王秀芳
- 作品数：51 被引量：179H指数：7
- 供职机构：河北医科大学更多>>
- 发文基金：“九五”国家科技攻关计划河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 斑马鱼卵黄脂磷蛋白在早期胚胎中促进L1-ORF2诱导的EGFP报告基因表达
- 2024年
- 为了探讨长散布核元件-1(long interspersed nuclear element-1,L1)在胚胎早期高表达的分子机制,将人L1的第二个开放阅读框(open reading frame 2,ORF2)(L1-ORF2,该文中简称ORF2),插入到pEGFP-C1质粒(C1)的EGFP基因下游,生成C1-ORF2表达载体,插入的ORF2可以影响EGFP报告基因的表达。将C1-ORF2等表达载体注射到斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎中,结果表明,在所使用的表达载体中,只有插入ORF2的表达载体诱导EGFP报告基因高表达。C1-ORF2表达载体诱导的EGFP荧光强度随着胚胎的发育而显著降低。EGFP荧光报告蛋白在C1-ORF2中的表达受到组蛋白的抑制,0 h胚胎溶卵液(简称胚胎溶卵液)能减弱组蛋白对EGFP表达的抑制作用,从胚胎溶卵液中纯化的卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)的作用强于胚胎溶卵液。凝胶阻滞实验表明,ORF2 DNA能与胚胎溶卵液蛋白、组蛋白和Lv结合。改变组蛋白、Lv和ORF2片段三者的添加顺序,结果证明Lv可以结合ORF2片段和组蛋白,从而干扰组蛋白与ORF2的结合。进一步研究发现,Lv增加了C1-ORF2 DNA对DNase I消化的敏感性。该研究获得以下结论:Lv可以与所有检测的DNA片段结合,但与ORF2的结合比与其他DNA片段的结合亲和力更高。Lv通过提高ORF2 DNA染色质的易接近性,激活ORF2诱导的斑马鱼早期胚胎EGFP基因的表达。
- 王文霞王晓蝶武崇光Luqman ALI耿琦张国忠冯旭杨悦成王秀芳吕占军
- 关键词：体外转录
- 不同单位保存的艾氏腹水癌细胞(EAC)的某些生物学特性比较研究
- 2001年
- 目的 比较研究不同单位保种的EAC瘤株生物学特性的差异。方法 选择研究了北京市肿瘤研究所、山东省医学科学院药物研究所及武汉大学保种中心保存EAC细胞的大小 ,细胞株体外培养时对血清的依赖性 ,接种小鼠皮下建立肿瘤动物模型肿块生长曲线 ,建立的动物模型对环磷酰胺CTX治疗的敏感性等指标。结果 发现三个单位保存的EAC细胞形态及大小基本一致 ;北京EAC体外培养容易生长 ,7 5%NCS即可生长良好 ,山东及武汉EAC体外培养生长力较弱 ;皮下接种BALB c小鼠后 ,北京EAC最易生长肿瘤 ,武汉EAC次之 ,山东EAC最差 ;建立的动物模型对CTX治疗的敏感性 ,依次为北京EAC ,武汉EAC ,山东EAC ,用CTX治疗的抑瘤率相应为 82 9% ,71 9% ,50 %。结果 可见三个不同单位保种的EAC瘤细胞生物学特性确已存在显著差异。
- 徐增年王秀芳吕占军刘军须刘福英
- 关键词：EACCTX艾氏腹水癌保种生物学特性
- L1210克隆细胞mRNA的表达及蛋白电泳图谱分析
- 2003年
- 目的 研究 L12 10及其克隆细胞 m RNA表达的差异 ,从基因水平探讨质控瘤株的方法。方法 用SDS- PAGE电泳观察瘤细胞株的蛋白质电泳图谱 ;6株生物素标记的探针与瘤细胞进行玻片原位杂交测定瘤细胞m RNA的表达。结果 北京肿瘤所 L12 10蛋白质条带数为 32条带 ,克隆细胞 L3F9和 L3E11均为 31条带 ;细胞原位杂交证明 ,北京肿瘤所 L12 10与 6株探针均杂交阳性 ,但杂交阳性染色强度不同 ;克隆细胞 L3E11与 p16、c- jun及 p5 3探针杂交阳性 ;克隆细胞 L3F9与 p16 ,c- fos,c- myc及 c- jun探针杂交阳性。结论 从北京肿瘤所保存的L12 10细胞中获得的 2株克隆细胞 L3E11和 L3F9的蛋白质电泳图谱的条带数一致 ,但其 m RNA的表达不同 ;c-fos,c- myc以及 p5 3基因的表达与否可以把这 2株克隆细胞区别开来 ,c
- 刘秋燕吕占军王秀芳刘福英
- 关键词：L1210克隆细胞原位杂交分子探针
- 不同单位保种的艾氏腹水癌细胞核型及DNA含量的比较研究被引量：4
- 2000年
- 目的 比较研究三个单位保种的艾氏腹水癌细胞（EAC）染色体数目及DNA含量。方法 取腹腔接种EAC 6 d的KM小鼠，腹腔注射秋水仙碱，取腹水，经低渗处理，固定后涂片，染色，显微镜下染色体计数；腹水传代的EAC，用70%乙醇固定，流式细胞仪测DNA含量。结果 山东省医学科学院药物研究所（山东）、武汉大学典型培养物保藏中心（武汉）和北京市肿瘤研究所（北京）保种的艾氏腹水癌细胞株，其染色体均数分别为28.31±7.78、29.16±12.25、23.22±10.21条，方差分析表明，除北京与山东外，武汉与北京、武汉与山东两两比较有极显著差异（P<0.01）。直方图分析显示主流染色体范围分别为25-27、22-24、22-24条。北京艾氏腹水癌细胞 DNA含量最多，山东艾氏腹水癌细胞DNA含量最少。结论 三个单位的艾氏腹水癌细胞株在某些方面已出现差异。
- 徐增年王秀芳吕占军刘福英
- 关键词：艾氏腹水癌DNA含量癌细胞株EAC保种传代
- 克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究被引量：4
- 2001年
- 目的 研究从S180获得的克隆细胞株S2D9,接种 4个不同品 (种 )系小鼠建立肿瘤动物模型的某些基本生物学特性。方法 由KM小鼠腹腔传代的S2D9克隆细胞 ,用GKN稀释成不同浓度 ,接种KM、DBA 2、6 15、C57BL 6小鼠右腋皮下及腹腔 ,观察小鼠最早出现可见肿块、腹水时间及小鼠生存时间 ;不同品 (种 )系小鼠经皮下接种S2D9细胞 ,建立肿瘤模型 ,从接种后第 5日 ,每日观察肿瘤生长情况 ,测量肿块直径 (cm) ,绘制肿瘤生长曲线 ;S2D9克隆细胞株接种BALB c小鼠皮下 ,取接种第 7日肿块 ,经石蜡切片 ,HE染色 ,观察病理结果 ;不同品 (种 )系小鼠皮下接种S2D9瘤细胞建立的动物模型 ,经腹腔注射环磷酰胺 (CTX)或顺胺氯铂 ,观察S2D9克隆细胞肿瘤模型对CTX或顺胺氯铂治疗的敏感性。结果 S2D9克隆细胞在 6 15及DBA 2小鼠的皮下较KM及C57BL 6小鼠容易生长肿瘤 ;在KM及DBA 2小鼠腹腔较C57BL/ 6及 6 15小鼠容易长出腹水 ;皮下接种KM、C57BL/ 6、6 15及DBA 2四个不同品(种 )系小鼠 ,第 12天瘤重分别为 (2 3± 0 9)g ,(0 8± 0 2 )g ,(2 0± 0 2 )g及 (1 9± 0 1)g;S2D9瘤细胞接种 4个不同品 (种 )系小鼠制备的肿瘤模型 ,用CTX治疗 ,抑瘤率分别为 80 % (6 15 ) ,75 % (C57BL 6 ) ,6 8 4% (DBA 2 ) ,6 5 2 %(KM) ;用顺胺?
- 王秀芳吕占军刘福英徐增年刘军须
- 关键词：肿瘤克隆细胞动物模型CTXC57BL/6皮下接种
- SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响被引量：1
- 2012年
- SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14),构建pAlu14质粒,瞬时转染HeLa细胞,用Northern blot检测和荧光显微镜观察GFP RNA和GFP蛋白表达,发现Alu串联序列强烈抑制GFP基因表达,该序列没有转录终止作用产生高分子量GFP融合RNA。又在pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间按正、反方向插入PolyA序列及去除AATAAA信号的PolyA序列,插入的这些PolyA序列均能部分解除Alu14对GFP基因的抑制作用;去除AATAAA信号的PolyA正、反序列仍然引起转录终止。将PolyA反序(PolyAas)分为4段每段60 bp,中间的2段分别称为2F2R和3F3R,将2F2R或3F3R插在pAlu14质粒的Alu串联序列的上游,随着插入2F2R片段拷贝数的增加转录的GFP融合RNA的分子量增加;2F2R的下游如果依然是2F2R那么2F2R可以支持转录延伸,如果2F2R下游是Alu串联序列则2F2R导致转录终止。无论插入一个3F3R或插入64个3F3R,均产生低分子量GFP RNA。
- 李书平冯晶晶王红钢王秀芳吕占军
- 关键词：ALUSV40POLYAGFP转录终止
- 卵黄脂磷蛋白通过网格蛋白介导的内吞作用进入培养的人成纤维细胞被引量：1
- 2023年
- 为了探究从斑马鱼(Danio rerio)胚胎裂解液中纯化的卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)进入培养的人成纤维细胞的分子途径,该研究用Sephadex G-200色谱柱结合QAE-Sephadex A50阴离子交换色谱柱从斑马鱼0 h胚胎裂解液中分离纯化出Lv。FITC标记的Lv(FITC-Lv)预先分别与Hepes、牛组蛋白、鱼精蛋白、卵磷脂、0 h胚胎胰蛋白酶水解物或者斑马鱼胚胎裂解液孵育,再加入至opti-MEM培养基中培养人成纤维细胞,培养一定时间后,用荧光倒置显微镜观察,发现Hepes和组蛋白可以促进Lv进入细胞。制霉菌素是陷窝介导的内吞作用(caveolae-mediated endocytosis)的抑制剂,氯丙嗪和蔗糖是网格蛋白介导的内吞作用(clathrin-mediated endocytosis)的抑制剂,阿米洛利是巨胞饮作用(macropinocytosis)的抑制剂。为了证实Lv进入细胞的分子途径,在FITC标记Lv与人成纤维细胞的培养体系中,分别加入上述抑制剂。结果发现氯丙嗪和蔗糖可以抑制Lv进入细胞。该研究获得如下结论:纯化的斑马鱼Lv单独不能进入细胞,在组蛋白的协同作用下,Lv通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞。该研究将为进一步研究Lv进入细胞发挥生物学功能奠定基础。
- 王晓蝶武崇光王文霞王瑜宋志学吉宁吴沛园王秀芳吕占军
- 关键词：组蛋白
- 外源RNA对小鼠成纤维细胞形态和蛋白质表达的影响
- 2002年
- 用不同RNA诱导培养小鼠成纤维细胞 ,观察外源RNA对细胞形态的影响 ,发现所添加的不同RNA均可使细胞形态发生改变。将形态改变的细胞传代 ,发现改变的细胞形态可维持至第 3代。将大鼠肝RNA诱导的小鼠成纤维细胞传代至第 4代 ,每代留样做蛋白质SDS PAGE电泳 ,观察RNA对蛋白质表达的影响 ,发现RNA诱导的细胞 ,1— 4代蛋白表达均发生了质和量的改变。
- 张红艳王秀芳宋淑霞
- 关键词：蛋白质小鼠成纤维细胞基因表达
- L1210细胞系克隆株的某些细胞学特性比较
- 2001年
- 目的 对L12 10细胞系进行细胞克隆 ,筛选出生长旺盛的细胞克隆 ,对不同克隆细胞及原代细胞的某些细胞学特性进行比较研究。方法 扫描电镜观察细胞表面结构 ;用流式细胞仪测定细胞DNA含量 ;免疫组化染色法测定细胞蛋白质的分布。结果 扫描电镜观察细胞表面结构 ,克隆株L2B9、L2H7、L2H8、L3B12及L3E11都有大量微嵴、微皱褶 ,但疏密程度不同 ;L2C9的微嵴和微皱褶较为粗大且有丰富的微绒毛 ;L3F9细胞表面有大量的突起。克隆细胞株DNA含量从小到大依次为L2H7、L3F9(8 3pg)、L2H8(8 5pg)、L2C9(8 6pg)、L3B12 (8 7pg)、L2B9(8 9pg)及L3E11(9 0pg) ;原代细胞DAN含量为 8 8pg。克隆细胞染色体数目分别为 48,5 8,6 4,6 6 ,6 2 ,6 3,5 8条 ,最少为 48条 (L2B9) ,最多为 6 6条 (L3B12 ) ;原代细胞染色体数目从 12～ 78条不等 ,主流染色体为 6 2～ 6 3条 ,所占比例为2 1 6 %。免疫组化染色结果显示 ,不同克隆细胞与 10种抗体反应阳性率及阳性反应程度不同 ;且克隆细胞反应阳性率普遍高于原代细胞。结论 不同克隆细胞之间某些细胞学特性有差别 ,说明原代L12 10细胞间已有明显异质性 ;克隆细胞较原代细胞的均一性好。
- 刘秋燕吕占军王秀芳刘福英
- 关键词：L1210细胞克隆细胞克隆株免疫组化染色法染色体数目
- α-生育酚琥珀酸酯通过线粒体诱导肿瘤细胞凋亡的研究
- 2010年
- α-生育酚琥珀酸酯(α-tocopheryl succinate,α-TOS)是一种有潜力的细胞凋亡诱导剂,可以诱导人类以及小鼠多种肿瘤细胞凋亡。α-TOS进入细胞后,特异性进入线粒体内,替代结合在线粒体内膜复合体Ⅱ上的辅酶Q,引起线粒体活性氧(re-active oxygen species,ROS)的产生,随后由ROS促使细胞质中的凋亡相关蛋白Bax形成由二硫键连接的二聚体,这些二聚体结合到线粒体的外膜(mitochondrial outer membrane,MOM)上,形成通道,促使线粒体内的细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)从这些通道穿过,转位到细胞质中,级联激活位于细胞质中的caspase,引起细胞凋亡。本文就α-TOS诱导肿瘤细胞凋亡的线粒体途径进行综述。
- 谢英王秀芳
- 关键词：肿瘤线粒体细胞凋亡
