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贝氏柯克斯体30kD外膜蛋白基因表达及免疫保护性的研究被引量：1: 2004年; 魏文进温博海牛东升陈梅玲邱玲高宁; 关键词：贝氏柯克斯体基因表达免疫保护性菌株

检测斑疹伤寒病原体的实时荧光定量PCR方法建立: 斑疹伤寒病原体包括普氏立克次体和莫氏立克次体,本研究采用实时荧光定量PCR TaqMan MGB探针技术,根据两者的外膜蛋白B基因序列(ompB)分别设计一对种特异性引物与一个种特异性探针,建立了检测斑疹伤寒病原体--普...; 杨晓陈梅玲温博海牛东升; 关键词：斑疹伤寒病原体实时荧光定量基因序列; 文献传递

实时荧光定量PCR检测汉赛巴通体被引量：3: 2007年; 目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S～23SrRNA间隔区序列设计引物和探针，以克隆的16S-23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法，对所建立的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析，并且对模拟标本进行检测。结果建立的定量标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．997）；与普通PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其1000倍。用荧光定量PCR检测其他相关立克次体和细菌DNA样本，除军团菌检出微弱信号（2个拷贝）外，其余检出结果均为0；对重复性进行了评价，批内和批间的变异系数在0．2％～1．9％之间。用荧光定量PCR检测汉赛巴通体感染的小鼠血标本，在感染后第2天、第3天、第5天，检出少量的汉赛巴通体，在感染后的第1天和第2天从脾脏样本中检出大量的汉赛巴通体。结论检测汉赛巴通体实时荧光定量PCR方法具有高度特异性和高敏感性以及良好的重复性，可用于快速检测各种样本中的微量汉赛巴通体以及作为汉赛巴通体感染的实验室诊断。; 张晶波温博海陈梅玲李丽莉邱玲牛东升; 关键词：实时定量PCR

基因疫苗及增强其免疫效应的策略被引量：1: 2001年; 基因疫苗被视为“第三次疫苗革命” ,是目前疫苗研究领域的热点。本文回顾了基因疫苗的诞生 ,阐述了其优越性 ,重点讨论了增强其免疫效应的策略 ,包括合理的载体设计。; 牛东升; 关键词：基因疫苗细胞因子接种免疫效果

恙虫病东方体Gilliam株56kDa外膜蛋白基因的克隆与表达: 2004年; 目的　表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi)Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白 ,探索其作为诊断抗原的可能性。方法　采用PCR方法 ,从Ot Gilliam株菌种基因组DNA中扩增出 5 6kDa外膜蛋白基因片段 ,将目的基因片段定向插入原核表达载体pQE30 ,再用重组质粒转化大肠杆菌 ,最后用IPTG诱导转化菌 ,SDS -PAGE和Western -blotting检测重组质粒目的基因的表达。结果　 (1)获得长约 15 0 0bp的Ot Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因 ,SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量5 6× 10 4处有表达带 ;(2 )DNA测序证明重组质粒 pQE30 / 5 6中插入的基因片段的序列与已报告的Ot Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因序列基本一致。 (3)诱导表达菌体经超声破碎后 ,显示目的蛋白主要以包涵体形式存在 ;(4 )免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子量约为 5 6× 10 4的独特蛋白带 ,该蛋白约占细菌蛋白总量的 2 9 4 %。结论　Ot Gilliam株5 6kDa外膜蛋白基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达的重组蛋白具有免疫反应性 ,与Ot Gilliam株感染的小鼠血清在免疫印迹中呈阳性反应。; 陈唯军陈香蕊张雪颖牛东升陈梅玲崔红魏文进温博海; 关键词：恙虫病东方体基因克隆

贝氏柯克斯体热休克蛋白B基因的克隆与表达被引量：1: 2005年; 目的克隆贝氏柯克斯体(Coxiellaburnetii)热休克蛋白B(HspB)基因并在大肠杆菌细胞内高效表达。方法采用PCR方法,从贝氏柯克斯体新桥株基因组DNA中扩增出HspB的基因片段,鉴定后将目的片段与原核表达载体pQE30连接,构建重组表达质粒pQE30/hspB,IPTG诱导该重组质粒转化的大肠杆菌产生HspB重组蛋白。结果(1)PCR扩增获得长约1556bp的hspB基因片段。(2)SDS-PAGE证明,HspB重组蛋白的分子量为53.7kDa。(3)经薄层扫描分析,表达蛋白约占全菌体蛋白的71.2%。结论贝氏柯克斯体hspB基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为Q热疫苗的研制提供了一易于获得的候选蛋白分子。; 李青凤牛东升温博海邱玲陈梅玲; 关键词：贝氏柯克斯体热休克蛋白基因克隆

中原地区恙虫病血清学检测报告被引量：3: 2006年; 目的了解河南省恙虫病感染、发病情况。方法采用免疫荧光、酶标记、血清凝集技术。结果检查500例发热待查病人血清,其中24例病人血清恙虫病IgG抗体阳体。结论由此提示中原地区有恙虫病存在,且其流行病学、临床学特点似与秋冬型恙虫病类似。; 张爱梅邓文斌郝宗宇吕家锐宋振清梁颖红陈梅玲牛东升崔红杨瑞馥; 关键词：恙虫病免疫荧光自然疫源性疾病

恙虫病东方体Karp株47kD蛋白基因的表达及DNA免疫初步研究: 2003年; 目的　观察恙虫病东方体Karp株相对分子质量 (Mr)为 47× 10 3 蛋白基因的DNA免疫效果。方法　将恙虫病东方体Karp株Mr 为 47× 10 3 的蛋白基因插入真核表达载体pcDNA3.1( +) ,构建重组质粒pcDNA3.1 47。在证明该重组质粒可在哺乳动物COS7细胞中表达的基础上 ,单独和将其与Mr 为 40× 10 3 重组蛋白联合免疫小鼠。在每次加强免疫之后 10d ,检测小鼠体液和细胞免疫反应。结果　质粒DNA和蛋白联合免疫组所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖反应均高于重组质粒DNA和蛋白单独免疫组 ,而第二次加强免疫后重组质粒诱导脾淋巴细胞的增殖情况则显著弱于其它免疫组 (P <0 .0 5 )。结论　重组质粒pcDNA3 .1 47和重组Mr 为 47× 10 3 蛋白在刺激小鼠免疫反应上具有相互加强作用。; 牛东升陈香蕊陈唯军张雪颖陈梅玲崔红魏文进温博海; 关键词：恙虫病蛋白基因 DNA免疫

普氏立克次体120kDa表面抗原C段基因的克隆与表达被引量：2: 2004年; 采用PCR方法 ,从普氏立克次体基因组中扩增出 1 2 0kDa表面抗原C段基因片断 ,并将其克隆于原核表达载体pQE30 ,构建重组质粒pQE30 6 7,将重组质粒转入大肠杆菌M1 5 ,用IPTG诱导大肠杆菌内的目的基因表达。SDS PAGE分析发现重组质粒转化菌产生了一 6 7kDa重组蛋白 ;在免疫印迹分析中 ,该 6 7kDa重组蛋白与普氏立克次体免疫血清发生特异反应 ,显示 6 7kDa重组蛋白具有普氏立克次体 1 2; 高宁温博海牛东升邱玲陈梅玲; 关键词：普氏立克次体表面抗原基因克隆流行性斑疹伤寒

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牛东升