李梅凤
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 供职机构：大连医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 质粒介导RNAi靶向hTERT抑制K562细胞端粒酶活性的研究被引量：5
- 2008年
- 本研究探讨质粒载体介导的RNAi靶向hTERT对白血病细胞株K562 hTERT基因封闭、端粒酶活性抑制的作用。针对hTERT mRNA化学合成3条siRNA链转染K562细胞,筛选2条高效特异的siRNA链,构建靶向hTERT mRNA的质粒载体pSUPER-U6-Kanr-hTERT-1、pSUPER-U6-Kanr-hTERT-2,在脂质体介导下转染K562细胞;48、72小时后分析靶基因hTERT mRNA的表达量,检测细胞端粒酶活性,同时检测细胞凋亡率。结果表明:3条siRNA链中,48小时目的基因表达抑制,但抑制率有差异,72小时后抑制作用渐消失;转染质粒pSUPER-U6-Kanr-hTERT-1(P-1组)、pSUPER-U6-Kanr-hTERT-2(P-2组)的K562细胞hTERT mRNA表达均下降,P-1组48小时时为0.39±0.13,72小时时为0.57±0.32,P-2组48小时时为0.55±0.20,72小时时为0.88±0.23;端粒酶活性P-1组48小时时为0.42±0.07,72小时时为0.31±0.08;P-2组48小时时为0.49±0.27,72小时时为0.39±0.03;两组均较阴性对照明显下降,且以P-1组作用明显。48小时细胞凋亡率P-1组为18.39±3.08%,P-2组为15.5±3.59%,与阴性对照组7.64±3.73%相比有显著性差异,72小时细胞凋亡率P-1组为13.2±1.18%、P-2组为12.86±3.09%,与阴性对照组8.07±0.19%相比无统计学差异。结论:靶向hTERT的RNAi可抑制目的基因hTERT mRNA表达,进而抑制端粒酶活性。此抑制作用与靶位点选择密切相关,实验中si-hTERT-1优于si-hTERT-2;si-hTERT-3几乎无作用。由质粒载体介导RNAi作用时间明显长于化学合成siRNA,前者72小时甚至更长,后者仅48小时。端粒酶活性被抑制后,48小时的细胞凋亡较对照组有所增加,72小时时与对照组无差别,推测端粒酶活性下调后部分细胞可能被诱导分化。
- 李梅凤方美云王一
- 关键词：质粒载体HTERTK562细胞端粒酶
- 反义寡核苷酸及RNA干扰靶向人类端粒酶反转录酶的效果比较被引量：1
- 2010年
- 目的观察反义寡核苷酸（ASODN）、RNAf扰（RNAi）两种方法对端粒酶的抑制效应。方法设计合成寡核苷酸及siRNA链，两者均在脂质体介导下转染K562细胞，RNA干扰采用直接转染后筛选高效链，质粒载体构建，再转染后分析效果。结果合成3条siRNA链，直接转染后，检测hTERTmRNA表达，发现第一、第二条链有效，第三条链无效，人端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA表达抑制仅维持48h，72h即恢复。筛选两条链构建质粒载体，转染后P．1组作用48h后hTERTmRNA为0．39±0．13，72h为0．57±0．32，P-2组48h为0．554-0．20，72h为0．884-0．23，端粒酶相对活性P-1组48h为0．424-0．07，72h为0．314-0．08，P-2组48h为0．49±0．27，72h为0．394-0．03。siRNA的最佳作用浓度为：100μmol／L。反义寡核苷酸以0．6μmol／L浓度组抑制作用最佳，24h后hTERTmRNA为0．42±0．16。48h为0．71±0．18。端粒酶相对活性24h为0．52±0．002，48h为0．482±0．018。结论靶向hTERT的反义寡核苷酸和RNA干扰均可以抑制hTERTmRNA表达，从而抑制端粒酶活性，抑制效果与靶位点选择密切相关。RNA干扰效果优于反义寡核苷酸，前者不仅表现为抑制效率高，且持续时间长。质粒载体构建后的RNA干扰优于化学合成后直接转染的RNA干扰。
- 方美云李梅凤应晓阳王一王业伟
- 关键词：RNAI反义寡核苷酸
- 质粒介导RNA干扰靶向hTERT抑制K562细胞端粒酶活性的研究
- 本实验以hTERT为作用靶点，运用RNAi技术，将能表达hTERT-siRNA的质粒载体转染K562细胞，旨在探索有效降解hTERTmRNA、抑制端粒酶活性的siRNA序列，观察质粒载体诱导RNAi维持目的基因沉默的持续...
- 李梅凤
- 关键词：端粒酶逆转录酶
- 文献传递
- 质粒介导RNAi靶向hTERT抑制K562细胞端粒酶活性的研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究质粒载体介导的 RNAi 靶向 hTERT 对白血病细胞株 K562 hTERT 基因封闭、端粒酶活性抑制的作用。方法针对 hTERTmRNA 化学合成3条 siRNA 链转染K562细胞,分别在24 h、48 h、72 h 检测对靶基因
- 李梅凤方美云王一
- 关键词：端粒酶活性表达载体介导靶向流式细胞仪检测白血病细胞株
