葛建峰
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：河北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省教育厅科学技术研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 乙酰氨基半乳糖转移酶14多抗的制备及鉴定被引量：2
- 2011年
- 利用生物信息学方法分析乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14)蛋白序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择一段多肽序列作为抗原用于抗体制备。将该DNA片段插入pET-DsbA,构建原核表达载体pET-DsbA-GALNT14。用IPTG诱导表达蛋白,经镍柱纯化蛋白后免疫新西兰大白兔,获得GALNT14多克隆抗血清。用免疫扩散和免疫印迹检测抗体效价及特异性。结果显示,成功表达并纯化了目的蛋白。免疫动物后获得了效价较高、特异性强的GALNT14多克隆抗体,GALNT14蛋白在人乳腺癌和肾癌细胞株中均有表达。该结果为进一步研究GALNT14的功能及其在肿瘤发生发展的作用方面奠定了基础。
- 吴琛郭晓丹宋玉华张博马思思邓昊葛建峰李世奇徐强康现江
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14)在毕赤酵母中的表达纯化及活性鉴定
- 2011年
- 将GALNT14全长编码区克隆到分泌型酵母表达载体pPIC9K中,构建重组载体pPIC9K-T14,经电转至毕赤酵母GS115中表达,使用G418筛选高表达重组菌,并对诱导条件进行优化,表达产物使用SDS-PAGE分析、Western blot鉴定、Sephadex G-100纯化、最后经HPLC检测活性。结果显示,在提供更好的供氧量条件下,用0.75%甲醇诱导可提高目的蛋白的表达量而降低杂蛋白的表达。培养上清液经SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子量约64 kDa;Western blot结果显示在相应分子量处有一条特异性条带;利用Sephadex G-100成功分离纯化了目的蛋白;活性测定结果显示所获得的目的蛋白具有催化活性,为深入研究GALNT14的结构与功能奠定了基础。
- 吴琛葛建峰张博马思思刘芳铭王媛媛田焕娜刘晓波张晓康李秦剑
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
