游雷鸣
- 作品数：18 被引量：60H指数：6
- 供职机构：北京中医药大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 大肠杆菌JM109感受态形成因素分析被引量：6
- 2007年
- 目的：分析大肠杆菌JM109感受态形成因素,提高转化效率。方法：采用不同生长状态、不同转化溶液、不同保存时间及热激处理时间的细菌制备感受态,分析转化效率。结果：以20mmol/L MgCl2＋80mmol/L CaCl2为处理液,经活化培养OD600为0.82的菌液制备感受态细胞,4℃放置12-24h之内,42℃热激处理60s,转化效率最高,可达9.8×10^6-1.2×10^7cfu/μg DNA（pUC19）。随着质粒长度增加,转化效率下降。结论：感受态细胞形成与生长状态关系密切,金属离子、有机溶剂对感受态的形成影响显著。感受态形成过程中,细胞可能发生了一系列的生理变化。
- 游雷鸣翁海波韩绍印席宇孙春花
- 关键词：感受态细胞
- 小檗碱(黄连素)对流感病毒感染的小鼠肺泡巨噬细胞NLRP3炎性复合体的影响
- 目的:探究小檗碱对流感病毒感染的小鼠肺泡巨噬细胞NLRP3炎性复合体主要组分分子的表达以及炎性体活性的影响.方法:以A型流感病毒A/PR/8/34 (H 1N1)体外感染小鼠巨噬细胞(RAW264.7)为模型,分别设正常...
- 游雷鸣陈丹军任睿芳李晓瑞迟佳琦郝钰
- 关键词：流感病毒小檗碱
- PRRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化被引量：4
- 2011年
- 从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T载体。基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化。SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40 kD的融合蛋白;使用1.0 mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8 h可获得最大表达量。
- 刘明张改平肖治军郭军庆乔松林王丽史西保刘运超游雷鸣王爱萍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征反转录克隆WESTERN-BLOT
- 新霉素人工抗原的合成与鉴定被引量：6
- 2008年
- 用水溶性碳化二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(O-VA),合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE法进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-NEO的红外光谱与BSA相比发生了改变,BSA-NEO的电泳条带与BSA的相比出现了明显的拖尾现象;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为NEO残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 张改平刘宣兵彩鸿翔邓瑞广游雷鸣赵东侯玉泽
- 关键词：新霉素人工抗原
- 小檗碱对流感病毒感染的巨噬细胞NLRP3炎性体介导的Caspase-1活化以及IL-1β和IL-18的影响
- 目的：探究小檗碱(黄连素)对流感病毒感染的巨噬细胞NLRP3炎性复合体介导的Caspase-1前体(proCaspase-1)活化，以及促炎细胞因子前体(proIL-1β和proIL-18)产生和成熟的影响。
- 任睿芳李晓瑞陈丹军游雷鸣吴珺郝钰
- 关键词：流感病毒小檗碱巨噬细胞
- 沙丁胺醇人工抗原的合成与鉴定被引量：8
- 2008年
- 通过沙丁胺醇(SAL)与琥珀酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,用EDC法将SAL琥珀酸衍生物偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SAL和包被原OVA-SAL,用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SAL免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-SAL的UV与BSA、SAL的相比发生了改变;通过UV分析,SAL-HS与BSA的分子结合比约为7.2∶1;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 刘宣兵张改平邓瑞广侯玉泽王自良刘庆堂游雷鸣柴书军
- 关键词：沙丁胺醇人工抗原
- 人FcγRⅠ受体胞外区基因的克隆、原核表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨人FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白的原核表达纯化及其在体外与IgG的结合活性。方法:PCR方法从人的外周血白细胞中扩增出huFcγRⅠORF区全长基因并与T载体链接,从克隆载体huFcγRⅠ-T中扩增huFcγRⅠ胞外区基因,并将其装入原核表达载体pGEX-6p-1。构建好的载体转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白表达,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:扩增到了huFcγRⅠ的胞外区基因,所构建的pGEXhuFcγRⅠ重组质粒经PCR和酶切鉴定与预期一致。IPTG诱导下目的蛋白的表达率约为30%。SDS-PAGE结果显示表达的目的相对分子质量(Mr)56 700与理论预期值一致。West-ern blot结果显示原核表达的huFcγRⅠ胞外区蛋白与人IgG特异亲和。结论:FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白在原核表达系统中得到有效的表达,复性蛋白在体外与人的IgG特异结合。
- 苗现伟刘玺张改平席俊张利娜刘运超游雷鸣赵玉军
- 关键词：原核表达
- 一种猪-鼠B细胞杂交瘤的制备方法
- 2009年
- 目的:探索一种异源杂交瘤细胞株建立的方法.方法:以CSFV分点肌肉注射健康猪,成功诱导机体产生抗CS-FV的抗体.取免疫猪脾脏与鼠骨髓瘤细胞NS0融合,经筛选与克隆以获得猪源抗CSFV的mAb,并测定mAb的中和性及其效价.结果:成功筛选到15株抗CSFV的猪源mAb,中和实验结果表明9株mAb具有中和性,且同样识别重组的E2蛋白.结论:猪源mAb的成功制备为揭示CSFV在猪体内的免疫机制奠定了基础.
- 李姣郭建英王爱萍邓瑞广张淑杰游雷鸣
- 关键词：CSFVE2蛋白原核表达
- 截断疗法与常规疗法抑制流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎症作用的比较被引量：11
- 2016年
- 目的比较"截断疗法"和"常规疗法"对流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎症反应的作用,以研究"截断疗法"优于"常规疗法"的作用机制,及与病毒感染后机体发生的炎症级联反应间的关系。方法 Balb/c小鼠192只,分为正常组、模型组、常规疗法组和截断疗法组,以50μL 30 LD50流感病毒鼠肺适应株FM1病毒液滴鼻感染后1 h灌胃给药。正常组和模型组以蒸馏水灌胃;常规疗法组第1、2、3天以银翘散水煎剂灌胃,第4、5、6、7天以犀角地黄汤水煎剂灌胃;截断疗法组第1~7天以犀角地黄汤合银翘散水煎剂灌胃;每日给药2次,共给药7 d。以上处理的小鼠分别于第2、4、6、8天摘眼球放血处死并取材、检测。观察肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肺组织匀浆上清中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平,实时荧光定量PCR(Real-Time-PCR)检测小鼠肺组织中NLRP3 mRNA的表达。结果截断疗法组和常规疗法组BALF中白细胞总数、IL-1β和IL-18,及NLRP3 mRNA与模型组比较均有不同程度下降,但截断疗法组在第2天BALF中白细胞总数、IL-1β和IL-18水平与模型组比较有显著降低(P<0.01),而常规疗法组尚未显示出明显的作用;第8天截断疗法组白细胞总数明显低于常规疗法组,有显著性差异(P<0.01)。感染后第4天,模型组小鼠肺组织中高表达NLRP3 mRNA,截断疗法组NLRP3 mRNA表达明显减少,常规疗法组与模型组比差异不显著。结论截断疗法在感染早期即可抑制固有免疫应答所诱发的炎症反应,有效阻止了随后的炎症级联反应的发生,截断疾病的传变。其机制可能与抑制NLRP3炎性体的形成、干扰IL-1β和IL-18的成熟和分泌有关。
- 陈丹军董莹莹任睿芳游雷鸣吴珺郝钰
- 关键词：截断疗法病毒性肺炎流感病毒小鼠
- 鸡源细胞基因沉默及快速筛选的实用型双标记RNAi载体被引量：1
- 2011年
- 利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RNA启动子,构建成同时具有EGFP和Neomycin抗性双标记的RNAi载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shRNA编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向EGFP和sIgMλ基因的shRNA编码序列后分别瞬时转染DF-1和DT40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用EGFP和Neomycin双标记快速筛选sIgMλ轻链基因稳定沉默的DT40细胞克隆的结果也证实,H1启动子转录shRNA的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷。
- 李培培游雷鸣罗俊鄂魏蒋志政郅玉宝张改平王爱萍
- 关键词：EGFPRNAI载体
