张志强
- 作品数：10 被引量：72H指数：5
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较被引量：2
- 2014年
- 本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中,转染48 h后通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细胞的效率.结果显示,脂质体转染效率最高仅为8.64%,不能满足对精原干细胞进一步实验的要求;电穿孔法效率最高达到25.27%,但转化后细胞大量死亡;腺病毒转染细胞的效率达到了32.4%;慢病毒转染效率最高,达到74.25%.因此,慢病毒转染法是体外转染小鼠精原干细胞的有效方法.
- 辛颖张志强安宁张涛张建峰张智英
- 关键词：转染效率
- PiggyBac转基因载体的构建及检测
- 本研究应用重叠PCR技术，以小鼠胚胎干细胞CESC)为研究材料，制备转基因小鼠，研究在转基因过程中多基因表达及标记基因删除的可行性。
- 张婷婷辛颖张志强杨涵江张智英
- 关键词：基因载体胚胎干细胞转基因技术
- 文献传递
- 干旱胁迫下根瘤菌共生紫花苜蓿抗旱生理变化研究被引量：31
- 2013年
- 为研究根瘤菌共生对干旱胁迫下紫花苜蓿(Medicago sativa L.)抗旱生理指标变化的影响,对空气干旱条件下接种根瘤菌和不接种根瘤菌的紫花苜蓿的叶片相对含水量及根、茎、叶中丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)、可溶性糖、还原性谷胱甘肽的(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的变化进行测定。结果表明:干旱胁迫下,根瘤菌共生紫花苜蓿叶片相对含水量在干旱前期显著高于不接种根瘤菌紫花苜蓿;不接种根瘤菌紫花苜蓿根、茎、叶中MDA含量明显高于根瘤菌共生紫花苜蓿,各胁迫时间点均差异显著(P<0.05)。根瘤菌共生紫花苜蓿根、茎、叶中可溶性糖含量、Pro含量、GSH含量及SOD和POD活性在干旱后期明显高于不接种根瘤菌紫花苜蓿(P<0.05)。根瘤菌共生紫花苜蓿具有更强的渗透调节能力和活性氧防御能力。
- 张攀杨培志王卫栋张志强韩博王亚芳曹玉曼呼天明
- 关键词：紫花苜蓿根瘤菌干旱胁迫生理指标
- TALE核酸酶介导的基因组定点修饰技术被引量：8
- 2012年
- TALE核酸酶(TALE nucleases,TALENs)是继锌指核酸酶(zinc-finger nucleases,ZFNs)技术以来的另一种能够对基因组进行高效定点修饰的新技术.TALENs技术是基于植物病原体黄单胞菌(Xanthomonas)分泌的一种转录激活子样效应因子(transcription activator–like effectors,TALEs)而设计和构建的.TALEs蛋白是由N端分泌信号、中央DNA结合域、1个核定位信号和C端激活域构成;TALE核酸酶是将TALE蛋白中的DNA结合域与FokI核酸内切酶的切割域融合,设计和构建的能在特定位点产生双链断裂的TALENs.研究结果显示,人工构建的TALENs能够对动植物细胞的基因组进行高度特异和高效的修饰.TALENs的活性在酵母、植物和哺乳动物包括人的细胞中已经相继得到验证.本文介绍了TALENs的结构特点、作用原理、构建方法和双链断裂的修复机制及其在动植物细胞基因组定点修饰中的应用,剖析了该技术可能存在的问题,展望了TALENs应用前景.
- 王昕张志强张智英
- 关键词：基因组
- 干旱胁迫下根瘤菌共生紫花苜蓿抗旱生理变化研究
- 究根瘤菌共生对干旱胁迫下紫花苜蓿(Medicago sativa L)抗旱生理指标变化的影响,对空气干旱条件下接种根瘤菌和不接种根瘤菌的紫花苜蓿的叶片相对含水量及根、茎、叶中丙二醛(MDA)含量、脯氨酸(Pro)含量、可...
- 张攀杨培志王卫栋张志强韩博王亚芳曹玉曼呼天明
- 关键词：紫花苜蓿干旱胁迫
- 根瘤菌共生对低温胁迫下紫花苜蓿抗寒生理变化的影响被引量：26
- 2016年
- 为研究根瘤菌共生对紫花苜蓿（Medicago sativa）在低温胁迫下抗寒生理指标变化的影响,对低温胁迫下接种和不接种根瘤菌的紫花苜蓿的地上部分及地下部分的相对电导率、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖等指标进行测定。结果显示：低温胁迫下,根瘤菌共生紫花苜蓿的相对电导率（-6℃,4-6h）显著低于不接种紫花苜蓿（P〈0.05）,且其MDA含量低于不接种紫花苜蓿;根瘤菌共生紫花苜蓿的SOD比活力、CAT活性、POD活性以及脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖含量均高于不接种根瘤菌紫花苜蓿。根瘤菌共生紫花苜蓿在低温胁迫下具有更强的膜稳定性、活性氧防御以及渗透调节能力,具有更强的抗寒能力。
- 李莎莎张志强王亚芳张攀曹玉曼杨培志呼天明
- 关键词：紫花苜蓿低温胁迫生理指标
- 共生根瘤菌对NaCl胁迫下紫花苜蓿抗氧化和渗透调节能力的影响被引量：10
- 2013年
- 以NaCl胁迫下不同根瘤菌处理的紫花苜蓿为材料,通过测定丙二醛（MDA）、超氧阴离子、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）、脯氨酸、可溶性糖等生理指标,研究共生根瘤菌对紫花苜蓿渗透调节和抗氧化能力的影响。结果表明,接种根瘤菌尤其是接种根瘤菌激活的紫花苜蓿丙二醛含量较低,在处理第15天时根、茎、叶中的含量分别为3.90,0.53,4.16mmol/g DW,均低于其他2种处理;超氧阴离子含量则在0~15d中一直为最低;超氧化物歧化酶活性较高,在处理第15天时最高,根、茎、叶中含量分别为1 592.48,1 317.86,2 068.88U/g DW·h;还原性谷胱甘肽含量稳定;脯氨酸和可溶性糖含量波动较大,总体呈先增长后下降的趋势。说明接种根瘤菌激活的紫花苜蓿具有较强的抗氧化和渗透调节能力。
- 王卫栋杨培志张攀韩博张志强曹玉曼呼天明
- 关键词：紫花苜蓿NACL胁迫
- 利用结构优化的TALE-TF高效诱导MEF细胞内源基因Oct4的表达（英文）
- 2017年
- 转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控。通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达。但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效率还不确定。本文设计了不同长度N端的TALENs哺乳动物及酵母表达载体,对应哺乳动物绿色荧光报告载体及酵母报告载体。分别在哺乳动物细胞和酵母细胞上对不同长度N端TALENs的活性进行了检测。检测结果发现,含120个氨基酸N端的TALEN在酵母AH109细胞中的活性最高,N端长度为153个氨基酸的TALENs在293T细胞中表现最高的活性,但N端长度为153、140和160个氨基酸的TALENs的活性差异不显著(P>0.05)。随后,将结构优化了的TALE-TF用于小鼠胎儿成纤维细胞中激活Oct4基因。相对阴性对照组,TALE-TF将Oct4基因表达量上调了418倍。本研究结果表明,在哺乳动物细胞和酵母细胞中,具有最高活性TALENs的N端长度是不同的。本研究用结构优化的TALE-TF诱导内源基因高水平的表达,为从体细胞中获得iP S细胞提供了研究策略。
- 吴芸张志强李铎徐坤韩芙蓉任充华闫强王昕张智英
- 大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)逆转录病毒周期蛋白(OrfA)相互作用蛋白的酵母双杂交筛选被引量：5
- 2012年
- 大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤(WDS)在秋季发生春季萎缩的季节性生长特点与大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助基因的表达有关.其中辅助基因orfA的表达产物OrfA蛋白可能是1个潜在的肿瘤相关因子,OrfA与细胞周期蛋白cyclin A和cyclin D同源,也被称为逆转录病毒周期蛋白(retroviral-cyclin).为了深入研究OrfA的作用和功能,我们构建了诱饵表达载体pGBKT7-orfA,采用酵母双杂交技术,从HeLa cDNA文库中筛选与其相互的蛋白因子.通过2轮高强度压力的筛选、β-半乳糖苷酶活性验证、回转验证以及测序分析,最终获得了1个与OrfA相互作用的转录因子E2F5.OrfA C端78个氨基酸的多肽或者缺失C端78个氨基酸的OrfA突变体均不能在酵母双杂交系统中与E2F5相互作用.这些发现为进一步研究OrfA在肿瘤萎缩中的功能奠定了基础.
- 徐坤王亮亮张婷婷周罡张志强张智英
- 关键词：酵母双杂交
- PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测
- 2012年
- 【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。
- 张婷婷辛颖张志强任充华杨涵江王令张智英
- 关键词：SV40PIGGYBAC转座子
