许会会 作品数:13 被引量:81 H指数:5 供职机构: 吉林大学 更多>> 发文基金: “十一五”国家科技支撑计划 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 轻工技术与工程 生物学 更多>>
一种快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的试剂盒 本发明公开了一种快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法,属于生物检测技术领域,适用于金黄色葡萄球菌的定性检测。本发明由免疫微球、两对引物、DNA聚合酶、LAMP反应液、显色液和阳性对照液组成。本发明检测速度快,特异性好,灵敏... 雷连成 许会会 孙长江 谢芳 杜崇涛 冯新 韩文瑜文献传递 仓鼠致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:1 2010年 为探讨长春地区某仓鼠饲养场中仓鼠急性死亡的原因及应对该突发性疾病,对死亡仓鼠进行实验室检查并分离得到1株细菌,通过对该分离株进行形态学观察、培养特性观察、生化试验、小鼠致病性试验、PCR鉴定和23SrRNA基因同源性分析,判定该分离菌为1株高致病性大肠杆菌。该菌可致仓鼠突发急性致死性大肠杆菌病,死亡率达到100%,死亡小鼠出现胃肠道极度膨胀的典型症状。药敏试验结果表明,该大肠杆菌对多种抗生素敏感,但对四环素类抗生素及复方新诺明(SXT)有很强的耐药性,可用庆大霉素进行治疗。研究结果为探讨急性大肠杆菌病的发病机制及其防治提供了理论基础。 盛相鹏 杜崇涛 许会会 顾敬敏 雷连成 韩文瑜关键词:仓鼠 大肠杆菌 药敏试验 定量检测牛奶中蛋白质ELISA方法的建立 被引量:2 2011年 本试验旨在建立特异检测牛奶蛋白质含量的ELISA方法。利用提纯酪蛋白免疫试验动物,获得针对酪蛋白的多克隆抗体;利用棋盘格试验确定抗原抗体的最佳作用浓度,并优化各步骤反应条件;根据标准样品建立牛奶中蛋白质含量的定量ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、检测范围及重复性进行评价。通过试验确定封闭液为1%BSA,37℃孵育120 min;血清抗体工作浓度为1∶12000稀释,37℃孵育90 min;酶标二抗最适浓度为1∶3000稀释,37℃孵育30 min。牛奶酪蛋白检出范围为0.063~0.500μg/mL;该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,回归率范围为97.6%~123%。成功建立了牛奶蛋白含量的定量ELISA检测方法。 李萌 许会会 高晋渝 雷连成关键词:乳蛋白 酪蛋白 ELISA 仓鼠源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量:16 2010年 从死亡仓鼠的血液及内脏器官中分离出一株细菌,经镜检、菌落形态观察、培养特性观察、生化试验、PCR鉴定及16 S rRNA基因测序和同源性分析,确定该分离菌株为缓慢葡萄球菌。动物回归试验表明,分离菌可以引起实验小鼠的慢性死亡,这表明缓慢葡萄球菌具有致病性并很可能会对公共卫生安全具有潜在威胁。药敏试验显示,该分离菌株对大多数抗生素均十分敏感,但对氟喹诺酮类药物及复方新诺明有很强的耐药性。 盛相鹏 杜崇涛 许会会 顾敬敏 雷连成 韩文瑜关键词:仓鼠 金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps抗原表位的串联表达及多克隆抗体的制备 被引量:6 2011年 为获得金黄色葡萄球菌特异性抗原蛋白并以此制备多克隆抗体,应用DNAStar软件筛选金黄色葡萄球菌FnbpA、Clf A、Ebps的抗原表位,以柔性氨基酸序列连接后进行全基因合成,将目的基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态细胞,诱导表达,采用Sepharose 4B柱亲和层析纯化表达蛋白,制备抗原后对家兔进行皮下多点注射,于第42天采集外周血,获得血清。结果表明,本试验成功构建了金黄色葡萄球菌抗原基因表达载体,并获得了高免血清,经ELISA的方法检测血清效价可达到1∶10000以上,成功制备多克隆抗体,为以后采用免疫学方法快速检测金黄色葡萄球菌奠定了基础。 高翔 许会会 雷连成关键词:金黄色葡萄球菌 抗原表位 多克隆抗体 基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及对小鼠感染的治疗 被引量:5 2013年 成功构建了能够高效表达鲎素TPⅠ基因的组成型毕赤酵母表达菌株,发酵培养后上清对分属于13个属的61株菌抑菌活性良好。应用肉汤微量稀释法测定发酵上清对金黄色葡萄球菌的抗菌活性,用扫描电镜观察其对金黄色葡萄球菌的抑制作用,并探讨发酵上清对小鼠皮肤感染模型的治疗作用。结果显示,基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(MIC)为(3.46±0.76)mg/L,亚抑菌浓度为(0.865±0.22)mg/L。基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌小鼠感染模型的治疗效果与抗生素差异不显著(P>0.05),且具有刺激小鼠血管内皮生长因子表达水平增加,加速血管生成和血管发生,促进皮肤创伤愈合的功能;表明基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌感染小鼠具有良好的治疗效果。 韩东 冯新 韩文瑜 韩俊友 黄盼盼 何伯萍 许会会 雷连成 孙长江关键词:鲎素 小鼠 抗菌肽 金黄色葡萄球菌 牛奶中志贺氏菌PCR检测方法的建立 被引量:8 2010年 根据Genbank志贺氏菌侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因序列,自行设计引物,扩增特异的326bp核酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了志贺氏菌特异、敏感、快速的PCR检测方法,并对牛奶中的志贺氏菌进行了检测。特异性试验结果表明,志贺氏菌参考菌株均能扩增出特异的核酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用试剂盒提取基因组,该方法的敏感性可达到1.75×102cfu/mL。人工污染牛奶的模拟检测结果表明,PCR方法的检测限为1.75×103cfu/mL。 许会会 谢芳 雷连成关键词:牛奶 志贺氏菌 PCR 牛、羊布鲁菌多重PCR方法的建立与应用 被引量:1 2010年 根据布鲁菌属特异性基因BCSP31和布鲁菌种间特异性标志IS711插入序列,设计合成了3对引物,以牛种布鲁菌544A、104M和羊种布鲁菌16M基因组DNA为模板,通过优化反应条件,建立了可同时检测布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌的多重PCR方法。牛种布鲁菌可扩增出301和114bp 2条带,羊种布鲁菌可扩增出301和253bp 2条带,该方法对牛种布鲁菌544A和羊种布鲁菌16M混合DNA模板的最小检出量为100pg,对大肠杆菌O157∶H7、小肠结肠炎耶尔森菌等15种参照菌的核酸扩增结果均为阴性。应用该方法对吉林省某牛场的106份粪便进行检测,虎红平板凝集试验作对照,结果PCR检测9份为阳性,且全为牛种布鲁菌阳性,对应的虎红平板凝集试验也为阳性。结果表明,建立的多重PCR方法具有良好的敏感性和特异性,为布鲁菌病的鉴别诊断提供了一种分子检测工具。 杜涛峰 韩文瑜 雷连成 孙长江 李扬 顾敬敏 许会会关键词:多重PCR 沙门氏菌PCR检测方法的建立 被引量:35 2010年 根据GenBank沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因序列设计引物,扩增特异的202 bp核苷酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了沙门氏菌特异、敏感和快速的PCR检测方法。特异性试验结果表明,从沙门氏菌参考菌株中均能扩增出特异性的核苷酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用简便的直接煮沸裂解法制备样品DNA,该方法的敏感性可达2.43×103CFU/mL。 许会会 雷连成 谢芳 杜涛峰 韩文瑜关键词:沙门氏菌 PCR fyuA~+大肠埃希氏菌靶标抗菌肽的设计及其作用机制 抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)是生物体经诱导产生的一类具有广谱抗菌活性和免疫调节活性的小分子多肽。如何提高抗菌肽对病原菌的靶向性,从而提高其抗菌效率,减少或避免对正常菌群的破坏作用,是目... 许会会关键词:抗菌肽 大肠埃希氏菌 靶向性 文献传递