林艳丽
- 作品数：39 被引量：106H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 人Nanog基因的克隆及其在CHO-K1细胞中的表达
- 克隆人Nanog的基因,构建pcDNA3.1(+)-hNanog表达载体,转染CHO-K1细胞后观察其在CHO-K1细胞中的表达。构建表达载体pcDNA3.1(+)-hNanog,转染CHO-K1细胞,采用PCR、RT-...
- 薛世伟林艳丽熊福银吴晓洁周艳荣郭虹敏陈红星陈树林
- 关键词：转染
- 文献传递
- 连续3步基因抓捕构建牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座
- 2011年
- 目的:构建一个利用牛αS1酪蛋白基因座完整的上下游调控序列指导人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因组序列在乳腺特异性高效表达的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。方法:采用连续3步基因抓捕的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先无痕连接在一起的6个同源臂,构成能连续进行3次基因抓捕的抓捕载体;然后,在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术,第一步从含牛αS1酪蛋白基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆9 kb的牛αS1酪蛋白基因3'端侧翼序列到抓捕载体上,第二步从人tPA BAC上亚克隆17 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TGA)的人tPA基因组序列,第三步从牛αS1酪蛋白BAC上亚克隆20 kb的牛αS1酪蛋白基因5'端完整侧翼序列,并使这3个基因片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起,形成一个长约46kb的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。结果:经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,构建的杂合基因座中,原牛αS1酪蛋白基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被人tPA基因组序列精确置换。结论:连续三步基因抓捕构建杂合基因座乳腺表达载体的技术,为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了探索性研究。
- 吕月蒙吴晓洁周艳荣熊福银林艳丽陈红星
- 关键词：细菌人工染色体组织型纤溶酶原激活剂
- 长链非编码RNA HOTTIP对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响被引量：7
- 2015年
- 目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HOXA末端转录本反义RNA(HOXA transcript at the distal tip,HOTTIP)对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法将HOTTIP小干涉RNA(siRNA)及negative siRNA转染He La和C-33A宫颈癌细胞系,通过实时荧光定量PCR(q PCR)技术确认HOTTIP在细胞中表达水平的敲低,采用CCK8及克隆形成实验检测HOTTIP降低表达后对He La和C-33A细胞增殖的影响,细胞划痕实验检测HOTTIP降低表达后对He La和C-33A细胞增殖及迁移能力的影响,Matrigel细胞侵袭实验检测HOTTIP降低表达后对He La及C-33A侵袭能力的影响。结果向宫颈癌细胞系He La和C-33A中转染HOTTIP siRNA 48 h后,经q PCR检测He La及C-33A细胞中HOTTIP均出现明显下调;CCK8及克隆形成实验结果显示,HOTTIP降低表达能显著抑制He La及C-33A细胞的增殖(P<0.01);细胞划痕实验结果显示,HOTTIP降低表达能减弱He La和C-33A细胞增殖及迁移能力;Matrigel细胞侵袭实验结果显示,HOTTIP降低表达能减弱He La及C-33A侵袭能力。结论HOTTIP siRNA转染He La及C-33A宫颈癌细胞系能有效降低HOTTIP的表达,同时HOTTIP降低表达后能抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
- 刘芳李立安张欢张唯一吴晓洁郗永义周艳荣陈红星林艳丽
- 关键词：宫颈肿瘤细胞增殖细胞运动肿瘤浸润
- 人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用被引量：1
- 2008年
- 目的:研究人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用,并初步确定作用区域。方法:应用免疫共沉淀、GSTpull-down实验验证人Nanog与NAC1的相互作用。结果:人Nanog与NAC1能够相互作用,且NAC1的BTB/POZ结构域对于二者相互作用是必需的。结论:人Nanog和NAC1在体内、外均能形成复合物,二者的相互作用对于人胚胎干细胞的自我更新及肿瘤的发生可能具有重要的作用。
- 韩正滨林艳丽熊福银田利源周艳荣邓继先陈红星
- 关键词：NANOGGST免疫共沉淀
- 连续3步缺口修复构建小鼠乳清酸蛋白-人溶菌酶杂合基因座
- 2012年
- 目的:构建一个利用小鼠乳清酸蛋白(mWAP)基因座完整的上下游调控序列指导人溶菌酶(hLYZ)基因组序列在乳腺内特异性高效表达的mWAP-hLYZ杂合基因座,实现人溶菌酶的高效表达。方法:采用连续3步缺口修复的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先合成的6个同源臂序列,构成能够连续进行3次缺口修复的基因抓捕载体。然后在大肠杆菌内利用λ噬菌体Red同源重组系统介导的同源重组方法:第一步,从含mWAP基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆8 kb的mWAP基因3'端完整侧翼序列到抓捕载体上;第二步,从含hLYZ基因的BAC上亚克隆5 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAA)的hLYZ基因组序列;第三步,从mWAP BAC上亚克隆9kb的mWAP基因5'端完整侧翼序列,并使上述3个片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起。结果:构建了全长约22 kb的mWAP-hLYZ杂合基因座,经PCR扩增、限制性内切酶酶切和序列测定验证,构建的杂合基因座达到原mWAP基因座中mWAP基因组编码序列从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAA)完全被hLYZ基因组序列精确置换的目的。结论:通过连续3步缺口修复构建杂合mWAP-hLYZ基因座乳腺表达载体,为乳腺生物反应器高效表达人溶菌酶提供了可行的思路和方法。
- 邵振鲁吴晓洁林艳丽熊福银周艳荣郑芸芸李金钢陈红星
- 关键词：细菌人工染色体乳清酸蛋白人溶菌酶
- 连续3步缺口修复构建人β肌动蛋白-人凝血因子Ⅶ杂合基因座
- 2012年
- 目的:为了获得稳定高效表达凝血因子Ⅶ的哺乳动物细胞株,构建一个利用人β肌动蛋白(hACTB)基因座完整的上下游调控序列指导人凝血因子Ⅶ(hFⅦ)基因组序列在人胚胎肾细胞特异性高效表达的hACTB-hFⅦ杂合基因座。方法:采用3步连续缺口修复的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先合成的6个同源臂,构成能进行3次连续基因抓捕的载体。然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术:第一步,从含hACTB基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆10 kb的hACTB基因3′端完整侧翼序列;第二步,从hFⅦBAC上亚克隆13 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAG)的hFⅦ基因组序列;第三步,从hACTB BAC上亚克隆20kb的hACTB基因5′端完整侧翼序列,并使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上,形成全长约50 kb的hACTB-hFⅦ杂合基因座。结果:经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,构建的杂合基因座达到了原来hACTB基因座中hACTB基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被hFⅦ从起始密码子到终止密码子的基因组序列基因组序列精确置换的目的。结论:连续3步缺口修复构建杂合基因座细胞表达载体的技术,将为细胞高效表达大载体的制备提供一种全新的思路和方法。
- 张伟张伟林艳丽周艳荣左珊珊吴晓洁熊福银刘芳尤平
- 关键词：细菌人工染色体
- 长链非编码RNA Dleu2对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响被引量：5
- 2016年
- 目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)Dleu2对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:利用高通量Lnc RNA芯片技术检测10例宫颈癌组织及对应的癌旁组织,筛选得到一批表达水平具有显著差异的Lnc RNA,进一步针对可能具有生物学功能的Lnc RNA-Dleu2,利用q-PCR验证其在癌组织样本中的相对低表达。再通过在细胞内过表达Lnc RNA-Dleu2研究其对宫颈癌Hela和Caski细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。结果:q-PCR结果验证了Lnc RNA芯片筛选的结果,即相较于癌旁组织和正常宫颈上皮细胞系,Lnc RNA-Dleu2在宫颈癌组织和细胞中均低表达。CCK8和克隆形成实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞增殖能力(P<0.01);细胞划痕实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞增殖和迁移能力;Matrigel细胞侵袭实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论:Lnc RNA-Dleu2在宫颈癌中相对低表达,提高Dleu2表达水平能够抑制宫颈癌细胞系Hela和Caski的增殖、迁移和侵袭能力。
- 张欢李立安刘芳张唯一魏云芝吴晓洁郗永义周艳荣陈红星林艳丽
- 关键词：宫颈癌长链非编码RNA
- Nanog在肿瘤发生与维持中的功能研究
- 近年来,随着干细胞生物学的发展以及对肿瘤研究的深入,越来越多的证据表明干细胞与肿瘤细胞在生物学特性、信号通路等方面具有惊人的相似性,提示二者可能存在密切的关系.
转录因子Nanog在干细胞的自我更新和多能性维持...
- 林艳丽熊福银吴晓洁周艳荣吕月蒙陈红星
- 关键词：干细胞肿瘤发生
- 结核分枝杆菌利福平耐药性的研究进展被引量：12
- 2004年
- 本文旨在阐明结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的规律,以及rpoB基因突变与利福平最低抑菌浓度(MIC)的关系。结核分枝杆菌的rpoB基因突变是引起利福平耐药性的主要原因,耐利福平分离株的rpoB基因突变主要集中在507～533位密码子的81bp的区域内,约80%的菌株发生531位或526位密码子突变。不同类型rpoB基因突变的结核分枝杆菌对利福平的耐受性也不同,通常发生531位密码子突变的菌株的MIC≥64μg/mL。
- 曹立雪林艳丽吴雪琼
- 关键词：结核分枝杆菌利福平最低抑菌浓度RPOB基因耐药性
- 二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的生物合成途径研究进展被引量：7
- 2012年
- 以二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)为代表的长链多不饱和脂肪酸,对人体心血管系统、神经系统、抗炎免疫系统等有着理想的功效,因而倍受研究者关注。我们从结构、生物来源和合成、生理功能及生物工程途径的研究现状等方面阐述了EPA和DHA的相关信息,并对其生成途径中涉及的酶进行了简要概述。
- 孙晓艳林艳丽熊福银刘蓥灿李力陈红星
- 关键词：长链多不饱和脂肪酸二十碳五烯酸二十二碳六烯酸
