王俊梅
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 供职机构：北京大学更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 人端粒酶hTERT抗体制备、鉴定及在肿瘤检测中的应用被引量：13
- 2002年
- 目的 人端粒酶蛋白亚基 (hTERT)单克隆抗体制备及肿瘤检测应用。方法 利用多肽固相合成法 (Fmoc法 )合成hTERT抗原多肽 ,免疫BALB/c小鼠 ,以杂交瘤法制备单克隆抗体。应用ELISA ,Westernblot和免疫组织化学ABC法进行鉴定和肿瘤检测。结果 经合成得到hTERT抗原多肽hTERT9,免疫小鼠及细胞融合后得到抗hTERT9杂交瘤细胞 ;经 3次有限稀释法及ELISA筛选获得抗hTERT9单克隆抗体的杂交瘤细胞H4、G8和A11;H4、G8为IgM类 ,而A11为IgG1。半抗原竞争性抑制实验证明为hTERT9特异性单克隆抗体 ;相对亲和力实验发现G8株亲和力较H4株和A11株强。用H4及G8株单克隆抗体检测HeLa、2 93细胞 ,免疫印迹有特异相对分子质量≈ 12 30 0 0hTERT条带 ,免疫组织化学显示为细胞核着色 ,而正常细胞 2BS无阳性反应。免疫组织化学方法检测人癌组织、癌前病变、良性病变hTERT表达发现 :人肿瘤组织细胞阳性率为 80 31% (10 2 / 12 7) ,且大多为中度阳性和强阳性 ;癌前病变中 ,hTERT有 17 5 % (7/ 4 0 )弱阳性 ;良性肿瘤均为阴性。统计学分析表明 :hTERT在癌组织的表达显著高于癌前及良性病变 (P <0 0 1)。结论 通过固相合成hTERT抗原多肽和杂交瘤技术成功制备抗人端粒酶蛋白亚基hTERT单克隆抗体 ,并能运用于免疫印迹。
- 杨邵敏张波王俊梅廖松林韩继生卫建平侯琳
- 关键词：端粒末端转移酶肿瘤端粒酶
- 基于分子间相互作用的药物分子设计
- 王俊梅
- 关键词：药物分子设计
- 抗人端粒酶蛋白亚基单域抗体制备和鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 研制抗人端粒酶逆转录酶 (hTERT)蛋白亚基单域重组抗体。方法 以重组His taghTERT融合蛋白为抗原免疫小鼠 ,以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增小鼠脾细胞重链可变区 ;经克隆噬菌粒载体pCANTAB 5E及转染大肠杆菌建立噬菌体抗体展示文库 ,经过亲和性富集选择阳性克隆 ,并于大肠杆菌 (E .coli.HB2 15 1)中表达为可溶性单域抗体 ;Westernblot确定单域抗体结合特性。结果 以RT PCR扩增His taghTERT免疫小鼠脾细胞RNA ,得到 35 0bp小鼠重链可变区DNA片段 ;通过克隆及转染制备出噬菌体展示抗体文库 ,文库大小是 8× 10 4 ;经过抗原 抗体亲和性筛选 ,得到 4个克隆 ,并表达为可溶性单域抗体 (相对分子质量 16 0 0 0 ) ;WesternBlot分析显示 :其中 2个克隆的可溶性单域抗体可特异性结合His taghTERT融合蛋白 (相对分子质量 16 70 0 ) ,与His tag无关 ;与人癌细胞表达的天然hTERT蛋白 (相对分子质量 12 70 0 0 )分析亦显示其特异性结合能力。DNA序列分析证实可溶性单域抗体为小鼠抗体重链可变区VH基因编码。结论 利用噬菌体展示技术已初步制备出小鼠重链可变区编码的抗hTERT蛋白的特异单域抗体 ,为进一步探索其抑制端粒酶活性及抗肿瘤作用奠定了基础。
- 张徽张波王俊梅刘承韩继生杨邵敏侯琳
- 关键词：单克隆抗体噬菌体HTERT
- 药用天然产物反向研究途径
- 徐筱杰陈丽蓉乔学斌侯廷军朱丽荔王俊梅谢建春骆宏鹏章威李正全
- 据估计在全球范围，植物约42万种，药用植物约5万种以上，我国的中药植物约11000种，理论估计天然产物可能达百万种，迄今已知的约20万种，其中来自植物的约10余万种。药用植物中已经系统研究的植物不足10%。传统的药用天然...
- 关键词：
- 关键词：植物药用
- 端粒酶单克隆抗体的制备及分子改造
- 该研究利用多肽固相合成法（Fmoc法）合成端粒酶hTERT抗原寡肽hTERT<,7>，免疫BALB/c小鼠，以杂交瘤法制备单克隆抗体.应用ELISA和免疫组织化学方法进行抗体特性鉴定和肿瘤端粒酶检测;TRAP-ELISA...
- 王俊梅
- 关键词：端粒酶HTERT单克隆抗体内在化
