王全颖
- 作品数：10 被引量：20H指数：2
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- 动物模型中人骨形态发生蛋白2重组腺病毒活性观测
- 2005年
- 目的:利用基因工程技术构建人骨形态发生蛋白2重组腺病毒,并进行体内表达,测定活性;为深入开展的基因治疗研究创造条件。方法:实验于2000-05/2002-06在西安交通大学第一附属医院骨科实验室完成。应用PCR技术扩增出人骨形态发生蛋白2全长基因,体外同源重组构建重组腺病毒后,随机将30只SD大鼠分为治疗组和对照组,每组15只,将纯化后的重组腺病毒50μL注入SD大鼠股部肌肉陷窝病损处,通过组织学染色、X射线片对动物模型的组织变化进行观测。结果:6周后治疗组可见明显骨诱导形成,2周时治疗组碱性磷酸酶活性明显高于对照组,重组腺病毒治疗组有明显的诱导成骨活性。结论:应用于动物实验中目的基因表达,并具有生物学活性。本研究是在骨缺损基因治疗的一次尝试,且人骨形态发生蛋白2重组腺病毒的构建成功,也为国内骨科疾病基因治疗的进一步研究提供了基础。
- 王德利阮狄克李海峰何勍马巍杨广笑王全颖
- 关键词：骨形态发生蛋白质类克隆分子基因表达
- 重组腺伴随病毒载体表达hBDNF对β-淀粉样肽神经毒性的抑制作用
- β-淀粉样肽(Aβ)沉积是阿尔茨海默病(AD)主要病理改变老年斑的成分,Aβ是一种神经元毒性肽,尤其Aβ是它的主要毒性部分。为了研究重组腺伴随病毒载体表达hBDNF对Aβ神经毒性的抑制作用,人工合成Aβ,原代培养大鼠海马...
- 马东亮任惠民胡海涛刘勇刘朝晖王全颖
- 文献传递
- 2型腺伴随病毒基因治疗载体的构建被引量：13
- 2001年
- 目的 构建一种适用于中枢神经系统疾病的基因治疗载体。方法 以野生型 2型腺伴随病毒 (AAV 2 )质粒pssv9int 及逆转录病毒载体质粒plxsn为基本元件 ,利用重组DNA技术 ,构建了一种通用型AAV载体质粒pssHG Neo。结果 该质粒除含有必备的原核细胞复制子及Ampr 筛选基因外 ,还含有真核细胞筛选基因———Neor 及供插入目的基因的多克隆位点 (MCS) ,在MCS的上游为逆转录病毒的长末端重复序列 (5’LTR) ,具有启动子的功能 ,启动定向插入到MCS的外源目的基因。质粒中的AAV反向末端重复序列 (ITR)具有定点整合于人基因组 1 9号染色体S1位点的特点。
- 杜绪仓任惠民胡海涛刘勇杨广笑王全颖
- 关键词：基因治疗重组DNA技术
- EGFRvIII/PEP-3 cDNA与HBcAg重组基因原核表达载体的构建、表达与免疫分析被引量：2
- 2007年
- 目的:构建EGFRvIII与HBcAg重组基因的原核表达质粒,进行原核表达、纯化,观察表达蛋白的免疫原性和抗原性。方法:通过双酶切从pGEM-TEasy/PEP-3载体获得编码EGFRvIII突变区的cDNA片段,插入去除了主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中,获得重组质粒pGEMEX/c-PEP-3-c,将重组基因亚克隆于原核表达载体pET28a(+)中,通过IPTG诱导蛋白表达,利用Ni2+-NTA亲和层析法对融合蛋白进行纯化;用融合蛋白常规免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测小鼠血清中抗体的滴度。结果:经酶切鉴定、序列测定证实融合基因已插入pET28a(+)载体中,融合基因序列与设计序列完全一致。原核表达后表达量占沉淀全菌蛋白的56%,纯化产物占总蛋白的92%,浓度约8g/L。BALB/c小鼠经4次免疫后,其血清中中和抗体的滴度可达1∶16000,第6次免疫后血清中中和抗体的滴度达到1∶2.56×105,抗PEP-3抗体滴度达到1∶1.28×105,抗HBcAg抗体滴度小于1∶4×103。结论:融合基因PEP-3-HBcAg在大肠杆菌中可获得高效表达,表达的融合蛋白可以诱导小鼠产生高滴度和高特异性中和抗体,从而为高表达EGFRvIII恶性肿瘤基因工程疫苗的研究奠定基础。
- 段小艺王健生郭佑民韩俊丽王全颖杨广笑
- 关键词：重组基因HBCAG免疫原性
- Alzheimer病基因工程疫苗的研制Ⅰ:重组质粒的构建
- ＜正＞ Alzheimer病是以大脑皮质和海马结构内出现大量的老年斑为主要病理特征的中枢神经退行性病变,含有42个氨基酸的β-淀粉样肽（β-amyloid peptide,Aβ1-42）是老年斑的核心成分。近年研究证实用...
- 冯改丰胡海涛杨广笑王全颖
- 文献传递
- Alzheimer病基因工程疫苗的研制Ⅱ:融合蛋白的表达及其抗原性和免疫原性的分析
- ＜正＞ 为了研究本实验室构建的表达质粒pBV220/Aβ-HBc所表达的融合蛋白的抗原性和免疫原性,推测其作为预防和治疗Alzheimer病疫苗的可行性,我们用重组质粒pBV220/Aβ-HBc转化大肠杆菌DH5α,进行...
- 胡海涛冯改丰杨广笑王全颖
- 文献传递
- 一种肝脏持续表达丙型肝炎病毒核心蛋白的小动物模型被引量：1
- 2003年
- 目的 建立肝脏持续表达丙型肝炎病毒核心 (HCVcore)蛋白的大鼠模型 ,为进一步研究HCV核心蛋白的功能和体内致病机制提供帮助。方法 应用聚合酶链反应法扩增出HCV Core区cDNA ,以重组腺伴随病毒载体介导的病毒重组技术制备含HCVCore的重组腺伴随病毒。重组病毒感染 2 0只雄性SD大鼠肝脏 ,感染后 1个月及 4个月行Southernblot印迹杂交法和Dotblot杂交法检测鼠肝内HCVCore区基因整合、mRNA形成情况。结果 测序证实成功克隆出HCVCorecDNA ,重组腺伴随病毒滴度为 2 .41× 10 11/ml。感染后 1个月及 4个月检测 ,实验大鼠肝脏Southernblot杂交结果均为阳性 ,HCVCore区基因非定点整合 ;肝细胞mRNA的Dotblot杂交结果均为阳性 ,提示正确表达HCVCoremRNA。结论 成功制备出一种肝脏持续表达HCVcore蛋白的大鼠模型。
- 李华陈规划潘承恩王全颖杨广笑
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白致病机制聚合酶链反应
- 甲型肝炎病毒5'非翻译区对重组痘苗病毒表达甲肝抗原的影响被引量：1
- 1996年
- 甲型肝炎病毒５＇非翻译区对重组痘苗病毒表达甲肝抗原的影响王晓洁，王全颖，伊瑶，郭可謇（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词：甲肝５＇非翻译区，甲肝重组痘苗病毒，甲肝抗原表达甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）属小核糖核酸病毒科（Ｐｉｃｏｍａｖｉ...
- 王晓洁王全颖伊瑶郭可謇
- 关键词：甲型肝炎病毒重组痘苗病毒抗原
- 人骨形态发生蛋白2重组腺病毒在动物模型中活性观测
- 2004年
- 目的 利用基因工程技术构建人骨形态发生蛋白 2重组腺病毒 ,并进行体内表达 ,测定活性 ,为深入开展的基因治疗研究创造条件。方法 同源重组构建重组腺病毒 ,将 30只SD大鼠随机分为治疗组和对照组 ,将纯化后的重组腺病毒 5 0 μl注入SD大鼠股部肌肉陷窝病损处 ,通过组织学染色、X线片对动物模型的组织变化进行观测。结果 重组腺病毒治疗组有明显的诱导成骨活性 ,治疗组碱性磷酸酶活性明显高于对照组。结论 应用于动物实验中目的基因表达 ,并具有生物学活性。本研究是在骨缺损基因治疗方面的一次尝试 ,且人骨形态发生蛋白 2重组腺病毒的构建成功 ,也为我国骨科疾病的基因治疗进一步研究奠定了基础。
- 王德利阮狄克李海峰何勍马巍杨广笑王全颖
- 关键词：骨形态发生蛋白分子克隆基因表达重组腺病毒
- 重型病毒性肝炎中丁型肝炎病毒的检测被引量：3
- 1994年
- 为了探讨丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染在重型病毒性肝炎中的作用，对北京佑安医院１９８０年至１９８９年收治的５４例急性和亚急性重型肝炎和３８例急性乙肝患者血清，应用国产ＨＤＶＥＬＩＳＡ试剂测定抗－ＨＤ、抗－ＨＤＩｇＭ和ＨＤＡｇ，应用斑点杂交技术测定ＨＤＶＲＮＡ。结果发现重型肝炎组ＨＯＶ－Ｍ检出率明显高于急性乙肝组（２７．８％比５．３％．Ｐ＜０．０５）。单独ＨＢＶ感染和ＨＤＶ／ＨＢＶ混合感染的重型肝炎患者均有较高的病死率。提示ＨＤＶ感染是重型肝炎中重要的病原学因素之一，ＨＤＶ与ＨＢＶ具有协同作用加重肝损害，导致肝衰竭。
- 黄德庄王全颖贺丽香李蜀南闽福援魏晓清庄辉
- 关键词：丁型肝炎病毒重型肝炎病毒性肝炎
