胡锦辉
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：复旦大学附属华山医院检验医学科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄葡萄球菌生物膜形成和毒力的影响被引量：6
- 2011年
- 目的 研究新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄葡萄球菌生物膜形成及毒力的影响.方法 采用基因敲除及基因互补技术获得耐甲氧西林金黄葡萄球菌（MRSA） ST-239 HS770 sasX基因突变株及基因互补株,应用半定量生物膜形成试验检测sasX基因突变前后对金黄葡萄球菌生物膜形成的影响,使用小鼠皮肤脓肿形成模型研究SasX对金黄葡萄球菌毒力的影响.结果 采用pKOR1质粒构建重组质粒并成功获得sasX基因敲除株.与野生株相比,突变株HS770△sasX生物膜形成能力明显减弱（P＜0.05）,互补表达株HS770△sasX（pRBsasX）生物膜形成能力无明显统计学差异（P＞0.05）.与野生株相比,突变株HS770△sasX初始黏附能力明显减弱（P＜0.05）,互补表达株HS770△sasX（pRBsasX）初始黏附能力无明显统计学差异（P＞0.05）.HS770和HS770△sasX接种小鼠后均形成明显的脓肿,PBS对照组小鼠皮肤表面未见脓肿产生.细菌接种后第2天小鼠皮肤脓肿面积达到最大,随着接种时间的延长小鼠皮肤脓肿面积逐渐缩小.但是从接种后第1天开始,HS770接种组小鼠皮肤脓肿形成面积在同一时间点上明显大于HS770△sasX接种组（P＜0.05）.结论 采用pKOR1质粒进行基因敲除可以明显提高目的基因的敲除效率.SasX可以通过影响细菌的初始黏附从而影响生物膜的形成,SasX是金黄葡萄球菌在医院环境内持续感染重要的毒力因子.
- 杜昕宋燕胡锦辉阮斐怡吕元李敏
- 关键词：金黄葡萄球菌生物膜毒力因子
- IL-17-GFP融合蛋白真核表达载体pEGFP-N1-IL-17-GFP构建及稳定转染胶质瘤细胞株筛选
- 背景:Th17细胞是新定义的一个T细胞亚群,与自身免疫、感染、肿瘤等多种疾病病理及预后相关。IL-17主要由Th17亚群细胞表达,是该亚群主要的效应分子,IL-17可以通过促进VEGF、CXCL1、CXCL5、CXCL8...
- 胡锦辉李敏刘春芳吕元
- 文献传递
- 调节高致病力CA—MRSA α-毒素表达的基因筛选及功能研究被引量：1
- 2010年
- 目的 从CA-MILSA全基因组水平筛选出除域值感知（quorum sensing）基因系统以外对α-毒素表达有明显调节作用的基因,并研究其调节机制.方法 使用本实验室构建并已申请国家专利的真核转座酶为基础的转座系统构建CA-MKSA转座子,并随机插入突变文库.通过用5%羊血平板筛选出与野生株相比溶血明显改变的克隆,接着用定量RT-PCR以及WB等实验筛选出α-毒素表达明显下降的突变菌株,运用随机引物反向PCB和测序等方法鉴定出突变基因.通过基因互补表达实验、小鼠菌血症与皮肤脓肿模型实验以及荧光定量RT-PCR等方法对目标基因以及其编码蛋白的功能进行研究.结果 在CA-MRSA中建立了一个库容量约为104个克隆的转座子随机插入突变库,最终筛选出25株α-毒素表达明显下降的突变菌株.CA-MRSA野生株溶血直径平均为212 mm,而其中AraC转录调节子突变株（AraC-）几乎无溶血,当将AraC基因互补回突变株（AraC-pT181araC）后,其溶血直径平均为197 mm,部分恢复到野生株溶血水平.荧光定量RT-PCR结果显示,与CA-MRSA野生株（PSMα为257.30±37.33,agr为115.60±0.81,α-毒素为3.23±0.21）相比,在AraC-中α-毒素、PSMα以及agr表达均明显下调（α-毒素1.09±0.01：t=10.18,P〈0.01;PSMα 34.85±2.15：t=5.95,P〈0.05;agr 35.19±1.72：t=42.33,P〈0.01）.小鼠菌血症模型实验结果为CA-MRSA野生株与AraC-（（x）±5）差异具有统计学意义（χ2=21.34,P〈0.01）.AraC-p1F181araC中PSMα、agr、α-毒素（hla）表达（分别为PSMα：180.10±15.29,agr：101.50±8.96,α-毒素：2.59±0.26）均部分恢复到野生株表达水平,与CA-MRSA野生株相比,差异无统计学意义（PSMα：t=1.914,P〉0.05;agr：t=1.563,P〉0.05;α-毒素：t=1.923,P〉0.05）.CIpP在MaC-（0.21±0.01）和AraC-pT181araC（0.17±0.03）中的表达与CA-MRSA野生株（0.20±0.01）相比,差异无统计学意义（t=0.555,P〉0.05和t=0.851,P〉0.05）.小鼠皮肤脓肿�
- 李敏胡锦辉李茹张心菊阮斐诒吕元
- 关键词：甲氧西林抗药性细菌毒素类
