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李有文: 作品数：73 被引量：120H指数：7; 供职机构：塔里木大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金塔里木大学校长基金新疆生产建设兵团博士基金更多>>; 相关领域：农业科学文化科学生物学医药卫生更多>>

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一种多功能养猪设备: 本实用新型涉及一种多功能养猪设备，所述多功能养猪设备包括：饮用水供给装置、多层养猪舍和沼气发生装置，其中，所述多层养猪舍分别与所述饮用水供给装置、所述沼气发生装置连接；其中，所述多层养猪舍具有一个猪舍本体，该猪舍本体的内...; 武军元常卫华王智超李有文; 文献传递

Observation of the Immune Effect of Fusion Protein VP4-STI: 2007年; The aim of the study was to investigate the immune effect of fusion protein VP4-STI. 40 mouse were randomly divided into 4 groups of test bacterin group （30 μg VP4-STI ＋0.6 μg LTB）, aluminiumhydroxide vaccine group （30 μg VP4-STI ＋Al（OH）3 gel ） , pure protein VP4- STI vaccine group （30μg VP4-STI ） and PBS control group were immunized by rhinal dripping. And then, the antibody levels of the mouse were determined. The protection effects of mouse in all immune groups were observed after the toxicity test with strong virulent strain C83902 of E. coli. Anti-VP4-STI antibodies were produced in other groups with the highest at the 6th week, except PBS control group. The antibody level in aluminiumhydroxide bactetin group was higher than that in test vaccine group. The antibody level in pure protein VP4-STI bacterin group was lower, being extremely significantly different from that in test vaccine group （ P 〈0. 001 ）. Mouse in test vaccine group and aluminium hydroxide bacterin group had better immuno-protection effect on strong virulent strain C83902 of E. coli, obviously different from that in PBS control group. The research provided basis for further improving the immunogeneticity of STI.; 武军元陈创夫王智超李有文; 关键词：VP4 STI

山羊痘病毒069蛋白的表达与结构分析被引量：2: 2020年; 为了分析山羊痘病毒THx株069基因的分子特征及其编码蛋白的生物学功能,本试验应用PCR技术对069基因进行扩增,并构建原核表达载体,经测序鉴定后用IPTG诱导表达其蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。用DNAStar及Mega软件对GenBank登录的24个该基因参考序列进行同源性比对并作遗传进化树分析;同时采用生物信息学分析方法对069蛋白信号肽、跨膜结构、糖基化位点、磷酸化位点、抗原决定簇、亲水性、二级及三级空间结构进行预测。结果表明:GTPV-069号基因全长为573 bp,与参考株GTPV-pellor相似度高达97.19%,经同源性比对与遗传进化树分析发现,山羊痘病毒THx株069基因序列与绵羊痘亲缘关系较近,在同一分支上,与疙瘩皮肤病和其他山羊痘亲缘关系较远。SDS-PAGE鉴定表明069蛋白大量表达于上清中,条带清晰。Western blot结果证明069蛋白与His标签确实进行了融合表达;生物信息学分析发现GTPV-069蛋白无信号肽、含有跨膜结构,跨膜区在29~51 aa之间,为典型的膜蛋白。069蛋白含有8个抗原决定簇、1个糖基化位点和14个磷酸化位点。二级结构分析显示,069蛋白中α螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角分别占43.46%,25.65%,23.04%和7.85%,三级结构预测发现069蛋白以α螺旋为主。本试验为后期探究羊痘病毒其他部分生物学功能以及新型羊痘疫苗的研制提供了依据。; 何川川童剑军米丽开姆·托合提尼亚孜张雪萍刘红丽李有文; 关键词：山羊痘病毒蛋白表达生物信息学分析

羊痘病毒063载体构建及蛋白纯化: 2023年; 为研究羊痘病毒宿主范围因子063基因的特征及其生物学功能,采用PCR方法扩增063基因,通过双酶切和基因同源重组的方法与PGEX-KG载体连接构建成融合表达GST标签的原核表达载体,经酶切和测序鉴定正确的克隆转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达063蛋白,产物经SDS-PAGE电泳检测和Western Blot鉴定,大量诱导表达063蛋白,通过谷胱苷肽琼脂糖亲合层析法,得到063纯化蛋白。; 宁可齐潇寒张惠文李有文; 关键词：羊痘病毒原核表达蛋白纯化

山羊痘病毒表达载体的构建: 羊痘是由羊痘病毒(CPV)感染山羊、绵羊或牛等偶蹄动物引起的一种烈性传染病,病畜以发热、全身起痘为典型特征。本病世界范围分布,是目前最严重的动物痘病毒病。羊痘病毒基因组较大,有表达多个外来基因的潜力,自然条件下只感染牛羊...; 李有文; 关键词：羊痘病毒病毒基因疫苗载体; 文献传递

山羊痘病毒疫苗株TK基因的克隆与序列分析被引量：1: 2010年; 用绵羊睾丸细胞培养山羊痘病毒疫苗株G14-STV44-55,提取其基因组为模板,设计TK基因的特异性引物并进行PCR扩增,获得了2405bp的DNA片段,并将PCR产物克隆至pGEM-TEasy载体。酶切鉴定、PCR鉴定和测序结果表明,成功获得了TK基因,获得的TK基因内存在唯一的ACC65I酶切位点和3′末端早期转录终止信号TTTTTN(T)T。核苷酸和氨基酸同源性分析表明,弱毒疫苗株G14-STV44-55TK基因与基因Bank中发表的13个参考毒株的同源性在96%和95%以上,说明羊痘病毒TK基因具有高度的保守性。; 李有文魏风郭志儒陈创夫; 关键词：山羊痘病毒 TK基因

羊痘病毒宿主范围基因063缺失表达载体的构建被引量：1: 2021年; 为研究羊痘病毒宿主范围基因(Hrg)063的特性及生物学功能,采用overlap PCR技术将绿色荧光蛋白(GFP)基因与063基因两侧的同源臂连接起来,把扩增的目的基因插入到PEASY-T1克隆载体中,构建以GFP基因为报告基因的063基因缺失表达载体,并测序鉴定;用脂质体Lipofectamine 2000转染表达载体到羊痘病毒感染的羊睾丸原代细胞中,挑取荧光显微镜下表达为绿色荧光的063基因缺失的羊痘重组病毒,并传代纯化。成功的构建了Hrg 063缺失的表达载体(PEASY-Δ063-GFP),测序结果表明063基因的上下游同源臂与GFP报告基因大小约900 bp,与理论相符。转染后表达载体与羊痘病毒重组,得到了063基因缺失的山羊病毒SS株、TS株和疫苗株3个毒株重组病毒,但纯化时重组病毒不能正常传代。该研究中063基因缺失表达载体的构建为其生物学特性及功能的研究奠定了基础。; 柳璇高娜王玉婷张成李有文; 关键词：羊痘病毒重组病毒

融合PCR技术在山羊痘病毒表达载体构建中的应用被引量：1: 2017年; 为了构建山羊痘病毒表达载体,试验利用融合PCR的方法连接4种组合的3个不同来源的基因片段,插入含有TK基因的载体中,快速构建羊痘病毒表达载体,并转染至BHK-21细胞中进行验证。结果表明:利用融合PCR技术成功融合了P11-7.5-ZSG、P11-7.5-GFP、I1L-7.5-ZSG、I1L-7.5-GFP 4个组合中的3个基因片段,产物长度均在1.2 kb左右,并插入PGEM-TK载体中,构建了4个表达载体,测序结果与理论上100%同源,转染BHK-21细胞可见绿色荧光。说明试验成功构建了4个山羊痘病毒的表达载体。; 宋书婷张孝忠张秀萍陈宏伟李有文; 关键词：融合PCR 山羊痘病毒同源重组

绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备: 2024年; [目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点,二级结构由无规则卷曲(35.14%)、α-螺旋(26.87%)、延伸链(26.87%)及β-转角(11.11%)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的蛋白大小约为43 ku,蛋白纯化浓度为0.615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000,能够特异性识别EF-Tu融合蛋白,具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了EF-Tu基因的TGA密码子,原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白,制备其多克隆抗体效价为1∶128 000,为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。; 王永飞邓博文刘晓艳哈尔勒哈·阿曼太郭嘉栋周正国蔡江李有文; 关键词：绵羊肺炎支原体重叠延伸PCR 多克隆抗体

山羊痘病毒南疆株P32基因的原核表达及其结构分析被引量：6: 2019年; 为了研究新疆南疆分离的山羊痘病毒P32基因的特征,试验通过PCR扩增得到P32基因及其膜外区P32_(1～282)基因和膜外亲水区P32_(20～270)基因,分别构建了表达载体(pET42b-P32、pET42b-P32_(1～282)和pET28a-P32_(20～270))并进行了原核表达,对其核苷酸序列的同源性、遗传进化关系及推测的氨基酸序列、蛋白质二级结构进行了预测分析。结果表明:山羊痘病毒南疆株P32基因发生了较大突变,相对对照在第100～105位增加了6个核苷酸,编码K、N两个氨基酸,全长达到975 bp,编码324个氨基酸,与Gansu 2009株相似。跨膜分析显示P32蛋白膜外区为1～282位氨基酸,跨膜区为283～305位氨基酸,膜内区为306～324位氨基酸。二级结构分析发现其分子两端呈明显的疏水结构,抗原性较弱,而中间区域有较强的亲水性和较强的抗原性。蛋白质表达发现其全长在大肠杆菌中几乎没有表达,其膜外区可以表达,但表达量较低,难以纯化。说明山羊痘病毒P32蛋白是一个典型的膜蛋白,全长较难表达纯化,南疆株P32蛋白也具有这样的特性。; 宋书婷焦海宏张孝忠李有文; 关键词：山羊痘病毒原核表达

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