公共文化服务平台

痘苗病毒不同启动子对乙型肝炎病毒表面抗原表达的影响: 1996年; 利用ＤＮＡ重组和细胞体内同源重组技术，分别获得了Ｐ７．５启动子和Ｐ１１启动子单独带动的乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因的重组痘苗病毒，以及同一个重组痘苗病毒中含有Ｐ７．５和Ｐ１１启动子分别带动一个ＨＢｓＡｇ基因（正反两个插入方向）的四种重组痘苗病毒，比较了它们对ＨＢｓＡｇ表达的影响。含Ｐ７．５启动子的比含Ｐ１１启动子的重组痘苗病毒表达的ＨＢｓＡｇ水平更高；在同一个重组痘苗病毒中Ｐ７．５和Ｐ１１两个启动子分别带动ＨＢｓＡｇ基因时，两个启动子同向转录表达的ＨＢｓＡｇ水平较低，而两个启动子反向转录时表达的ＨＢｓＡｇ水平较高，但均没有单一Ｐ７．; 韩素文于强程度胜方继明; 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原重组痘苗病毒操纵子

人尿激酶原cDNA在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中高效表达研究被引量：3: 1993年; 通过构建高效表达载体,改进转染方法,与二氢叶酸还原酶(dhfr)基因共扩增等手段在CHO细胞内高效表达了人尿激酶原(Pro-UK)cDNA。首先将pro-UK cDNA插入到SRα启动子的下游,构建成表达质粒pMG10102,在COS-7细胞内进行暂时性表达,结果表明此启动子的表达水平比SV40早期启动子高约5倍。然后将质粒pMG10102和pSV2-dhfr线性化后用磷酸钙共沉淀法转染CHO-dhfr^-细胞,经一系列筛选后获得20个能表达pro-UK的细胞克隆,纤维蛋白溶解平板法(FAPA)测定表达水平为12.5—100IU/10~6 cells/d.再经MTX加压共扩增,得到9株高表达细胞系,其中最高的表达水平达到400—500IU/10~6 cells/d。经2—3个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的。Western Blot分析证明细胞分泌的重组pro-UK具有与天然pro-UK相同的分子量,而且培养液中不加蛋白酶抑制剂时,分泌的重组UK大部分为单链(60%以上)。; 程度胜俞炜源韩素文李秀珍李风知胡宝成方继明黄翠芬; 关键词：尿激酶原 CDNA 基因工程

一种高比放 DNA 探针的制备方法及其应用被引量：1: 1990年; 随机引物法标记 DNA 探针是一种高比放、高灵敏度的 DNA 探针标记法。DNA 标记比放可达9.0×10~8cpm/μg DNA,比缺口平移法标记的比放高约9倍。因此法标记的 DNA 探针在分子杂交试验中均获得良好的结果。; 关雪妮李秀珍唐红娣方继明; 关键词：DNA探针

人尿激酶基因克隆的分离: 1989年; 我们利用噬菌斑原位杂交的方法,从人的基因文库中钓出人尿激酶基因克隆,这对分析尿激酶的基因结构、研究其表达调控都是很有意义的。现将初步结果简报如下: 本研究所用基因文库（吴旻教授惠赠）系将人胎儿食管粘膜总DNA的随机片段,经Burn H I位点插入取代型噬菌体载体EMBL3,经包装、转染Ecoli K802株而成。; 王嘉玺郅玉宝马贤凯方继明; 关键词：尿激酶基因克隆

重组人糖基化尿激酶原的制备方法: 本发明是利用生物工程的方法，通过基因工程技术构建了一种有双重放大功能的表达载体，并获得一株高效表达的CHO工程细胞。经微载体和低血清培基高密度灌流培养和纯化，制备一种治疗冠状动脉梗塞，脑血栓，中央视网膜动静脉血栓和其他血...; 方继明肖成祖余炜源张正光李风知黄子才陈昭烈叶建新; 文献传递

组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)全长cDNA序列的克隆及表达被引量：1: 1994年; 在先前获得t—PA部分编码序列的基础上,用化学合成法合成了缺少的5′端部分序列,并经多次重组获得了含有t—PA全长cDNA的重组表达质粒pMG-601。经序列分析表明该cDNA序列是正确的,将其导入暂时表达系统COS-7细胞中,能产生有特异性的t—PA产物。将其导入CHO细胞中,经MTX加压扩增,获得产t-PA的细胞株,其表达水平约为400～500IU/(10~6cells·24hr)。; 黄培堂徐秀英郭建辉程军李丰生方继明石成华黄翠芬; 关键词：基因克隆

人尿激酶原cDNA片段克隆及鉴定: 1990年; 尿激酶(UK)是一种在人肾合成并由人尿释放的一种纤溶酶原激活剂,可用于治疗血拴病。现已发现有四种不同分子形式的尿激酶。有关尿激酶原cDNA的克隆及表达已有文献报道。本文报道经反转录途径获得一个含人尿激酶原cDNA片段的克隆,并进行了酶切及核苷酸序列分析鉴定。; 李秀珍唐红娣关雪妮李凤知胡宝成方继明; 关键词：尿激酶克隆

分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒的构建: 1991年; 本文构建了分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒,并观察了这3种基因的表达情况。首先将K88亚单位基因克隆入痘苗转移或体PGJP-5中,得到嵌合质粒P_5-K88,将K99和LT-B亚单位基因分别克隆至痘苗转移载体PJ16中,得到重组质粒PJK-9和PLT-B。再经细胞体内同源重组技术,将以上3种基因分别插入到痘苗病毒天坛株的TK基因中,经5-BUdR的选择压力在人TK^--143细胞中挑选TK^-表型病毒,分别以相应的^(32)P标记的基因片段为探针进行杂交筛选重组病毒株。我们得到7株含K99亚单位基因的重组病毒V-K99(Ⅰ～Ⅷ),5株含K88亚单位基因的重组病毒V-K88(Ⅰ～Ⅴ);1株含LT-B亚单位基因的重组病毒V-LTB,ELISA检测结果表明,在以上3种重组病毒感染的人TK^--143细胞培养液和细胞裂解物中均未测出相应的基因表达产物。以上结果表明这3种基因可能不易在痘苗系统内有效表达。; 程度胜韩素文方继明; 关键词：重组痘苗病毒

重组痘苗病毒表达乙肝核心抗原基因的研究被引量：2: 1989年; pMM2066质粒以EcoR Ⅰ酶切回收ATG前只有12bp的乙肝核心抗原基因片段,将此基因片段插入痘苗转移载体pGJP-5的P7.5启动子后,组建成P5.C2066质粒,通过细胞内同源重组技术,于BUdR存在条件下用人TK-143细胞筛选出三株能表达HBcAg的重组痘苗病毒株。感染细胞上清液1:64稀释时仍能用ELISA法测到HBcAg活性,同时也能测到滴度相近的HBeAg活性。免疫电镜可见平均为26.6nm的HBcAg颗粒。进行了不同量的重组痘苗病毒感染不同细胞,和不同培养温度对HBcAg表达影响的观察。; 韩素文祝庆余赵立权方继明; 关键词：痘苗病毒乙型肝炎核心抗原

含不同长度前C序列的乙型肝炎病毒核心抗原基因在重组痘苗病毒中的表达被引量：1: 1991年; <正> 核酸序列分析表明,乙型肝炎(乙肝)病毒核心抗原基因(C基因)编码区内存在两个ATG。目前认为第二个ATG为乙肝病毒C抗原的起始密码子,两个ATG之间的序列称为前C序列,共87bp。Uy、Rutter、Roossinck及景新等的研究表明,含前C序列时,C基因在大肠杆菌中的表达是形成具有HBeAg活性的P25~e膜蛋白,在哺乳动物细胞中的表达则是形成分泌性的HBeAg;不含前C序列时。; 程度胜韩素文项秉一方继明; 关键词：乙肝病毒痘苗

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

方继明