许运斌
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 供职机构：浙江大学动物科学学院更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 狂犬病病毒单质粒拯救系统的建立及应用被引量：3
- 2015年
- 旨在建立一种针对狂犬病病毒SAD L16株单质粒拯救的反向遗传操作系统。根据全长cDNA感染性克隆pSAD-L16 N、P和L基因上游序列的不同,分别设计多对引物将EMCVIRES序列、PV IRES序列和TaV 2A序列分别克隆入pSAD-L16载体的相应位置中,构建成5个重组狂犬病病毒全长cDNA克隆。在无需辅助质粒的情况下直接转染BSR T7/5细胞拯救病毒,并对拯救病毒进行生物学特性的鉴定和分析。结果表明,只有pSADNeNePeL和pSAD-NeNtPeL能够成功拯救出重组狂犬病病毒,获救病毒均高度致弱且增殖缓慢。获救的2株重组狂犬病病毒具有不同的遗传稳定性,表现出与野生型亲本毒株较大的差异。本研究首次建立起一种针对狂犬病病毒的单质粒拯救系统,为深入研究狂犬病病毒基因组结构与功能、分子致病机制以及狂犬病病毒与宿主相互作用等提供了一个基础的技术平台。
- 孙玉章何彪许运斌丛彦龙Karl-Klaus Conzelmann
- 关键词：狂犬病病毒反向遗传学
- 一步法Taqman荧光定量RT-PCR方法检测狂犬病病毒
- 为了建立能特异检测我国基因Ⅰ型狂犬病病毒（RABV）的核酸检测方法,针对我国RABV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了特异检测我国RABV的一步法Taqman荧光定...
- 许运斌邵明富范金红席进涂长春
- 关键词：狂犬病病毒
- 文献传递
- 狂犬病病毒磷蛋白在杆状病毒系统的表达及鉴定被引量：1
- 2012年
- 为了建立狂犬病毒磷蛋白(phosphoprotein,P)的体外表达系统,本研究将RT-PCR扩增的狂犬病病毒ERA株P蛋白基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA,构建重组质粒pFastBacHTA-P,并转染昆虫细胞Sf9包装形成重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示重组质粒pFastBacHTA-P转染的Sf9细胞中出现了分子量约为42 kDa的蛋白条带,Western blot证实分子量约为42 kDa的蛋白能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)分析进一步显示Sf9细胞表达的P蛋白与抗P蛋白单克隆抗体能特异性结合。这些实验证明,狂犬病病毒P蛋白不仅在Sf9细胞中获得表达,而且具有良好的免疫反应性。狂犬病病毒P蛋白杆状病毒表达体系的建立,为蛋白结构的解析和诊断试剂的研制奠定了基础。
- 许运斌徐洁萍张金阳昝洁阮系真周继勇
- 关键词：狂犬病病毒杆状病毒表达系统
- 动物狂犬病实验室诊断技术概况
- 狂犬病是由狂犬病病毒(RABV)引起的一种非常危险的人兽共患传染病。几乎所有温血动物都对该病毒易感,人感染狂犬病的根源在于动物狂犬病的发生。根据人狂犬病的流行病学调查,感染犬是我国人狂犬病的主要传染来源,有效控制犬狂犬病...
- 许运斌朱妍涂长春
- 关键词：狂犬病实验室诊断技术抗原检测病毒分离抗体检测
- 文献传递
- 狂犬病病毒荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒的评价及应用被引量：1
- 2012年
- 基于目前在我国人群和动物中流行的狂犬病病毒(RV)均属于基因Ⅰ型,在本室所建立的基因Ⅰ型RV荧光定量RT-PCR方法的基础上,组装了可以便捷使用的RV快速检测试剂盒。对4 577份临床样品的检测结果表明,该试剂盒的检测灵敏度达4.68个TCID50,与《狂犬病防治技术规范》规定的套式RT-PCR灵敏度相当,而且稳定性良好,可以冷冻保存8个月以上。所研制的荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,既适合单个临床样品的确诊,又适合RV流行病学监测的大规模筛查。
- 许运斌孙彦伟邵明富查云峰范金红席进朱妍涂长春
- 关键词：狂犬病病毒荧光定量RT-PCR试剂盒
- 基因1型狂犬病病毒一步法荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 目的在我国狂犬病均由基因1型狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起。本研究针对RV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了检测RV核酸的一步法荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。方法与结果该方法能特异检测基因1型,不能检测基因2-7型和犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病病毒(CAV)、水泡性口炎病毒(VSV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)等5种非狂犬病病原体,其检测灵敏度可达到4.68个TCID50的病毒含量。用该方法对29份新鲜和5份腐败的临床犬脑组织样品进行检测,并与国际金标准确诊方法狂犬病荧光抗体染色法(FAT)和乳鼠脑内接种试验(MIT)及本实验室建立的套式RT-PCR方法进行比较。结果表明所建立的qRT-PCR与套式RT-PCR的符合率为100%,二者均检测出12份阳性的新鲜样品和5份阳性的腐败样品,而FAT只检测出12份阳性的新鲜样品和1份阳性的腐败样品,MIT只检测出12份阳性,未检测出阳性腐败样品。检测中FAT和MIT确诊的所有阳性样品在qRT-PCR检测均是阳性,而在FAT检测为阴性的4份腐败样品在qRT-PCR为阳性,说明所建立的qRT-PCR方法准确性达到了FAT和MIT的水平,而且灵敏度更高,更适合于腐败样品的检测。结论研究结果表明该qRT-PCR方法特异性好、灵敏度高、污染率低、操作简单,在我国动物狂犬病临床诊断上具有巨大的应用价值。
- 许运斌邵明富范金红孙彦伟席进涂长春
- 关键词：狂犬病病毒
- 狂犬病病毒磷蛋白调控狂犬病病毒复制的分子机制研究
- 狂犬病病毒(Rabies virus，RABV)隶属于弹状病毒科(Rhabdovidae family)基因1型狂犬病病毒属成员病毒(Lyssavirus)，是人和动物狂犬病的病原体。如今世界范围内狂犬病病毒属的成员主要...
- 许运斌
- 关键词：狂犬病病毒磷蛋白病毒复制热休克蛋白90
- 文献传递
- 狂犬病病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒的研制与应用
- 本研究通过对GenBank公布的31株基因型1型狂犬病病毒(RV)N基因全序列进行同源性比较分析,选取序列中保守的区域设计了一对引物和一条Taqman探针,优化了反应体系和条件,建立了可特异针对RV的一步法荧光定量RT-...
- 许运斌
- 关键词：狂犬病病毒荧光定量RT-PCR试剂盒
- 文献传递
