本文研究了56个花生品种中8种主要过敏蛋白及其过敏原性的差异,为低致敏性花生的育种和消费提供支持。收集了33个中国花生品种和23个日本花生品种并统一种植,收获后进行花生品种间的致敏性差异性研究。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶成像系统分析了花生主要过敏原的种类和含量,用免疫印迹和间接ELISA方法测定各花生品种的致敏蛋白及其过敏原性。结果发现,过敏原Ara h 1在56个品种中的相对含量最高,其次是Ara h 2(20 kDa)和Ara h 3(14 kDa)。中国花生品种中绥中大花生和沭阳大站秧缺失过敏蛋白Ara h 3(35 kDa),新金伏大、兴城大花生和如东碗儿青缺失过敏蛋白Ara h 3(24 kDa),日本花生品种JP-16与JP-19中过敏蛋白Ara h 3(24 kDa)缺失。用中国花生过敏患者的血清进行间接ELISA试验,发现中国花生的过敏原性较日本花生强,这可能与所用的血清来源于中国病人有关。中国花生品种中致敏性最低的是铁岭四粒红,最高的是营口四粒红。日本花生品种中JP-10的致敏性最强,JP-6的致敏性最低。决定花生的致敏性强弱的因素复杂,单纯过敏条带的缺失或含量高低和花生致敏性并不存在线性关系。
研究了电子束辐照降低花生过敏原免疫原性的效果及辐照对花生生化性质的影响。选择2、4、6、8、10、15和20kGy剂量的电子束对花生过敏原液、脱脂花生粉进行辐照处理,辐照后花生主要过敏原(Ara h 1,Ara h 2,Ara h 3)蛋白分子质量的变化通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,免疫原性的变化通过免疫印迹和间接竞争ELISA法测定;辐照后花生过敏原溶液的浓度、浊度及疏水性的变化通过紫外分光光度计和荧光光度计分别进行测定。结果表明,花生过敏原在溶液状态比固体状态对辐照更为敏感。当辐照剂量低于10kGy时处理的过敏原液的免疫原性稍有增强,剂量大于10kGy时免疫原性降低,剂量为20kGy时过敏原液的IC50值是未处理的11倍。辐照使过敏液的浓度和浊度随着剂量的加大而增加,疏水性与对照组相比增强,但当剂量大于15kGy时降低。电子束辐照改变了过敏原的生化性质,降低了其免疫原性,比较而言,辐照对液体状态下过敏原的影响更显著。
【目的】建立一种识别、检测致敏蛋白的新方法。【方法】Pen a 1为虾中主要的致敏蛋白,从其5个主要IgE结合区中选择一段具有代表性的(85—105位)含21个氨基酸的多肽序列,进行化学合成,将多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制得免疫原和包被原,免疫原免疫新西兰纯种白兔得到多克隆抗体。以刀额新对虾蛋白、卵清蛋白、花生蛋白和牛奶蛋白为样品,免疫印迹鉴定多克隆抗体对刀额新对虾中Pen a 1蛋白的特异性。【结果】经Ellman试剂测定多肽与KLH、BSA的偶联比分别为12﹕1和8﹕1。间接非竞争ELISA测定多克隆抗体的效价达1.024×106,间接竞争ELISA(icELISA)测定该多克隆抗体对多肽的IC50和IC10分别为0.4324μg.mL-1和0.0004μg.mL-1,表明多克隆抗体对多肽具有较强的灵敏性。免疫印迹试验结果表明,此多克隆抗体仅可识别刀额新对虾蛋白中的Pen a 1蛋白,对所选其它物种蛋白无响应。【结论】通过人工合成多肽制备的抗体可用于目标致敏蛋白质的检测分析,该方法快捷灵敏,且具有较高的特异性。
本研究将60Co-γ辐照技术引入到圆生菜的鲜切加工过程,研究不同剂量辐照对圆生菜减菌效果及其营养和感官品质的影响,以达到延长鲜切圆生菜贮藏期的目的。结果表明：辐照对鲜切圆生菜具有显著的减菌效果。辐照剂量≥0.68 k Gy的处理对圆生菜细菌、大肠菌群、霉菌和酵母均有显著的杀灭效果。辐照剂量≤2.32k Gy的处理,圆生菜的失重率、可溶性固形物含量、亚硝酸盐含量在5%水平上无显著影响;对圆生菜在贮藏期间Vc含量的下降起延缓作用,对其色泽、气味、质地和滋味、组织状态等感官方面总体可接受性没有显著影响。因此,0.68~2.32k Gy剂量范围内的辐照可有效控制鲜切圆生菜中的微生物而不影响其食用和感官品质,货架期可达6d。本文探索了辐照保鲜在鲜切菜生产加工过程中的可行性,为以后的研究提供了一定的科学依据。
