崔文
- 作品数：172 被引量：317H指数：9
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十二五”国家科技计划农村领域国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 猪流行性腹泻病毒RT-LAMP快速检测方法的建立及应用被引量：7
- 2021年
- 为建立一种适用于现场快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究以PEDV N基因的保守序列为靶基因设计引物,优化并建立了基于RT-LAMP的PEDV快速检测方法。结果显示,RT-LAMP方法的最佳反应条件为:反应温度为61℃,反应时间为50 min,Mg2+和dNTPs浓度分别为8.0 mmol/L和4.0 mmol/L,外引物和内引物最佳浓度比为1.4。特异性试验结果显示,该方法只能检测出PEDV,对其他病原检测均为阴性,具有良好的特异性;敏感性试验结果显示,该方法能够检测出的最低RNA浓度为6.52×10^(-5)mg/L,而常规RT-PCR能检测到最低浓度为6.52×10-3mg/L,表明RT-LAMP敏感性是RT-PCR的100倍;重复性试验结果显示,批内和批间重复性试验结果无明显差异,重复性较好。利用RT-LAMP和RT-PCR方法分别对3份已知阳性样品,5份已知阴性样品以及52份未知临床样品进行检测。阳性样品经RT-LAMP和RT-PCR方法均检测到PEDV,阴性样品均未检测到PEDV。52份临床样品中,RT-LAMP对PEDV检测阳性率为23.08%(12/52);RT-PCR检测阳性率为17.31%(9/52),二者的符合率为94.23%。以上结果表明,建立的RT-LAMP方法具有成本低、检测快、灵敏度高、特异性强等优点。且结果易于判定、便于现场检测,在病原检测方面具有良好的应用前景,为该病的流行病学调查及综合防制提供重要的实验依据。
- 狄亚心谭飞秦松跃于晓丽崔文姜艳平王丽唐丽杰周晗王晓娜乔薪瑗
- 关键词：猪流行性腹泻病毒RT-LAMPRT-PCR
- 1株E亚群禽白血病病毒的分离鉴定及遗传进化分析被引量：4
- 2022年
- E亚群禽白血病病毒(ALV-E)是指存在于鸡染色体中的内源性逆转录病毒基因组DNA或片段。具有转录活性的ALV-E既会对鸡的生产性能(体重和产蛋率)产生负面影响,又能从抗体水平干扰对外源性ALV的鉴别诊断。为对黑龙江省某鸡场内一禽白血病病毒RT-PCR阳性病料进行病毒分离鉴定及分析其基因组特征和遗传进化情况,通过分子生物学、病毒形态学及全基因组序列测定方法对病毒培养物进行鉴定和分析,结果显示,该分离株可在CEF细胞盲传至第9代,电镜下可观察到近似球形、直径约为80 nm,并具有囊膜和纤突结构的病毒粒子,将其命名为HLJE2020株。序列分析结果显示,其全基因组序列中的gag和pol基因相对保守,LTR和env基因与ALV-E同属一个进化分支,而gp85基因则与ALV-E和ALV-B均具有较高相似性,遗传进化分析显示在ALV-E和ALV-B间出现一个单独的分支,结合RDPv.4和SimPlot软件分析结果,推测该毒株gp85基因可能存在E亚群AF229株与B亚群SDAU09C1株的重组现象。本研究为了解禽白血病病毒基因组遗传演化情况提供数据资料,并为ALV的防控提供参考和依据。
- 王萌张森豪张柳李佳璇王晓娜崔文崔文周晗姜艳平乔薪瑗周晗唐丽杰
- 关键词：禽白血病病毒基因组分析
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白在杆状病毒系统表达及鉴定被引量：10
- 2012年
- 通过PCR方法扩增猪圆环病毒2型(pcv-2)中的缺失核定位序列的ORF2基因,将其克隆到Bac-N-Blue杆状病毒表达系统的pMelBacB载体中,得到阳性重组质粒pMel-ORF2。将其与Bac-N-Blue DNA体外重组,在脂质体的介导下,转染处于对数生长期的Sf9细胞,获得重组杆状病毒并在Sf9细胞上表达重组蛋白。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光法(IFA)鉴定表明,Cap蛋白在昆虫-杆状病毒系统获得了表达,为Cap蛋白作为pcv-2检测抗原进行猪圆环病毒特异性抗体的检测提供了物质基础。
- 宋月姜艳萍崔文李一经
- 关键词：重组杆状病毒SF9细胞
- 表达大肠杆菌LTAK63与LTB蛋白重组干酪乳杆菌系统的构建及其黏膜佐剂活性的评价
- 目的:采用LTAK63和LTB作为研究对象,构建共表达、融合表达的重组干酪乳杆菌,以探索新型肠道黏膜免疫佐剂为出发点,为进一步增强乳酸杆菌活疫苗载体的免疫效果提供材料.方法:设计引物,从ETEC菌株基因组中扩增LTA成熟...
- 陈朝阳葛俊伟姜艳平崔文李海滨李一经
- 关键词：亚单位单克隆抗体黏膜佐剂
- 犬利多卡因中毒病例的分析
- 2011年
- 在兽医临床中局部麻醉药发挥着重要作用。近年来,局部麻醉药在宠物诊疗中的使用范围逐渐扩大,同时由此带来的副作用、并发症、毒性反应也明显增加。笔者在临床实践中遇到多例小型宠物犬局麻药物中毒病例，现将近期发生的博美犬利多卡因中毒的病例的诊疗过程报告如下。
- 范宏刚马海鹍邢明伟宋春林冯国峰刘克祥崔文蔺东启高利
- 关键词：中毒病例利多卡因宠物犬局部麻醉药兽医临床毒性反应
- IPNV VP2蛋白McAb的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的初步建立
- 目的:本实验旨在以IPNV VP2蛋白作为免疫原,通过细胞融合技术经过克隆筛选获得高效价、分泌功能稳定的单克隆抗体,进而建立针对IPNV的双抗体夹心ELISA检测方法,同时具有McAb的特异性和ELISA的敏感性,为进一...
- 连科迅刘敏姜艳平崔文李海滨李一经
- 关键词：VP2蛋白单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 一种检测牛细小病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种检测牛细小病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用。本发明使用纯化后的兔抗BPV VP2蛋白多克隆抗体作为捕获抗体，使用由保藏号为:CGMCC No.18896的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体作为检测抗...
- 乔薪瑗李一经徐义刚唐丽杰王丽姜艳平崔文
- 文献传递
- 乳酸菌融合表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白与大肠杆菌LTB及其诱导免疫应答的研究被引量：1
- 2012年
- 为研究传染性法氏囊病毒(IBDV)保护性抗原VP2与E.coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)在戊糖乳杆菌(L.pentosus)中的共表达及其免疫原性,本研究以乳酸杆菌表面表达型和分泌表达型质粒pPG-1和pPG-2为载体,以VP2为目的基因,构建VP2基因单独表达及与LTB基因融合表达的4种重组L.pentosus,分别命名为pPG-1-VP2/L.pentosus、pPG-1-VP2-LTB/L.pentosus、pPG-2-VP2/L.pentosus及pPG-2-VP2-LTB/L.pentosus。表达的重组蛋白分子量大小分别约为47 ku、55 ku、45 ku及53ku。将构建的重组L.pentosus分别口服免疫SPF雏鸡,以IDEXX试剂盒测定体液免疫应答水平,结果显示,不同表达方式的重组L.pentosus均可以刺激机体产生特异性循环抗体和分泌抗体(sIgA),其中pPG-2-VP2-LTB/L.pentosus诱导产生的抗体滴度高于其它组。MTT法检测不同表达方式的重组乳酸菌免疫雏鸡外周血淋巴细胞增殖反应,结果显示特异性抗原对免疫雏鸡淋巴细胞的增殖指数显著高于未免疫组,表明重组菌能够刺激机体产生特异性细胞免疫应答。这些结果表明4种重组菌均能够刺激机体产生局部黏膜免疫和全身系统免疫应答;并且带有黏膜免疫佐剂LTB融合表达试验组高于VP2蛋白单独表达组。
- 唐丽杰张怡婷乔薪媛葛俊伟姜艳萍崔文李一经
- 关键词：IBDVVP2蛋白戊糖乳杆菌共表达免疫应答
- 猪腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
- 根据GenBank中猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus...
- 吴洋杜彩虹张博刘敏唐丽杰乔薪瑗姜艳平崔文李一经
- 关键词：基因序列符合率
- 文献传递
- 犬γ干扰素多克隆抗体的制备及生物活性检测
- 2012年
- 将犬γ干扰素基因和表达载体pET30a双酶切后构建了重组质粒pET30a-CaIFN-γ,并转化到E.coliRosetta感受态中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析显示,重组蛋白约23 ku并主要以包涵体形式存在。包涵体通过切胶纯化后肌注家兔,制备出CaIFN-γ的抗血清,测得血清效价为1:12 800。对复性后的包涵体通过细胞试验进行抗病毒活性检测,表明重组犬γ干扰素在终浓度为0.09 mg·mL-1时具有一定的抗病毒活性。本试验成功的原核表达、纯化了犬γ干扰素蛋白,制备CaIFN-γ的抗血清,为CaIFN-γ蛋白生物学特深入研究和生产应用奠定基础。
- 李一经吴昱唐丽杰葛俊伟乔薪瑗崔文姜艳平
- 关键词：原核表达抗病毒活性多克隆抗体
