魏洪莲
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：首都医科大学附属北京同仁医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 糖基因Glt8d2重组蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 目的构建新糖基转移酶基因Glt8d2的原核表达载体，诱导融合蛋白的表达，并对其进行纯化；制备兔抗GltSd2蛋白多克隆抗体并进行鉴定。方法应用RT—PCR技术，以HepG2细胞mRNA为模板，扩增Glt8d2目的基因片段，构建原核表达载体pET-32a（＋）-Glt8d2。转化大肠埃希菌B121，异丙基-D-半乳糖苷诱导并通过SDS—PAGE凝胶电泳分析、Western印迹分析、生物质谱分析证实Gh8d2重组蛋白表达正确。大量表达后利用Ni’亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰大白兔，获得抗Gh8d2蛋白的多克隆抗体。以纯化的Glt8d2重组蛋白为抗原，分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体，利用Western印迹和酶联免疫吸附法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测。结果扩增获得Glt8d2基因片段，成功表达了Gh8d2重组蛋白，经SDS—PAGE凝胶电泳和Western印迹分析得到证实。成功获得重组蛋白及兔抗Gh8d2多克隆抗体。ELISA检测证实多克隆抗体效价〉1：320000。免疫组织化学分析显示，该基因编码的糖基转移酶在肝实质细胞内呈胞质模式表达分布。结论利用大肠埃希菌B121能够成功表达Gh8d2重组蛋白，获得高特异性、高效价兔抗Glt8d2重组蛋白的多克隆抗体，为今后研究Glt8d2基因的生物学功能研究奠定了基础。
- 魏洪莲张锦前肖凡李学永成军魏红山展玉涛
- 关键词：糖基转移酶脂肪肝载脂蛋白
- HBV相关分泌蛋白c18orf54的克隆表达及初步功能研究被引量：2
- 2011年
- 目的体外原核表达C18ORF54的重组蛋白,对其进行纯化,制备兔抗C18ORF54蛋白多克隆抗体,并对该重组蛋白对HepG2细胞可能的生物学作用进行初步研究。方法应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术,以HepG2细胞总RNA为模板,反转录并扩增c18orf54目的基因片段,构建原核表达载体pET-32a(+)-c18orf54。转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖(isopropylβD thiogalacttpy ranoside,IPTG)诱导并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium lauryl sulfate-polyacrylamide gol electrophoresis,SDS-PAGE)分析、免疫印迹(Western blotting)、生物质谱技术分析证实c18orf54重组蛋白表达正确。用Ni+亲和柱纯化表达蛋白。C18ORF54重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗c18orf54蛋白的多克隆抗体。以纯化的C18ORF54蛋白为抗原,分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体,利用Western blotting和酶联免疫吸附(enzyine linked immunosorbent assay,ELISA)法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测。将不同浓度范围的C18ORF54重组蛋白与培养的HepG2细胞共孵育,初步了解该重组蛋白对HepG2细胞可能的生物学作用。结果 PCR法扩增获得c18orf54基因片段,成功表达了C18ORF54重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting分析得到证实。成功获得重组蛋白及抗C18ORF54多克隆抗体。ELISA检测证实多克隆抗体效价>1∶320 000。结论利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达C18ORF54蛋白,获得高特异性、高效价兔抗C18ORF54重组蛋白的多克隆抗体,为今后研究C18ORF54蛋白的生物学特性奠定了基础。
- 常路丝乔雍魏洪莲肖凡郝晓花张仁雯成军魏红山
- 关键词：乙型肝炎病毒细胞周期发病机制
