聂纪芹
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
- 供职机构：三峡大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金湖北省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HCV core 基因克隆蛋白表达及其活性分析
- :丙型肝炎病毒(HCV)的感染在肝癌的发生发展中具有重要作用,尤其是HCV 的核心蛋白(HCV core)在肝细胞的表达及核苷酸的变异.因此检测HCV core 对于肝癌的早期诊断及预防具有非常重要的意义.本实验构建HC...
- 邹晓华吴薇聂纪芹刘朝奇
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- annexinA2基因片段的克隆、表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- 目的:构建人源annexinA2基因片段的原核表达载体,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体。方法:从GenBank(BC093056.1)中获得人源annexinA2基因的cDNA序列并根据不含信号肽的编码序列设计引物,用PCR的方法扩增编码an-nexinA2基因部分序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达annexinA2的蛋白。表达的蛋白产物利用切胶回收的方法纯化,用His抗体进行Western blot鉴定。用纯化的目的蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,获得annexinA2的抗血清,通过ELISA测定兔多克隆抗体的滴度。在CaSki细胞内采用细胞免疫荧光(CIF)和流式细胞术(FCM)检测内源annexinA2蛋白的表达,用于鉴定制备的多克隆抗体特异性。结果:通过双酶切及测序证实原核表达质粒pET28a(+)-annexinA2构建成功,可在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导高表达,得到相对分子质量约28 000的annexinA2蛋白。纯化的蛋白免疫日本大白兔后,产生特异的高滴度的抗体(ELISA滴度达1∶640 000)。CIF和FCM结果显示抗血清与肿瘤细胞表达的annexinA2有高度特异的结合活性。结论:构建了annexinA2的原核表达质粒并获得高纯度的蛋白,免疫动物后,获得了特异、高效价的多克隆抗体,为人源annexinA2蛋白的生物学功能及肿瘤治疗的研究提供了实验基础。
- 聂纪芹汪龚泽刘朝奇
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- S100A10多克隆抗体的制备及其活性鉴定
- :S100A10 蛋白在Annexin Ⅱ介导生物膜的聚集和融合中具有重要作用.S100A10 蛋白参与了Annexin Ⅱ四聚体形式介导的质膜循环,在肿瘤的发生发展研究中具有重要意义.本实验构建人源S100A10 基因...
- 聂纪芹刘朝奇
- 关键词：基因原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- Annexin A2单克隆抗体抗肿瘤活性的实验研究
- 2019年
- 目的研究人膜联蛋白A2(Annexin A2)单克隆抗体的抗肿瘤活性,探讨Annexin A2在肿瘤发生发展中的作用。方法表达纯化Annexin A2重组蛋白,免疫小鼠及细胞融合制备单克隆抗体,用间接ELISA检测抗体的效价,Western blot和免疫共沉淀检测抗体的特异性。MTT法检测外源性Annexin A2抗体对肿瘤细胞生长的影响,流式细胞术检测其对肿瘤细胞周期的影响,RT-PCR及Quantitative real-time PCR检测对肿瘤细胞周期相关基因的影响,transwell检测其对HepG2细胞的侵袭及迁移的影响。结果 Annexin A2重组蛋白免疫小鼠,获得效价高的单克隆抗体。MTT结果显示,与对照细胞相比,外源抗体能够抑制HepG2细胞的生长。细胞周期相关检测结果显示,Annexin A2蛋白的表达与肿瘤细胞的生长周期相关基因具有相关性。transwell结果显示,外源抗体的处理抑制HepG2细胞的迁移,但促进了HepG2细胞的侵袭。结论 Annexin A2重组蛋白免疫Balb/c小鼠后,获得高滴度特异性的单克隆抗体。获得的Annexin A2单克隆抗体具有抑制生长迁移作用,为肿瘤的诊断及治疗提供了实验依据。
- 陈赛聂纪芹李聪谭超
- 关键词：ANNEXIN
- 小鼠钙网蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备
- 2011年
- 钙网蛋白(calreticulin,CRT)是存在于哺乳动物细胞具有高度保守性和多种生物学活性的蛋白,为了更好的研究其生物学活性,本课题组通过PCR方法扩增CRT截短基因,将其克隆到原核表达载体PET-28a(+)中,经大肠杆菌表达并纯化CRT蛋白。以纯化的CRT蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,制备多克隆的CRT血清。进一步采用Western blot、ELISA、流式细胞术等技术对制备的抗体进行初步鉴定。结果显示:原核表达重组质粒在大肠杆菌中能高效表达CRT蛋白;获得多抗血清应用Western blot鉴定几种细胞株中CRT,流式细胞术检测CRT的外翻现象。因此我们得到结论——成功制备了CRT蛋白及其抗体,并有很好的特异性,能识别人鼠两种源性的CRT。
- 汪龚泽刘朝奇杨建林聂纪芹
- 关键词：钙网蛋白原核表达抗体制备
- AnnexinA2抗体制备及其应用的实验研究
- 目的：为了研究人源膜联蛋白 A2(AnnexinA2)在肿瘤发生发展中的作用,探讨annexinA2作为肿瘤分子靶点在肿瘤诊断及治疗中的应用,我们制备了其多克隆及单克隆抗体并进行了相关研究。 方法：(1)用PCR克隆...
- 聂纪芹
- 关键词：多克隆抗体单克隆抗体细胞周期细胞迁移
- 文献传递
- SPA-Luc嵌合基因的构建及其融合蛋白活性检测
- 2013年
- 目的:葡萄球菌A蛋白-荧光素酶(SPA-Luc)原核表达载体的构建,表达,纯化,并对其生物学效应进行初步研究。方法:PCR扩增SPA和Luc基因,并连接到pET28a(+)中,构建原核表达质粒。构建正确的重组质粒转化至E.coliBL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Western Blot鉴定,同时用Ni-NTA亲和层析法纯化SPA-Luc蛋白,最后用荧光素酶试剂盒和ELISA检测融合蛋白的生物学活性。结果:成功构建重组质粒pET28a(+)-SPA、pET28a(+)-Luc和pET28a(+)-SPA-Luc,SDS-PAGE及Western Blot证明正确表达了重组蛋白,并获得了纯化的融合蛋白SPA-Luc。荧光素酶试剂盒检测发现该蛋白仍能与IgG结合,并且与兔和鼠的IgG有较高亲和性。ELISA显示SPA-Luc蛋白替代常规二抗检测抗原,具有更高的敏感性。结论:成功的克隆、表达、纯化的SPA-Luc蛋白可用于抗原抗体的检测,且比常规二抗具有更高的敏感性,为进一步研究其在免疫学中的应用奠定了实验基础。
- 邹晓华聂纪芹吴薇刘朝奇
- 关键词：葡萄球菌A蛋白荧光素酶融合蛋白免疫学检测
- SPA-荧光素酶的质粒构建、蛋白表达及其生物学活性
- 研究背景:荧光素酶(Luciferase,Luc)是一类能催化荧光素氧化并产生生物光的酶。葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)是金黄色葡萄球菌细胞壁分离出的一种单一多肽链。SPA具有...
- 邹晓华金羽聂纪芹刘朝奇
- 关键词：SPA荧光素酶融合蛋白免疫学实验
