李容
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：第四军医大学基础医学部神经科学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TAT-NEP1-40融合蛋白的表达、纯化及蛋白转导功能的鉴定被引量：3
- 2006年
- 为大量获得高纯度具有蛋白转导功能并可以穿过血脑屏障的融合蛋白TAT-NEP1-40,将构建好的表达载体pTAT-NEP1-40转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达后。将融合蛋白进行纯化和复性,鉴定蛋白转导功能。带有重组质粒pTAT-NEP40的大肠杆菌经IPTG诱导后,主要以包涵体形式表达,融合蛋白的分子量大小为14kD,其表达量占菌体总蛋白量的31.59%,纯化后目的蛋白纯度达95.6%,通过免疫组化染色显示融合蛋白可以穿过血脑屏障进入脑组织。上述结果表明利用pTAT-NEP1-40重组质粒,可以成功地表达TAT-NEP1-40;纯化后该蛋白具有穿过血脑屏障的功能,为NEP1-40功能的进一步研究提供了基础。
- 苟兴春金卫林李容鞠躬
- 关键词：NEP1-40蛋白转导包涵体
- 髓鞘相关蛋白Nogo-A在纯化细胞核中的表达
- 2007年
- 目的:检测Nogo-A蛋白在纯化后的大鼠脊髓和小脑细胞核中的表达。方法:通过差速离心法得到大鼠脊髓和小脑样本的各亚细胞成分,利用非离子性去污剂NP-40纯化细胞核组分,采用Western blot方法检验核纯度并检测Nogo-A在各亚细胞成分中的表达。结果:纯化的细胞核抽提物中检测到特异的Nogo-A反应条带。结论:Nogo-A在纯化的细胞核中仍有明确表达,进一步证明了Nogo-A蛋白在中枢神经元的细胞核中有定位,并提示Nogo-A很可能以全长形式入核。
- 孙芳周国庆金卫林龙梅李容鞠躬
- 关键词：NOGO-AWESTERNBLOT
- Nogo-C对PC12细胞分化和突起生长的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:利用PC12细胞研究Nogo-C和神经元细胞分化及突起生长的关系.方法:NGF诱导PC12细胞,利用RT-PCR及免疫荧光技术检测细胞内Nogo-C的表达,并在PC12细胞中过表达Nogo-C,通过细胞计数检测Nogo-C对突起生长的影响.结果:①RT-PCR检测到NGF诱导的PC12细胞中有少量Nogo-C的mRNA分子表达;②免疫荧光染色观察到NGF诱导的PC12细胞中有少量Nogo-C的表达;③细胞计数观察到转染Nogo-C后的PC12细胞在NGF诱导后突起增长百分数相对于EGFP组明显增高.结论:NGF诱导的PC12细胞中有Nogo-C的表达,同时过表达Nogo-C可促进NGF诱导下的PC12细胞的分化以及影响细胞的突起生长.
- 武肖娜李容李静雯鞠躬
- 关键词：过表达PC12细胞细胞分化
- Nogo-66受体LRR功能区的真核分泌表达
- 2004年
- 目的 :构建含有人Nogo 6 6受体LRR功能区段cDNA序列的真核分泌型表达载体 ,并在COS 7细胞中表达 .方法 :采用定向克隆的策略 ,在保证阅读框正确的前提下 ,从原核表达载体pES His/LRR上切下编码LRR的DNA片段 ,亚克隆入真核分泌型表达载体pSectag2B中 ,构建LRR与c Myc表位、6His标签基因相融合的真核表达质粒pSectag2B/LRR ,在Lipo fectamine 2 0 0 0介导下瞬时转染COS 7细胞 .结果 :利用针对c Myc表位和 6His标签的抗体分别作免疫荧光和Westernblot,证实胞内表达正确融合的目的蛋白 ;同时双抗体夹心ELISA也检测到转染细胞上清中存在融合蛋白 .结论 :真核表达质粒构建成功 ,转染后目的蛋白在COS
- 赵湘辉金卫林李容鞠躬
- 关键词：LRRDNA序列
- Nogo-A在大鼠脑组织中的亚细胞定位被引量：1
- 2009年
- 目的Nogo-A在中枢神经系统的髓鞘和神经元中广泛表达,并且有多种亚分布形式。在以往研究的基础上,将通过检测Nogo-A/B(N-18)在大鼠脑组织中的亚细胞定位,进一步获得Nogo-A在细胞核中表达的有力证据。方法通过差速离心法和NP-40处理得到大鼠皮层和小脑样本的纯化细胞核亚组分,利用Westernblot来检测各亚细胞成分中Nogo-A的表达。通过免疫荧光双标染色,共聚焦显微镜观察Nogo-A在大鼠皮层和小脑组织中的亚细胞定位。结果WesternBlot在纯化细胞核中可检测到清晰的Nogo-A条带。免疫荧光染色显示胞核内有免疫阳性物质表达,并且和Hoechst复染的胞核着色有广泛重合。结论Nogo-A在大鼠皮层和小脑细胞核中有明确表达,并且很有可能以全长形式入核。
- 孙芳金卫林周国庆龙梅李容鞠躬
- 关键词：细胞核BLOT
