万群
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 鼠脑驱动蛋白的表达、纯化和结晶
- 2014年
- 驱动蛋白是一类利用水解ATP为ADP和磷酸的过程中释放的能量沿微管系统运动的蛋白。为了研究ATP中储存的化学能是如何转化为驱动蛋白的机械动能,鼠脑驱动蛋白的相关N-端区域在BL21-Codon Plus(DE3)-RP感受态大肠杆菌细胞中大量地表达。通过SP-强阳离子交换色谱和分子筛色谱的两步骤纯化,蛋白最终产量高达10 mg/L细胞培养液,蛋白纯度可以达到95%以上。纯化的蛋白具有水解ATP酶的活力,并与驱动蛋白抗体有特异性的反应。驱动蛋白可以在如下条件结晶:1.7 mol/L(NH4)2SO4,500 mmol/L NaCl,20%glycerol。晶体衍射的分辨率可以达到2.0。
- 万群祝娉婷吕后宁陈欣虹
- 关键词：驱动蛋白ATP纯化晶体
- 晶胞接种法在肌动蛋白和木聚糖酶结晶中的应用被引量：2
- 2014年
- 晶胞接种法(seeding technique)包括微晶胞接种法(micro-seeding technique)和大晶胞接种法(macro-seeding technique).微晶胞接种法主要用于改善晶体的衍射质量.大晶胞接种法主要用于得到大体积晶体以提高衍射分辨率,尤其是晶体的中子衍射分辨率.本文采用连续多次微晶胞接种法极大地改进了肌动蛋白(actin)晶体的衍射质量,获得的单晶X-光衍射分辨率达到1.9.本文丰富了大晶胞接种法的内容,以此技术获得了体积达到2立方毫米的木聚糖酶(xylanase)巨大单晶,其中子衍射分辨率达到了2.0,从而为它的第一个中子衍射晶体结构的解析奠定了坚实的基础.
- 万群陈欣虹
- 关键词：肌动蛋白木聚糖酶
- Ser203在大鼠脑驱动蛋白水解ATP中重要作用的晶体学分析
- 2015年
- 大鼠脑驱动蛋白(rat brain kinesin)是一种利用水解ATP所释放的能量,在微管束上高速且连续性运动的常规驱动蛋白.它在神经突触的物质运输中起着重要作用.研究大鼠脑驱动蛋白是如何将ATP中储藏的化学能转化为机械动能,是理解其运动机能的重要课题.本课题获得了大鼠脑驱动蛋白单体与ATP结构类似物AMPPCP形成的复合物晶体结构.将这个晶体结构与大鼠脑驱动蛋白单体-另一种ATP结构类似物AMPPNP形成的复合物晶体结构以及大鼠脑驱动蛋白单体-ATP水解产物ADP形成的复合物晶体结构进行相互比较,揭示了其活性中心的开关区域I中丝氨酸203可能作为质子的供体,加速了ATP中γ-磷酸和β-磷酸的断裂,从而导致ATP的水解.
- 万群孟浩卜平曹淑芬
- 中子与X-光衍射相结合解析木聚糖酶突变体N44D晶体结构
- 2014年
- 木聚糖酶(xylanase)是降解木质纤维素中半纤维素的特定酶,在酶法生产生物能源的过程中有重要应用.木质纤维素在降解时需要用酸或碱预处理,而木聚糖酶反应的最适p H值为中性.因此,获得在酸或碱性条件下酶活力仍然很高的木聚糖酶,是生物能源生产中的重要课题.木聚糖酶活性中心的天冬酰胺突变为天冬氨酸(N44D)后,木聚糖酶的最适p H值从5.7下调到4.6,酶活提高20%.本研究首次获得了分辨率为2.20的木聚糖酶突变体N44D的晶体在291 K的中子衍射数据.同时,分别获得了分辨率为1.70和1.07的在291 K和100 K的X-光衍射晶体数据.通过解析以上数据,获得了木聚糖酶中几乎所有原子的空间位置.以上结果将有助于在原子水平研究这种突变是如何影响酶反应最适p H值,并进一步为酶蛋白的改性提供了结构生物学的依据.
- 万群孟浩祝娉婷高亚雄卜平
- 关键词：木聚糖酶
- 鼠脑驱动蛋白ATP水解机制的晶体学分析被引量：1
- 2014年
- 鼠脑驱动蛋白是一类利用ATP水解释放的能量在微管系统上高连续性运动的常规驱动蛋白。了解ATP水解的化学能如何转化为机械动能是驱动蛋白研究中的重大课题。为此,鼠脑驱动蛋白单体(rK354)的晶体通过浸泡的方式引入ATP的结构类似物AMPPNP。rK354-AMPPNP复合物和rK354-ADP复合物结构的比较,揭示了开关区域Ⅱ的Glu237起连接ATP的γ-磷酸和驱动蛋白微管结合区的枢纽作用。
- 万群祝娉婷吕后宁陈欣虹
- 关键词：驱动蛋白晶体结构
