黄粤
- 作品数：14 被引量：24H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生机械工程更多>>
- 基于"石英杯中激发型"流式细胞分选仪的染色体分选方法
- 本发明提供了一种基于“石英杯中激发型”流式细胞分选仪的染色体分选方法。进一步地，本发明提供了用于分选的染色体样品的制备方法。所述方法包括将制备的Hoechst 33258和色霉素A3染色后的染色体悬液在基于“石英杯中激发...
- 吴后男黄粤贾玉艳刘云
- 文献传递
- 1号染色体长臂扩增削弱人胚胎干细胞神经分化潜能
- 2022年
- 目的探讨1号染色体长臂(1q)的扩增对人胚胎干细胞(hESCs)神经分化的影响。方法通过对H9 hESCs克隆化培养的方法获得1q扩增的hESCs系。中期染色体计数的方法明确细胞内的染色体数目,核型分析鉴定染色体变异的情况,全基因组测序(WGS)分析基因组片段拷贝数变异的情况。使用碱性磷酸酶(AP)染色法检测细胞干性维持的情况,RT-qPCR和免疫荧光染色等方法检测胚胎干细胞(ESCs)标志物OCT4、SOX2、NANOG、REX1和SSEA4等的表达。拟胚体(EB)形成实验进行hESCs不定向分化、全反式视黄酸(RA)诱导hESCs向外胚层分化、使用STEMdiff?SMADi Neural Induction Kit诱导hESCs向神经祖细胞(NPCs)定向分化,并通过RT-qPCR、AP染色和免疫荧光染色等方法检测其分化能力。两组间比较采用独立样本t检验。结果分离获得一株1q发生2个拷贝扩增的细胞,核型分析发现额外获得的2个1q是等臂染色体,核型为[47,XX,+i(1q)],将其命名为Amp(1q)。Amp(1q)AP染色呈阳性,且表达ESCs标志物OCT4、SOX2、NANOG、REX1和SSEA4,具备干细胞自我更新的特征。EB分化过程中,与H9细胞相比,Amp(1q)向外胚层的分化能力下降,MAP2(29.67±1.53比66.67±1.15)和PAX6(8001±567.09比28308.00±1692.50)的表达降低(P均<0.05);RA诱导分化实验进一步证明,与H9细胞相比,Amp(1q)存在向外胚层分化的缺陷,MAP2(22.50±3.54比42.50±2.12)和PAX6(5403.00±569.93比38756.00±1068.44)的表达降低(P均<0.05)。当定向诱导向神经谱系分化时,Amp(1q)形成NPCs的能力降低,NPCs标志物PAX6的表达水平低于H9细胞(13.83±3.75比88.33±1.53)(P均<0.05)。结论Amp(1q)具有ESCs自我更新的能力,但1q的扩增会削弱hESCs神经分化的能力。
- 李佳一张美丽黄粤
- 关键词：人胚胎干细胞自我更新神经分化
- 异倍体小鼠胚胎干细胞系的建立及功能分析
- 目的:建立异倍体小鼠胚胎干(mES)细胞系,研究异倍体对mES细胞功能特征的影响.方法:我们用转座子介导的基因组随机插入、Cre-loxP系统等遗传学操作方法富集某条或某几条染色体三体(Trisomy)的mES细胞株系....
- 张美丽贾玉艳纪少伟黄粤
- 关键词：异倍体胚胎干细胞自我更新增殖
- 使用单倍体干细胞高效建立遗传修饰动物模型的方法
- 本发明公开了使用单倍体干细胞高效建立遗传修饰动物模型的方法。具体地，本发明公开了使用单倍体干细胞高效建立遗传修饰动物模型的方法，其包括：a)使用同源重组敲除孤雄单倍体胚胎干细胞的H19基因；b)筛选和鉴定正确敲除H19基...
- 黄粤刘光张美丽刘语方
- 文献传递
- 细菌人工染色体(BAC)与成簇基因功能表达调控机制研究
- 细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)是二十世纪九十年代发展起来的一种载体系统。它是建立在大肠杆菌的F因子(F Factor)的基础上的,F因子亦称F质粒,它可将宿主染色...
- 黄粤
- 文献传递
- 一种简便的染色质免疫沉淀法的建立被引量：3
- 2003年
- 染色质结构和基因表达调节是当前国际前沿研究的热点 .染色质免疫沉淀法是研究染色质结构的首选方法 ,它不仅可用来研究体内反式因子与DNA的相互作用 ,也可以用来研究组蛋白修饰与基因表达的关系 .综合国外相关文献 ,建立了一种简便的染色质免疫沉淀法 ,并通过对诱导前后的MEL细胞中 β 珠蛋白基因簇组蛋白H3乙酰化的研究 ,证实了其可操作性 .结果表明 :高敏位点HS2和活跃基因 βmaj的启动子区域存在较高的组蛋白乙酰化水平 ,且诱导前后变化显著 ,而不活跃基因Ey的启动子区域则几乎检测不到组蛋白的乙酰化 ,且诱导前后无明显变化 .
- 傅湘辉刘德培辛立郝德龙董文吉黄粤梁植权
- 关键词：染色质组蛋白乙酰化基因表达调节
- 细菌人工染色体(BAC)及其分析和修饰方法简介被引量：10
- 2001年
- 细菌人工染色体是一种新发展起来的DNA载体系统 ,它具有容量大、遗传特性稳定、易于操作等优点 .在基因文库构建和基因功能分析等方面有广泛的应用 .综述了近年来发展起来的对BAC进行分析和修饰的一些方法 .
- 黄粤刘德培梁植权
- 关键词：细菌人工染色体同源重组BAC
- DNA转座子在小鼠基因功能研究中的应用被引量：7
- 2011年
- 近年来,转座子介导的插入突变在哺乳动物的分子遗传学研究中得到了广泛的应用。转座子作为一种简便高效的遗传学操作工具,在构建转基因动物模型、基因治疗、细胞水平和动物整体水平的基因功能研究等方面发挥了重要的作用。文章重点介绍DNA转座子的结构、功能及其应用于小鼠分子遗传学领域的最新研究进展。
- 刘琳张美丽黄粤
- 关键词：转座子插入突变SLEEPINGBEAUTYPIGGYBAC
- BAC介导的含97kb人β类珠蛋白基因簇转基因鼠模型的建立被引量：4
- 2003年
- 目的 利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,修饰含全长人β珠蛋白基因簇及一段IL-11受体α链基因的(?)C(细菌人工染色体)克隆,建立只包括全长人β珠蛋白基因簇的转基因鼠模型。方法 分别在待删除片段上、下游用PCR合成500 bp左右的两段同源序列,共同克隆人构建载体pBV的HindⅢ和XbaⅠ位点之间,然后以SalⅠ酶切后将此1 kb的插入片段再克隆入温度敏感型穿梭载体pSV-RecA中,转化含B5-BAC DNA的感受态大肠杆菌DH10B,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸(FA)负筛选,获得发生两次同源重组后只含修饰后的BACDNA而穿梭载体已丢失的菌株。经脉冲场凝胶电泳鉴定后,纯化修饰的BAC DNA,经显微注射受精卵制备转基因鼠,分析其中的人β珠蛋白基因簇整合和表达状况。结果 利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,获得了IL-11受体α链基因被定位删除的含完整人β珠蛋白基因簇的BAC克隆(命名为βD-BAC),建立了3株独立的转基因鼠株系。结论 新的BAC介导的转基因鼠中的人β珠蛋白基因簇显示正确的表达模式和水平。
- 沈伟黄粤唐毅刘德培刘光吴敏梁植权
- 关键词：基因簇细菌人工染色体
- 用同源重组法修饰含人α类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体被引量：7
- 2001年
- 采用RecA蛋白介导的同源重组的方法 ,对本实验室筛选出的包含完整人α 类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体 (BAC)DNA进行删除修饰。首先采用PCR的方法 ,分别在预删除的HS - 40增强子区域的上游和下游克隆长度约为 5 0 0bp的两段同源序列 ,并一起克隆到构建载体 pBV的XbaI和HindIII位点上 ,SalI酶切后回收 1kb左右的片段并克隆到温度敏感的穿梭质粒 pSV -RecA中 ,转化带有人α 类珠蛋白基因簇的BACDNA的感受态大肠杆菌DH10B ,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸的负筛选 ,获得发生两次同源重组后只含BACDNA而穿梭载体已丢失的菌株 ,经Southern杂交鉴定 ,获得了HS - 40被定位删除的BAC突变体克隆。
- 冯东晓刘德培黄粤梁植权
- 关键词：细菌人工染色体同源重组Α-珠蛋白修饰
