
谷雨妹
卢朝辉
陈杰
关键词:
泛素
蛋白酶体
泛素连接酶
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