王东
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人化嵌合T细胞受体修饰T淋巴细胞对慢性粒细胞白血病细胞的体外杀伤效应
- 目的：慢性粒细胞白血病(Chronic Myelogenous Leukemia，CML)是一种起源于造血干细胞的恶性血液系统疾病，目前常用的CML治疗方法包括放射性治疗、化学药物治疗、异基因造血干细胞移植和BCR/AB...
- 王东
- 关键词：慢性粒细胞白血病杀伤效应
- CTP-OD-HA融合蛋白的制备及其对BCR-ABL阳性CML细胞增殖的作用
- ＜正＞目的:用分子生物学方法制备CTP-OD-HA融合蛋白,研究其在体外培养的CML细胞株中的抑增殖效应。方法:通过重组质粒pCTP-OD-HA的克隆、转化与鉴定,CTP-OD-HA融合蛋白的诱导表达及纯化,经Weste...
- 黄世峰刘钉宾曾建明罗红伟彭智王东黄宗干冯文莉
- 文献传递
- 错牙合畸形X线头影图的计算机定点研究
- 李晓智杜扬杨洪江李康宁李跃王东裴帆蒋新生杨春容温兴涛吴庆惠
- 该项目利用基于小波分析图像处理技术对头颅定位测位X光片做图像处理，以提高图像质量，准确提取图像边缘，建立数学模型和算法获得标志点的自动定位，实现了用计算机自动定位标志点代替手工定位标志点的目标；通过对重庆地区儿童的普查，...
- 关键词：
- 关键词：图像处理头影测量
- 抗慢性粒细胞白血病细胞人源化单链抗体的原核表达及其活性被引量：1
- 2012年
- 目的原核表达抗慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)细胞人源化单链抗体(Humanized sin-gle-chain variable fragment,hscFv),并检测其抗原结合活性。方法从重组质粒pUC57-hscFv中扩增hscFv基因,插入含6×His标签的原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-hscFv,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组融合蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,SDS-PAGE分析其纯度;Western blot分析其反应原性;间接免疫荧光试验检测其抗原结合活性。结果重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为46 000,表达量约占菌体总蛋白的37%,主要以可溶性形式存在;纯化的重组融合蛋白纯度为94%,可与鼠抗6×His单抗及K562细胞表面抗原特异性结合。结论成功原核表达并纯化了抗CML细胞hscFv,为其进一步应用于CML的临床分子诊断和生物靶向治疗奠定了基础。
- 朱小影王东李身锋张利军钟梁冯文莉
- 关键词：慢性粒细胞白血病人源化抗体原核细胞
- hnRNP E2诱骗RNA对32DP-210细胞核型的影响
- ＜正＞目的:本研究初步探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly（rC）-binding protein E2,hnRNP E2]诱骗RNA（decoyRNA）对小鼠BCR/ABL阳性的四倍体细胞—32DP-210细胞的作用。
- 曾建明王雅珍魏容彭智罗红伟王东陈新敏冯文莉
- 文献传递
- 慢性粒细胞白血病bcr／abl的糖基化磷脂酰肌醇锚定修饰及在COS-7细胞膜上的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建与糖基化磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)锚定序列相连的bcr/abl真核表达质粒,并检测其在COS-7细胞中基因和膜蛋白的表达。方法以编码慢性粒细胞白血病bcr/abl融合蛋白全长序列的migP210质粒为模板,通过PCR扩增获得654 bp的bcr/abl融合基因片段,双酶切后定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,经鉴定获得重组质粒pBB。同时用RT-PCR扩增人外周血淋巴细胞CD24分子中的GPI获得约243 bp的锚定序列,双酶切后克隆入pBB质粒中与bcr/abl基因下游羧基端相连,获得重组质粒pBBG。在多聚阳离子介导下将pBBG质粒转染COS-7细胞,采用RT-PCR和Western blot检测bcr/abl融合基因和蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定证实,由GPI锚定连接的bcr/abl融合基因插入片段正确;RT-PCR检测到转染细胞中有bcr/abl融合基因,Western blot检测到转染细胞膜上有bcr/abl融合蛋白的表达。结论成功构建由GPI锚定修饰的bcr/abl重组质粒pBBG,并能在COS-7细胞膜上表达出bcr/abl融合蛋白。
- 陶崑王东曾建明黄世峰陈新敏黄宗干冯文莉
- 关键词：BCR/ABL融合基因GPI慢性粒细胞白血病
- 大鼠面神经切断及修复后面神经核内鞘脂激活蛋白原的变化
- 研究证实，面神经损伤后，面神经元自身将合成鞘脂激活蛋白原促进神经元修复。
目的：观察模拟人体面神经损伤SD大鼠的面神经创伤模型面神经核鞘脂激活蛋白原阳性产物的时程变化及再生条件下的合成规律。
设计、时...
- 王东
- 关键词：面神经损伤面神经切断神经元修复
- 文献传递
- GPI锚定修饰的慢粒白血病bcr/abl和鼠IL-12真核双表达质粒的构建及表达被引量：5
- 2008年
- 目的:构建由糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定修饰的bcr/abl和鼠IL-12(mIL-12)真核双表达质粒,在COS-7细胞中检测其基因和膜蛋白表达.方法:以含有慢粒白血病(b3a2型)migP210全长序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得654bp的bcr/abl融合基因片段,酶切后插入pBudCE4.1空载中,经鉴定获得重组质粒pBB.同时,RT-PCR扩增人外周血淋巴细胞CD24分子中的GPI锚定序列,酶切后克隆入pBB质粒中与bcr/abl基因片断羧基端相连,获得重组质粒pBBG并鉴定.然后扩增mIL-12基因片段并亚克隆入pBBG另一多克隆位点,构建重组质粒pBBGI.在多聚阳离子介导下将pBBGI质粒转染COS-7细胞,采用RT-PCR,Western Blot检测bcr/abl融合基因及其蛋白的表达,ELISA检测mIL-12的表达.结果:经酶切和测序鉴定证实,由GPI锚定连接的bcr/abl及mIL-12基因插入片段正确;转染细胞中有bcr/abl融合基因、转染细胞膜上有bcr/abl融合蛋白的表达,细胞培养上清中也有mIL-12的表达.结论:成功构建能在真核细胞中表达bcr/abl和mIL-12的重组质粒PBBGI,为进一步研究bcr/abl基因疫苗诱导肿瘤特异性细胞免疫奠定了基础.
- 陶崑王东曾建明黄世峰陈新敏曹唯希黄宗干冯文莉
- 关键词：BCR/ABL融合基因白细胞介素-12
- 抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用。方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFvETA'单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a(+)原核表达载体中,转化BL21(DH3)宿主菌,IPTG诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法,Western blot鉴定纯化的目的蛋白,FCM鉴定融合蛋白hscFv-ETA'与细胞结合的活性以及诱导细胞凋亡的能力。结果:限制性酶切图谱和序列分析证实,在pET32a(+)原核表达载体上成功地构建了hscFvETA'单链免疫毒素载体;该基因在pET32a(+)载体中获得高效表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符;经Western blot鉴定证实纯化后的重组免疫毒素hscFv-ETA'融合蛋白是正确的;经FCM证实hscFv-ETA'蛋白能特异性结合CML细胞并诱导细胞凋亡。结论:已成功构建并原核表达单链免疫毒素hscFv-ETA',证明该蛋白能发挥特异性结合并诱导CML细胞凋亡。
- 朱小影陶崑李身锋张利军李亚娟王东钟梁冯文莉
- 关键词：慢性粒细胞白血病重组免疫毒素
