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负载肺癌抗原DC疫苗抗肿瘤免疫实验被引量：5: 2008年; 目的探讨负载人肺癌细胞株A549冻融抗原DC疫苗体外抗肿瘤免疫效应。方法自脐血分离单核细胞,经rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α诱导树突状细胞(DC),负载人肺癌细胞株A549冻融抗原、LPS诱导成熟,利用免疫磁珠分选获得功能性肺癌DC疫苗(UbDC/AgL),ELISA测定UbDC/AgL培养上清中细胞因子浓度、LDH法测定特异性细胞杀伤(CTL)活性及MTT法检测自身混合淋巴细胞反应(AMLR)。结果UbDC/AgL细胞组IL-1、IL-12、IL-6和IFN-β含量明显高于UbDC/Ag和UbDC组(P<0.01);UbDC/AgL疫苗细胞能有效诱导肿瘤特异性CTL活性,对A549细胞有特异性杀伤作用(P<0.01),并能有效促进淋巴细胞增殖。结论负载肿瘤冻融抗原DC疫苗,能有效激活T淋巴细胞进而诱导肿瘤特异性杀伤效应。; 张洁林苹陆燕蓉王琪宁其志; 关键词：树突状细胞肿瘤抗原疫苗抗肿瘤免疫

SOCS3与LIGHT在诱导DC分化成熟中的相互作用: 2007年; 目的探讨SOCS3与LIGHT在刺激树突状细胞(DC)分化成熟过程中的相互作用。方法用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导培养小鼠骨髓单核细胞产生骨髓来源树突状细胞(BMDC)。RT-PCR、Western blot检测受LIGHT刺激后BMDC中SOCS3 mRNA及SOCS3蛋白表达的时间动力学;利用反义核苷酸技术抑制SOCS3的表达,通过流式细胞术测定BMDC表面分子CD40、CD86的表达水平。结果LIGHT刺激后,BMDC的SOCS3 mRNA水平有不同程度增高(P<0.05),并呈双峰度变化(分别出现在LIGHT刺激后2h和10h,增高幅度分别为92%和83%,其蛋白表达亦有所增加(LIGHT刺激24h后表达量增加80%,P<0.05);反义寡核苷酸能阻断SOCS3的表达,其对mRNA和蛋白表达的抑制率分别为49%和45%;经反义寡核苷酸处理后的BMDC在LIGHT刺激下其CD40、CD86表达均升高(P<0.05)。结论LIGHT在刺激BMDC分化成熟过程中同时上调了SOCS3的表达;阻断SOCS3能使BMDC对LIGHT的反应更敏感,从而促使BMDC成熟度更高;SOCS3对LIGHT诱导的BMDC分化成熟有负反馈调节作用。; 林苹张洁王琪陆燕蓉王修杰熊竹娟杨洪亮任婧婧; 关键词：LIGHT SOCS3 树突状细胞分化成熟

SOCS1对LIGHT诱导的骨髓来源DC分化成熟的影响被引量：3: 2005年; 为探讨SOCS1是否参与LIGHT诱导的骨髓来源树突状细胞(BmDC)分化成熟,及其在此过程中的作用。RT-PCR检测受LIGHT刺激后小鼠BmDC、小鼠脾脏来源树突状细胞(sDC)中SOCS1mRNA水平及BmDCSOCS1mRNA水平的时间动力学;利用反义核苷酸技术抑制SOCS1的表达,通过流式细胞术(FACS)测定BmDC表面分子CD40、CD86的表达水平来分析阻断SOCS1对LIGHT诱导的BmDC分化成熟的影响。结果显示LIGHT刺激后,BmDCSOCS1mRNA水平迅速增高,并呈峰度变化,在4h时达到高峰;正常无SOCS1mRNA表达的sDC在加LIGHT后可检测到SOCS1mRNA;所设计SOCS1反义寡核苷酸能特异阻断SOCS1mRNA;在LIGHT作用下,SOCS1抑制组较非抑制组的CD40表达明显升高(P<0.05),CD86呈中度升高(P<0.05)。LIGHT在刺激BmDC分化成熟过程中上调了SOCS1的表达,阻断SOCS1使BmDC对LIGHT的反应更敏感,从而使BmDC成熟度更高;SOCS1对LIGHT诱导的BmDC分化成熟有负反馈调节作用。; 王琪林苹张洁陆燕蓉王修杰宁其志熊竹娟王静; 关键词：LIGHT SOCS1 树突状细胞

小鼠编码锌指蛋白基因zfp637的初步研究被引量：1: 2008年; 目的观察zfp637基因对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法半定量RT-PCR检测zfp637基因在小鼠正常组织与肿瘤细胞株中的表达。设计并合成4对小分子双链RNA，半定量RT-PCR筛选最佳干扰效应位点。将siRNA转染EMT6细胞，转染后144d进行细胞增殖实验。结果zfp637在多数正常组织呈低到中度表达，外周血单个核细胞未见表达。在小鼠肝癌H22，小鼠肝癌细胞Hepal-6，Lewis肺癌LL／2，黑色素瘤细胞B16，淋巴瘤细胞Yac-1和乳腺癌细胞EMT6中均呈现高表达。筛选后表明siRNA-881为最佳干扰效应位点。细胞增殖实验（MTT）显示：转染siRNA后第4d，实验组EMT6细胞增殖明显低于阴性对照组，143d实验组细胞增殖与阴性组相差不明显。结论zfp637基因在不同正常组织和肿瘤细胞株中表达水平不同。zfP637很可能是促进细胞增殖的正调控因素。下调该基因表达能抑制EMT6肿瘤细胞增殖。; 任婧婧张洁刘凯王修杰杨洪亮王琪熊竹娟吴亚英高艳萍林苹; 关键词：肿瘤细胞细胞增殖

Na^+,K^+-ATP酶β_1亚基与肿瘤细胞生长相关性被引量：6: 2007年; [目的]探讨Na+,K+-ATP酶β1亚基(ATP1B1)与肿瘤细胞增殖分化的关系,以及外源性ATP1B1对肿瘤细胞的影响。[方法]采用RT-PCR检测肿瘤细胞株、正常外周血单核细胞中ATP1B1的mRNA水平,以及经脂多糖(LPS)促进细胞增殖、二甲亚砜(DMSO)诱导肿瘤细胞分化后ATP1B1的mRNA水平变化,并观察通过转染技术增加肿瘤细胞中ATP1B1表达后细胞的生长情况。[结果]肿瘤细胞株中ATP1B1的mRNA水平明显高于正常单核细胞(P<0.05),促进细胞增殖后细胞中ATP1B1的mRNA水平增高(P<0.05),诱导分化后降低(P<0.05),导入外源性ATP1B1使肿瘤细胞增殖明显受抑(P<0.05)。[结论]Na+,K+-ATP酶β1亚基可以成为反映细胞功能状态特别是肿瘤细胞增殖代谢的重要指标,为肿瘤生物治疗的新策略提供重要的实验依据。; 熊竹娟林苹张洁王修杰王琪任婧婧杨洪亮王静吴亚英; 关键词：NA^+肿瘤细胞增殖诱导分化

无花果果浆对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡作用被引量：14: 2006年; 为了探讨无花果果浆(Fig fruit latex,FFL)对人肿瘤细胞的生长抑制作用及其机制,用无花果果浆处理体外培养的人肿瘤细胞,细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验研究FFL对人肿瘤细胞的增殖抑制作用,Brdu掺入试验、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色、流式细胞术检测FFL对肿瘤细胞DNA合成、凋亡和细胞周期的影响。结果,用FFL处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P<0.05),克隆形成下降(P<0.05),Brdu标记指数降低(P<0.05),吖啶橙染色凋亡细胞增多(P<0.05);细胞周期分布改变,凋亡指数升高(P<0.01),G0/G1期细胞数增加(P<0.01),S期细胞数减少(P<0.01),在一定剂量内对正常细胞无明显影响。试验结果提示,FFL对所试肿瘤细胞的增殖有显著地抑制作用,其作用机理可能与抑制肿瘤细胞DNA合成,诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞有关。; 王静王修杰林苹张洁王琪熊竹娟吴亚英任婧杨洪亮; 关键词：人肿瘤细胞增殖抑制凋亡

ATP1B1真核表达质粒的构建及其对胃腺癌SGC-7901细胞的作用被引量：2: 2008年; 目的构建Na+,K+-ATP酶β1亚基(ATP1B1)真核表达质粒,为利用ATP1B1进行肿瘤基因治疗奠定基础。方法以白细胞文库为模板扩增ATP1B1 cDNA,定向插入到pEGFP-C3真核表达质粒中,构建pEGFP-ATP1B1重组质粒;经酶切分析和测序鉴定后,通过脂质体介导转染胃腺癌SGC-7901细胞,利用real-time PCR检测转染后SGC-7901细胞的ATP1B1基因表达,并进行其ATP酶活性检测;MTT法测定转染后SGC-7901细胞的增殖活性。结果重组质粒经鉴定证实含有ATP1B1 cDNA序列,转染pEGFP-ATP1B1的SGC-7901细胞ATP1B1基因表达增高达129.2%,ATP酶活性增强为(2.95±0.210)%,细胞生长增殖显著受抑。结论成功构建了ATP1B1真核表达质粒,为进一步利用ATP1B1研究恶性肿瘤基因治疗奠定基础。; 熊竹娟林苹张洁王修杰王琪任婧婧杨洪亮王静吴亚英; 关键词：转染肿瘤基因治疗

SOCS1受抑的新型肝癌树突状细胞疫苗制备及功效的初步研究: 2008年; 目的探讨抑制SOCS1表达对LIGHT激活的肝癌树突状细胞疫苗效应的作用。方法用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导培养小鼠骨髓单核细胞产生骨髓来源树突状细胞(BMDC),体外负载肝癌细胞HepA可溶性抗原,并用LIGHT和SOCS1反义寡核苷酸(AS1)处理DC,制备负载肝癌抗原DC疫苗;流式细胞仪检测疫苗细胞CD40及CD86表达和ELISA测定其IL-12、IL-1分泌水平以确定DC疫苗细胞的成熟度;通过体外细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性、淋巴细胞增殖反应和IL-6、TNF-β分泌水平测定分析疫苗细胞的抗肿瘤免疫应答。结果负载肝癌抗原DC疫苗在LIGHT和AS1的双重作用下,疫苗细胞的成熟标志CD40、CD86、IL-1和IL-12增高(P<0.01),能增强诱导CTL活性、刺激淋巴细胞增殖和分泌IL-6、TNF-β能力(P<0.01)。结论抑制SOCS1能提高肝癌DC疫苗的成熟度,并增强疫苗细胞诱导抗肿瘤免疫应答。; 刘战培张洁林苹王修杰王琪; 关键词：肝癌树突状细胞疫苗

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王琪

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