蒋永林
- 作品数：7 被引量：13H指数：3
- 供职机构：南华大学医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅资助项目湖南省教育厅科研基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因的真核表达载体,为探讨HBV X基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系提供实验依据。方法用PCR方法扩增含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的X基因序列,对pcDNA3.1(+)载体及X基因PCR产物双酶切,用连接酶将两者连接并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建HBV X基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx。用梭华-SofastTM基因转染试剂将其质粒转染THP-1巨噬细胞,细胞裂解液经SDS-PAGE及转硝酸纤维素膜后做Western blotting,鉴定目的蛋白。结果双酶切pcDNA3.1(+)-HBx后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为5.4 kb和465 bp片断,说明X亚克隆入pcDNA3.1(+),经序列测定其含有完整的X基因片段;Western blotting结果显示pcDNA3.1(+)-HBx能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx,并能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白。
- 王静蒋永林李金丽蔡恒玲万艳平
- 关键词：X基因X蛋白真核表达
- 病毒感染对树突细胞表型及功能影响的研究进展
- 2005年
- 树突细胞是目前发现的功能最强的抗原呈递细胞,在机体抗微生物免疫应答中具有重要作用.病毒感染机体后可以多种方式对树突细胞的表型及功能产生极为复杂的影响:上调或下调其表面共刺激分子,特征性成熟分子及主要组织相容性复合物Ⅰ、Ⅱ类分子等的表达,并影响树突细胞细胞因子的分泌及其刺激同种异体T细胞增殖的能力,进而影响机体的抗病毒免疫应答.
- 蒋永林万艳平李双杰
- 关键词：病毒感染细胞表型主要组织相容性抗原呈递细胞T细胞增殖共刺激
- 人乳头瘤病毒16型E6蛋白真核表达载体的构建及表达被引量：5
- 2006年
- 目的构建在哺乳动物细胞中表达的人乳头瘤病毒16型早期蛋白6真核表达载体pcD-NA3.1(-)/E6,为研究HPV16 E6蛋白在细胞永生化作用中的机制奠定实验基础。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增E6基因。将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白斑筛选、双酶切鉴定及序列分析后,亚克隆至pcDNA3.1(-)真核表达载体中;阳性克隆经双酶切鉴定后转染RAW264.7巨噬细胞,Western blotting鉴定其在RAW264.7细胞中的表达。结果重组载体经酶切、PCR及测序证明插入片断序列正确无误,转染RAW264.7细胞后可在细胞中表达HPV16 E6蛋白。结论成功构建的HPV16 E6真核表达载体pcDNA3.1(-)/E6能在RAW264.7细胞中表达E6蛋白。
- 蒋永林王静王鑫余敏君万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒16型真核表达
- 人乳头瘤病毒16型E6蛋白真核表达载体pGADT7-E6的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建HPV16 E6基因的真核表达载体,为在酵母菌中表达以及进一步探讨HPV16E6基因与宫颈癌发生的关系奠定前期实验基础。方法用PCR扩增含EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的E6基因序列,双酶切pGADT7载体与E6基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶将二者连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建HPV16 E6基因的真核表达载体pGADT7-E6。结果双酶切pGADT7-E6后,琼脂糖凝胶电泳显示2个片段,分别在约500 bp与8.0 kb处。DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒含有477 bp的目的基因片段,读码框正确,无碱基错配和移码突变。结论成功构建了HPV16 E6基因真核表达载体pGADT7-E6。
- 周艺王鑫朱翠明蒋永林粟盛梅尹卫国万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒E6基因E6蛋白
- HBV X蛋白即时高表达上调巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β被引量：2
- 2007年
- 目的:将乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染巨噬细胞,观察X蛋白即时高表达对巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-1β的影响,为进一步研究HBVX蛋白的致病机制奠定实验基础。方法:将真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx通过SuperFectTM脂转染试剂转染巨噬细胞24小时后,用LPS刺激巨噬细胞,利用Westernblot鉴定X蛋白在巨噬细胞中的表达,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测pcDNA3.1(+)-HBx转染的巨噬细胞不同时间(12、24、48小时)培养上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β的含量,统计软件SPSS13.0分析所得数据。结果:将真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染巨噬细胞,Westernblot结果显示pcDNA3.1(+)-HBx能在巨噬细胞中表达约17kD的目的蛋白,即X蛋白;ELISA法测定细胞上清液中TNF-α、IL-1β的含量,LPS刺激组及pcDNA3.1(+)组与空白对照组有显著性差异(P<0.01),pcDNA3.1(+)-HBx组与LPS刺激组及pcDNA3.1(+)组有显著性差异(P<0.01),而LPS刺激组与pcDNA3.1(+)组无显著性差异(P>0.05),即LPS可活化巨噬细胞分泌细胞因子,且X蛋白即时高表达可引起LPS诱导的巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β明显增加。结论:乙型肝炎病毒X蛋白即时高表达上调LPS刺激的巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β。
- 王静蒋永林余敏君蔡恒玲李金丽万艳平
- 关键词：X蛋白巨噬细胞TNF-ΑIL-1Β
- 人乳头瘤病毒16型E6蛋白高表达下调LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β被引量：3
- 2008年
- 目的将人乳头瘤病毒16型(HPV 16)E6蛋白真核表达载体pcDNA3.1(-)/E6转染巨噬细胞,观察E6蛋白瞬时高表达对LPS诱导的THP-1巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β的影响,为进一步研究HPV16E6蛋白的致病机制奠定实验基础。方法将质粒pcDNA3.1(-)/E6通过SuperFectTM脂转染试剂转染巨噬细胞24h后,用LPS刺激巨噬细胞,利用Western-blotting鉴定E6蛋白在巨噬细胞中的表达,ELISA检测pcDNA3.1(-)/E6转染的巨噬细胞不同时间(12、24及48h)培养上清液中TNF-α与IL-1β的含量,统计软件SPSS12.0分析所得数据。结果Western-blotting结果显示pcDNA3.1(-)/E6能在巨噬细胞中表达约18kD的目的蛋白,即E6蛋白;pcDNA3.1(-)/E6+LPS组培养上清中TNF-α与IL-1β的量明显低于巨噬细胞+LPS组和pcDNA3.1(-)+LPS组,pcDNA3.1(-)/E6+LPS组与巨噬细胞+LPS组和pcDNA3.1(-)+LPS组比较,差异具有显著性(P<0.01)。结论HPV16E6蛋白瞬时高表达下调LPS诱导的THP-1巨噬细胞分泌TNF-α与IL-1β。
- 陈春莲蒋永林朱翠明王鑫尹卫国彭俊万艳平
- 关键词：E6蛋白巨噬细胞TNF-ΑIL-1Β
- 人乳头瘤病毒16型E6蛋白真核表达及对巨噬细胞分泌功能与凋亡的影响
- 目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) E6蛋白真核表达载体pcDNA3.1(-)/E6,研究E6蛋白瞬时高表达对LPS诱导的THP-1巨噬细胞细胞因子分泌及地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡的影响,为进一步研究E6蛋白在H...
- 蒋永林
- 关键词：分泌功能细胞凋亡致癌机理
- 文献传递
