詹诚
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 一种快速灵敏检测小分子RNA的方法
- 本发明公开了一种快速灵敏检测小分子RNA的方法，属于分子生物领域，包括以下步骤：（1）提取、纯化待检测小分子RNA；（2）探针设计：探针用生物素或地高辛进行标记；（3）液相杂交：将所述待检测小分子RNA与所述探针在缓冲液...
- 王胜华毛强詹诚
- 文献传递
- 麻疯树核糖体失活蛋白Curcin2的原核可溶性表达及其抗真菌活性研究被引量：1
- 2013年
- Curcin2是麻疯树幼苗在真菌侵染、干旱及高低温胁迫下诱导产生的一种核糖体失活蛋白。采用分子克隆的方法,从麻疯树基因组中扩增到Curcin2成熟肽编码基因,分别连接到质粒载体pGEX-6p-1、pMAL-c5E上,转化大肠杆菌最终获得重组菌PGC(pGEX-6p-1-curcin2)和PMC(pMAL-c5E-curcin2)。在不同温度、IPTG浓度、时间诱导下,Curcin2在重组菌PGC中均以包涵体形式表达,在重组菌PMC中主要以可溶性融合蛋白形式表达,且蛋白质的表达量与诱导条件相关。重组菌PMC表达可溶性curcin2的优化条件为:温度28℃,IPTG 0.3mmol/L,时间8h,此条件下目的蛋白占总蛋白表达量的30.6%,1L培养物中可获得19.74mg电泳纯的重组蛋白。重组蛋白可被MBP TrapTMHP柱亲和纯化并与curcin抗体发生抗原抗体反应。体外抗真菌活性实验表明,纯化后的curcin2融合蛋白有抑制真菌生长作用,且对小麦赤霉、油菜菌核的抑制作用强于curcin。此蛋白的获得为其相关功能的研究奠定了基础。
- 邵子静蒋楠晏华立詹诚徐莺陈放
- 关键词：麻疯树核糖体失活蛋白原核表达抗真菌活性
- 液相杂交快速检测特异DNA
- 2013年
- 检测特异DNA片段的方法中,传统Southern blot技术由于其高度可重复性及能够显示条带大小的特性,一直是DNA检测的"黄金标准"。但是杂交时间长,步骤复杂,放射性污染等问题亟待解决。为了简化Southern blot,研究使用了一种液相杂交快速检测DNA的方法,即使用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的dUTP掺入探针后,在溶液中与待检测DNA样本42℃下杂交,然后琼脂糖凝胶电泳检测荧光杂交信号。利用质粒为模板,优化了探针制作、杂交液组成、杂交时间和温度等参数。在FITC-dUTP:dTTP比例为1∶3、模板质粒浓度为50μg、1×杂交缓冲液(25mmol/LTris,10mmol/L EDTA,8mmol/L Nacl,PH=8.0)中95℃变性5～9 min和42℃杂交3h的实验条件下,可检出1.2μg的质粒,探针灵敏度为7.3ng/μl。这种方法不需要转膜,曝光,大大节约了时间,简化了操作,荧光检测也为该方法同时检测多色样本提供了可能,可广泛应用于核酸检测。
- 詹诚毛强王胜华陈放
- 关键词：SOUTHERNBLOTDNA检测
- 一种快速灵敏检测小分子RNA的方法
- 本发明公开了一种快速灵敏检测小分子RNA的方法，属于分子生物领域，包括以下步骤：（1）提取、纯化待检测小分子RNA；（2）探针设计：探针用生物素或地高辛进行标记；（3）液相杂交：将所述待检测小分子RNA与所述探针在缓冲液...
- 陈放李佛生毛强詹诚唐琳
- 文献传递
