罗庆礼
- 作品数：87 被引量：241H指数：9
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值被引量：2
- 2012年
- 目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。
- 罗庆礼周银娣沈继龙
- 关键词：日本血吸虫病循环抗原卵黄抗体
- 三种重组蛋白混合抗原的间接ELISA法检测人血清弓形虫IgM和IgG抗体被引量：6
- 2014年
- 目的比较弓形虫rSAG1、rHXGPRT和rAK三种重组蛋白作为混合抗原在弓形虫病血清免疫诊断中检测结果与进口试剂盒检测结果的差异,评价三种重组蛋白混合抗原检测在弓形虫病免疫诊断中的应用价值。方法收集经美国产Zeus Toxo-ELISA试剂盒筛选的阳性血清136例,阴性血清30例。复苏、诱导、表达含有弓形虫pET-28a/SAG1,pET-28a/HXGPRT和pET-28a/AK表达载体的3个菌株,纯化3种重组蛋白。以3种混合蛋白作为诊断抗原,采用间接ELISA法,以正交叉方法优化检测条件,检测66例弓形虫IgM阳性、70例IgG例阳性血清和30阴性血清,比较混合抗原检测和Zeus Toxo-ELISA试剂盒检测结果的差异;以Zeus Toxo-ELISA弓形虫试剂盒检测结果为标准,评价重组蛋白混合抗原检测的敏感性、特异性、总符合率以及约登指数。结果 IgM:混合抗原与Zeus Toxo-ELISA试剂检测结果经χ2检验,χ2值为3.12,P>0.05,差异无显著性。混合重组抗原的敏感性为89.4%,特异性为96.7%,总符合率为91.7%,约登指数为0.861。IgG:混合抗原与Zeus Toxo-ELISA试剂检测结果经χ2检验,χ2值为0.25,差异无显著意义(P>0.05)。采用混合重组抗原的敏感性为97.1%,特异性为93.3%,总符合率为96.0%,约登指数为0.904。结论本研究3种重组抗原(rSAG1+rHXGPRT+rAK)混合的间接ELISA法检测弓形虫IgM和IgG,与进口ELISA试剂检测的总符合率高,具有较高的敏感性、特异性;更经济。
- 丁邦胜李霞罗庆礼余莉沈继龙
- 关键词：弓形虫重组抗原免疫诊断间接ELISA
- 大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子真核表达载体的构建及其体外表达的鉴定被引量：2
- 2012年
- 背景:星形胶质细胞被激活后表现出神经干细胞的特性,细胞表面的神经营养因子(表皮生长因子、睫状神经营养因子)受体超表达,通过改善复杂的内环境,有利于定向诱导神经干细胞向神经元的分化。目的:构建大鼠pSecTag2/HygroB-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF真核表达质粒,检测其在cos-7细胞中的共表达。方法:采用反转录-聚合酶链反应技术从大鼠颌下腺、坐骨神经组织总RNA中扩增出表皮生长因子、睫状神经营养因子基因功能区,将上述基因片段分别连接到真核表达载体pSecTag2/Hygro B,聚合酶链反应初步筛选、双酶切鉴定后送测序。将构建成功的两种重组载体单独及共转染cos-7细胞,Western blot法鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白的瞬时表达。结果与结论:反转录-聚合酶链反应结果证实成功获得大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子cDNA。DNA序列分析证实2种真核表达载体中的表皮生长因子、睫状神经营养因子序列与GenBank中目的序列一致。脂质体介导转染cos-7细胞48h后,Western blot鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白在cos-7细胞中的表达,分别在Mr6000,22000处出现阳性条带。提示大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子基因的真核表达载体pSecTag2/HygroB-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF构建成功,共转染cos-7细胞后能够共表达重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白。
- 何健尹宗生高维陆罗庆礼张胜权
- 关键词：表皮生长因子睫状神经营养因子真核表达载体转染
- 日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶的重组表达及其在血吸虫生活史各阶段的表达分析
- 2015年
- 目的在大肠杆菌中原核表达、纯化日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA),观察其在血吸虫生活史各阶段的表达。方法以日本血吸虫成虫c DNA为模板扩增rSjFBPA基因,克隆至pET28a(+)质粒后,再转化入E.coli BL21。含重组质粒的菌株经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定重组蛋白rSjFBPA是否表达,用层析法纯化rSjFBPA并用SDS-PAGE鉴定其纯度。同时,用RT-PCR方法分析SjFBPA在血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵各阶段的表达情况。结果经PCR扩增出目的基因,含目的基因的TA克隆质粒经双酶切和测序鉴定,证明插入片段与预期目的基因序列相符。Western blotting结果显示,表达后的重组蛋白可与His-tag单克隆抗体发生特异性反应。经镍亲和层析法制备了纯化的重组SjFBPA蛋白,纯化重组蛋白浓度达4 mg/ml。RT-PCR结果显示,SjFBPA在日本血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵阶段均有表达。结论 SjFBPA基因被成功克隆和表达,其在日本血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵各阶段均有表达。
- 闫珂钟政荣徐云侠丁淑琴胡建国徐元宏罗庆礼沈继龙
- 关键词：日本血吸虫克隆纯化
- 日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位被引量：19
- 2007年
- 目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。
- 王志成徐元宏汪学龙李敏罗飞郑美娟罗庆礼沈继龙
- 关键词：血吸虫
- 日本血吸虫酪氨酸羟化酶基因的克隆、真核表达及鉴定
- 2010年
- 目的扩增日本血吸虫的酪氨酸羟化酶(Schistosoma japonicumTyrosine Hydroxylase,Sj TH)编码基因,构建pcDNA3.1(+)-SjTH真核表达载体,并检测其在COS-7细胞中的表达情况。方法以日本血吸虫成虫cDNA为模板,RACE PCR扩增Sj TH编码基因,并与pGEM-T连接进行亚克隆,双酶切后回收目的基因,并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,PCR和双酶切初步鉴定后测序,纯化无内毒素重组质粒pcDNA3.1(+)-Sj TH,转染入COS-7细胞,G418筛选阳性克隆,RT-PCR和Western blot鉴定重组Sj TH蛋白的表达。结果 RACE PCR扩增出SjTH编码基因,大小约1392bp,经双酶切鉴定、测序及Blast分析鉴定重组真核质粒构建成功。脂质体介导无内毒重组真核质粒pcDNA3.1(+)-SjTH转染入COS-7细胞,G418筛选出阳性克隆,RT-PCR证实阳性单克隆细胞带有SjTH编码基因,Western blot鉴定单克隆细胞表达重组SjTH蛋白,大小约54kD。结论真核表达载体pcDNA3.1(+)-SjTH构建成功,G418筛选出阳性克隆,真核表达重组SjTH蛋白,为后续研究SjTH蛋白功能奠定基础。
- 石杜娟徐元宏胡元生周银娣刘丽丽钟政荣罗庆礼沈继龙
- 关键词：日本血吸虫酪氨酸羟化酶真核表达
- AngⅡ及其受体拮抗剂调节大鼠肺微血管内皮细胞ACE2蛋白表达的体外实验被引量：1
- 2010年
- 目的 观察血管紧张肽（angiotensin,Ang ）Ⅱ及其受体拮抗剂对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells, PMVEC）内血管紧张肽转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）2表达的影响.方法 体外培养大鼠PMVEC,随机分为4组.正常对照组;AngⅡ组：以浓度为10-7 mol/L的AngⅡ与之分别孵育3 h、6 h、12 h和24 h;脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组：给予10-2 mg/mL的LPS刺激细胞24 h;AngⅡ1型受体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R）拮抗剂[Sar1,Ile8]-Ang Ⅱ干预组：使用[Sar1,Ile8]-Ang Ⅱ预处理细胞30 min后再给予10-7 mol/L Ang Ⅱ或10-2 mg/mL LPS刺激24 h;采用RT-PCR、Western blot方法检测ACE2表达的变化情况.结果 与正常对照组相比,AngⅡ刺激组于不同时相点ACE2表达均显著降低（P〈0.05）,ACE2表达与AngⅡ刺激的时间呈负相关;LPS组ACE2蛋白表达亦显著降低（P〈0.05）.[Sar1,Ile8]-Ang Ⅱ干预组ACE2蛋白表达较LPS/Ang Ⅱ组显著增加（P〈0.05）.结论 AngⅡ可以降低体外培养PMVEC中ACE2的表达,并与Ang Ⅱ刺激时间呈负相关;LPS亦可以显著降低ACE2蛋白表达;AT1R拮抗剂可以降低AngⅡ及脂多糖对ACE2蛋白表达的抑制作用,AngⅡ和ACE2相互作用可能与急性肺损伤（acute lung injury,ALI）时PMVEC损伤的发生、发展有关.
- 徐俊程立顺宋志友罗庆礼张泓
- 关键词：肺微血管内皮细胞
- 大鼠CD4~＋CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达
- 2012年
- 背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25-T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25-T细胞中的表达。方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25-T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25-T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25-T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25-T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25-T细胞中高表达。
- 黄洋李永翔沈继龙罗庆礼陆威霍星星
- 关键词：慢病毒FOXP3磁珠分选
- 日本血吸虫信号蛋白14-3-3在虫卵的定位及其免疫诊断价值初探被引量：23
- 2007年
- 目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在虫卵内的定位和重组Sj14-3-3(rSj14-3-3)的免疫诊断价值。方法从日本血吸虫尾蚴感染42 d的兔肝脏中分离虫卵,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Sj14-3-3基因在虫卵期的转录水平;兔肝组织石蜡切片免疫组化染色,观察内源性Sj14-3-3在虫卵内的分布和表达丰度。利用纯化的rSj14-3-3和可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从日本血吸虫成熟虫卵中检出760 bp左右的基因片断;免疫组化显示Sj14-3-3主要分布在虫卵内毛蚴的体壁和两边的侧腺。检测急性、慢性患者和正常人血清抗rSj14-3-3抗原的抗体阳性率分别为91.0%、78.9%、0.0%;上述标本中抗SEA抗体的阳性率分别为97.4%、88.9%和2.5%。结论用ELISA检测抗SEA抗体和rSj14-3-3抗体诊断血吸虫病具有高度的特异性和敏感性,而Sj14-3-3在成熟虫卵阶段高表达,可能是SEA的主要组分,具有实用价值。
- 王志成徐元宏罗飞李敏郑美娟罗庆礼沈继龙
- 关键词：日本血吸虫虫卵免疫诊断
- 一种弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途
- 本发明公开了一种弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途，其中弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体细胞株为杂交瘤细胞株T2，由中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国·武汉·武汉大学，保藏编号为...
- 余莉苏蕊沈继龙张发敏罗庆礼
- 文献传递
