蔡江丽 作品数:9 被引量:15 H指数:3 供职机构: 上海市肺科医院 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 上海市科学技术委员会科研基金 上海市公共卫生重点学科建设项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
结核分枝杆菌分泌蛋白64抗体适体的获得及血清学检测 被引量:8 2010年 指数级富集配体的系统进化 ( systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX) 技术筛选的适体具有可体外合成、纯度高、稳定性强和易于保存等特点,并已用于检测多种靶物质。目前利用适体检测MTB分泌蛋白64(MPT64)及模拟胸腔积液中γ干扰素含量已有报道,由于MPT64是结核病血清学诊断的重要抗原之一, 蔡江丽 秦莲花 刘忠华 郑瑞娟 金瑞良 胡忠义关键词:血清学检测 分泌蛋白 结核分枝杆菌 适体 抗体 MPT64 结核患者血清IgG抗体适配子及其制备方法 本发明提供了一种结核患者血清IgG抗体适配子,其序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示的核苷酸序列及其制备方法。本发明的结核患者血清IgG抗体DNA适配子亲和性、特异性高,其用于血清学检测能... 秦莲花 胡忠义 杨华 刘忠华 蔡江丽文献传递 一种结核分枝杆菌MPT64抗原的模拟表位肽及其应用 本发明属于医药技术领域,具体涉及一种能模拟结核分枝杆菌MPT64抗原的表位肽,以及该表位肽在结核病血清学检测中的应用。该表位肽的氨基酸序列通式为:X<Sub>1</Sub>DSMLX<Sub>2</Sub>X<Sub>3... 杨华 张丽婷 胡忠义 刘忠华 秦莲花 蔡江丽文献传递 MPT64抗体的适体在结核病血清学检测中的应用 被引量:3 2010年 目的 利用SELEX技术筛选MPT64抗体的适体建立混合夹心ELISA检测体系,应用于临床血清标本的检测,探讨该方法 潜在的实验室诊断价值.方法 利用竞争ELISA检测方法 ,测定不同浓度的MPT64抗原对最后一轮ssDNA文库与靶物质亲和力的抑制率,选取优势序列且亲和性值较高的适体用于检测,优化混合夹心ELISA检测方法 ,确定MPT64抗体的检测下限和线性范围,同时检测230例临床血清标本.结果 在竞争ELISA结果 中,总反应体系为100μl,MPT64抗原浓度由2μg/ml增加到256 μg/ml时,对ssDNA文库的抑制率也由0.25%增加到80%.优化的混合夹心ELISA的检测体系:ssDNA包被浓度为0.1μg/孔、血清稀释度为1/200、辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体浓度为1/40 000.MPT64抗体的检测下限为3 mg/L,线性范围为10~1000 mg/L.利用该体系检测100例结核病患者、100例健康体检者和30例非结核病患者血清,检测结果 用GraphpadPrism软件进行分析,结核病组与健康体检组、结核病组与非结核疾病对照组差异均具有统计学意义(P〈0.001).统计学分析得到检测的特异性与敏感性分别为96.1%和31.0%.结论 利用适体建立的混合夹心ELISA用于结核病的血清学诊断具有一定的诊断价值. 蔡江丽 秦莲花 刘忠华 王洁 胡忠义关键词:SELEX 适体 SSDNA 血清学检测 结核患者血清IgG抗体适配子及其制备方法 本发明提供了一种结核患者血清IgG抗体适配子,其序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示的核苷酸序列及其制备方法。本发明的结核患者血清IgG抗体DNA适配子亲和性、特异性高,其用于血清学检测能... 秦莲花 胡忠义 杨华 刘忠华 蔡江丽文献传递 一种结核分枝杆菌MPT64抗原的模拟表位肽及其应用 本发明属于医药技术领域,具体涉及一种能模拟结核分枝杆菌MPT64抗原的表位肽,以及该表位肽在结核病血清学检测中的应用。该表位肽的氨基酸序列通式为:X<Sub>1</Sub>DSMLX<Sub>2</Sub>X<Sub>3... 杨华 张丽婷 胡忠义 刘忠华 秦莲花 蔡江丽文献传递 指数富集配体的系统进化技术在结核病研究中的进展 2010年 指数富集配体的系统进化( systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)技术是20世纪90年代发展起来的一项新型组合化学技术…。经过十余年的发展,SELEX技术已成为一种重要的研究手段和工具,并广泛应用于分子生物学、基因组学和临床医学等众多研究领域。近年来,SELEX技术也被应用于结核病的研究领域,为探究结核病的致病机制及诊断、治疗技术提供新的有效方法。 蔡江丽 秦莲花 胡忠义关键词:结核病 进化 配体 SELEX技术 结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原模拟表位的筛选研究 被引量:4 2010年 MTB分泌蛋白64(MPT64)是MTB重要的保护性抗原,也是结核病血清学诊断的理想抗原之一.然而目前报道MPT64抗原对血清标本的直接检出率较低.20世纪80年代兴起的噬菌体展示随机肽库(phage display peptide library)技术是一种快捷、高效分析蛋白分子间相互作用的工具[3],尤其适于筛选生物活性大分子的配体. 张丽婷 胡忠义 李连青 刘忠华 秦莲花 蔡江丽 杨华关键词:抗原模拟表位 分泌蛋白 结核分枝杆菌 DISPLAY PEPTIDE 分枝杆菌简单序列重复区间分型方法的研究 被引量:2 2008年 目的构建分枝杆菌简单序列重复区间(inter-simple sequence repeat,ISSR)分型系统,为结核分枝杆菌的基因分型、菌种鉴定以及流行病学的研究提供新的研究工具和研究思路。方法根据结核分枝杆菌基因组中简单重复序列(SSR)的丰度和频率,设计用于分枝杆菌基因分型的ISSR引物,以分枝杆菌属的DNA为材料,分析DNA浓度、Mg^2+浓度、dNTP浓度、Taq酶的含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响,构建分枝杆菌的ISSR分型体系,并通过该体系筛选获得扩增结果稳定、多态性强的引物。结果经过优化实验建立了分枝杆菌ISSR-PCR最佳反应体系,20μl的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为:10ng模板DNA,1U Taq酶,0.5μmol/L引物,1.5mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTPs。利用该反应体系从10个ISSR引物中,筛选出了3个稳定性高、重复性好的引物,对分枝杆菌属28个菌种的标准菌株及52株结核分枝杆菌临床分离株进行了ISSR遗传多样性分析。结果显示,28个分枝杆菌菌种,除了结核和牛分枝杆菌之间具有较高的相似性,两两之间存在着高度的遗传多样性;52株结核分枝杆菌菌株在用ISSR进行分型时,大部分菌株表现出了较高的遗传相似性。结论建立了分枝杆菌属的ISSR分型体系。 秦莲花 范超 郑瑞娟 刘忠华 王洁 蔡江丽 胡忠义关键词:分枝杆菌