齐昱
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区科技计划项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 牛偏爱密码子优化后的Beta蛋白多克隆抗体制备
- 2015年
- 本研究旨在优化λ噬菌体bet基因,使其能够在牛细胞中高效表达,通过密码子优化及全基因合成方法制备牛bet基因,并进行原核表达和多克隆抗体制备及抗体效价评估。从GenBank中获得λ噬菌体bet基因的序列,登录号为AP005153,用牛偏爱密码子对其进行优化并将其合成。根据优化后的基因序列设计引物,用PCR扩增优化后的bet基因,随后将其克隆到pET28原核表达载体,并转化入大肠杆菌BL21中进行诱导表达。表达的蛋白产物利用亲和层析的方法进行纯化,用His tag的抗体进行Western blot鉴定。用纯化后的蛋白免疫CD1小鼠,得到抗Beta蛋白的血清,通过ELISA测定该多克隆抗体的滴度。结果表明:通过双酶切和测序,成功挑选出正确的原核表达质粒pET-bet;SDS-PAGE,电泳结果显示融合蛋白表达成功;用纯化后的蛋白免疫试验鼠后得到多克隆抗体,经Western blot检测,该多克隆抗体能与His-Beta融合蛋白特异性结合;经ELISA方法检测该多克隆抗体的滴度为1∶41 700。成功地制备了Beta蛋白的多克隆抗体,为深入探索bet基因的生物学功能和在牛及大型哺乳动物中的应用奠定了基础。
- 齐昱邢燕平周欢敏房君钱呈王海涛
- 关键词：密码子优化原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 基于皮肤组织转录组数据研究水牛与黄牛温度适应性的差异被引量：1
- 2017年
- 为了找到与水牛和黄牛温度适应性差异相关的信号通路,本研究对3头成年水牛和3头成年黄牛的皮肤组织进行了转录组测序和生物信息学分析。结果显示,测序后水牛和黄牛皮肤组织分别得到59 369 167和69 837 009条reads,与参考基因组的唯一比对率分别为70.76%和75.55%。水牛和黄牛皮肤组织共有1 611个差异表达基因,其中801个在水牛皮肤中上调,810个在水牛皮肤中下调。GO分析结果显示,注释到细胞组分、分子功能、生物学过程的差异表达基因分别为316、263和278个。KEGG分析结果显示,差异表达基因共富集在33条信号通路上,其中神经活性配体—受体相互作用、氧化磷酸化、胆碱能突触、5-羟色胺能神经突触、GABA能突触、钙信号通路等信号通路可能与水牛和黄牛在温度适应性上的差异相关。综上所述,突触与氧化磷酸化可能与水牛和黄牛之间的温度适应性差异有关,本研究为进一步了解水牛和黄牛对温度适应性差异的分子机制和分子育种奠定基础。
- 齐昱邢燕平潘静凌宇曹宇孟凡华荆文魁
- 关键词：转录组差异表达基因皮肤水牛黄牛
- 蒙古牛BTG2启动子的克隆与初步功能分析
- 2014年
- BTG2是新型细胞抗增殖因子BTG/Tob基因家族成员之一,在猪、牛中均报道存在品种和个体表达差异,但相关分子机理有待揭示。为阐明蒙古牛不同个体BTG2差异表达的分子机理,3个独立蒙古牛个体BTG2预测启动子序列(ATG起始密码子上游1766bp)被克隆、测序。序列比对发现,克隆序列与基因组组装BTG2启动子序列分别存在99.94%,98.64%,98.58%同源性,而且同源性最高的序列重组到哺乳动物表达载体pEGFP-N1后,由此获得的表达框架导入到HeLa细胞有受神经生长因子诱导表达的特性,该结果和已有报道一致。表明蒙古牛BTG2启动子序列被成功克隆,由此奠定了后续分离、鉴定该启动子上顺式元件和反式作用因子的基础。
- 钱呈邢燕平齐昱钱宏光周欢敏
- 关键词：蒙古牛启动子
- 拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2013年
- 利用原核表达获得的拟蜘蛛牵丝蛋白制备多克隆抗体,将为我们在真核水平检测其表达情况奠定基础。以质粒pGEX-2T为骨架载体,在其多克隆位点处连接人工合成的拟蛛丝蛋白基因单体(S),构建含有GST标签的融合蛋白原核表达载体pGEX-S;利用IPTG诱导重组质粒pGEX-S在大肠杆菌感受态细胞BL21中表达,并利用GST标签亲和纯化重组蛋白,获得的S-GST蛋白与佐剂混合后,采用多点皮下免疫注射8只健康的CDⅠ小白鼠,免疫期结束后收集抗血清进行ELISA检测。序列分析后,确定原核表达载体pGEX-S编码正确;诱导表达后,Western blot检测显示在41 kD处有重组蛋白条带出现,与我们预期的结果相符;抗血清Elisa检测显示有2只小鼠A和F抗血清效价较高。采用原核表达生产的拟蜘蛛牵丝蛋白成功制备了多克隆抗体。
- 孟凡华房君王海涛邢燕平齐昱周欢敏
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 转录组揭示禁水环境下双峰驼结肠组织适应机制被引量：2
- 2018年
- 旨在了解骆驼属在缺水条件下组织环境适应机制。本研究选取6峰6～9岁的成年阿拉善双峰驼,随机分为2组,第一组为对照组(colon1_3),正常采食饲料与水;第二组为禁水组(colon3),不给骆驼饮水,其他处理(饲草量)与对照组相同,禁水24d。采用Illumina HiSeq 2000测序平台通过对禁水(试验组)与正常饮水(对照组)条件下双峰驼结肠组织进行转录组测序,并对转录组数据进行质控、比对、差异表达、GO和KEGG分析。结果显示,禁水组与对照组比较共获得差异表达基因2 122个,其中上调表达基因813个,下调表达基因1 309个。GO分析结果显示,禁水组下调表达基因最为显著富集的条目有30条,上调表达基因中未得到统计学意义的富集条目。KEGG富集分析显示,禁水组下调表达基因显著富集到剪接体、蛋白外排、内质网蛋白合成过程、RNA转运、核糖体合成、mRNA检测、RNA降解代谢途径;上调表达基因富集到的通路包含局部细胞黏连、溶酶体功能等。上述结果表明,禁水环境下,结肠组织下调表达基因多于上调表达基因,下调表达基因多参与RNA加工和蛋白质合成,这些功能有利于骆驼在缺水环境下,减少RNA的合成,降低结肠组织的代谢速率。
- 凌宇齐昱曹俊伟王申元周欢敏张焱如
- 关键词：双峰驼结肠转录组水代谢
- 基于转录组数据的蒙古牛皮肤组织抗寒相关信号通路及候选基因的筛选被引量：7
- 2017年
- 本研究旨在通过对冬夏两季蒙古牛皮肤组织进行转录组测序和生物信息学分析,找到与蒙古牛抗寒性状相关的信号通路及候选基因。用Ion ProtonTMSequencer分别对冬季和夏季成年蒙古牛的皮肤组织进行转录组测序,随后对转录组数据进行处理、与参考基因组比对、差异表达分析、GO和KEGG富集分析以及候选基因筛选,并用Real-time PCR方法对转录组数据进行可靠性检测。结果显示,冬季组和夏季组分别得到86 954 060和69 837 009条reads;冬季组与参考基因组的唯一比对率为73.21%,夏季组为75.55%;冬夏两组共有182个差异表达基因(DEGs),与夏季组相比,其中117个在冬季组中上调,65个在冬季组中下调;Real-time PCR分析显示,转录组测序结果可靠;GO分析结果显示,细胞组分、分子功能、生物学过程分别富集到21、39和224个term;KEGG分析结果显示,差异表达基因(DEGs)显著地富集在脂类代谢、凝血、酪氨酸代谢、类固醇合成和视黄醇代谢相关通路上;共筛选出8个候选基因。综上表明,脂类代谢、凝血、黑色素合成相关通路和基因,以及与毛发发生相关的基因可能在蒙古牛抗寒过程中发挥重要作用。
- 齐昱邢燕平潘静凌宇曹宇周欢敏
- 关键词：蒙古牛皮肤组织转录组信号通路
