林永敏
- 作品数：60 被引量：106H指数：6
- 供职机构：广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人白血病细胞系J6-1变异M-CSF的表达及受体结合活性研究
- 2003年
- 目的 :从人白血病细胞系J6 1克隆并表达变异的M CSF的功能区 ,研究其受体结合活性。方法 :RT PCR克隆muM CSF ,并在大肠杆菌BL2 1trxB(DE3)、pET32c(+)系统中表达 ;镍柱鏊合层析 ,抗体亲和层析纯化。ELISA法测定其受体结合活性和解离常数 ,并测定对J6 1细胞增殖刺激的活性。结果 :muM CSF可在本文实验系统呈可溶性表达 ,纯化产物具有M CSF受体的结合活性 ,解离常数为 3.7nmol/L低于正常M CSF ,且刺激细胞体外增殖能力大于正常M CSF。结论 :从人白血病细胞系J6 1克隆的muM CSF能在BL2 1,pET32c(+)系统表达 。
- 曹震宇饶青李戈张斌林永敏郑国光吴克复
- 关键词：巨噬细胞集落刺激因子原核表达酶联免疫吸附分析
- 体外研究miR-155在HBV慢性感染中抗病毒免疫作用
- 蔡启茵任广立林永敏谢聪张卫云马恒颢
- 稳定表达M-CSF及其受体的人—鼠嵌合肿瘤细胞系的建立及性质
- 2003年
- 目的 :建立稳定表达人巨噬细胞集落刺激因子受体 (M- CSFR)或人巨噬细胞集落刺激因子受体—膜结合型巨噬细胞集落刺激因子 (M- CSFR- m- M- CSF)的人—鼠嵌合肿瘤细胞系 ,作为研究肿瘤免疫治疗的实验模型。方法 :用 PCR技术构建 M- CSFR- m- M- CSF融合 c DNA的真核表达载体。将携带 M- CSFR及 M- CSFR- m- CSF的重组质粒转染小鼠骨髓瘤细胞系 SP2 / 0 ,G4 18筛选所得的混合克隆 ,有限稀释后克隆化培养。结果 :得到 3株稳定表达人 M- CSFR和 4株稳定表达人 M- CSFR- m- M-CSF的嵌合肿瘤细胞系。ABC免疫酶标法和 RT- PCR法证实所获细胞系有明显的目的蛋白表达。皮下接种 BAL B/ c小鼠成瘤率 10 0 %。结论 :建立了稳定表达人 M- CSFR或人 M- CSFR- m- M- CSF的人—鼠嵌合肿瘤细胞系 ,并已成功地用于 M- CSF及其受体 DNA疫苗免疫效应的研究。其原理和方法可供同类研究工作借鉴。
- 王敏慧林永敏宋玉华郑国光吴克复
- 关键词：巨噬细胞集落刺激因子
- 不同诱导因子对人外周血单个核细胞P2X7受体表达的作用(英文)被引量：12
- 2005年
- ATP激活P2X7受体可产生一系列的白细胞功能反应,因此P2X7受体的表达调控引起我们的兴趣。然而P2X7受体在正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)、单核细胞中的表达调控机制尚未阐明。本文用半定量RT-PCR方法检测多种细胞因子、细菌抗原、丝裂原对P2X7受体表达的诱导作用,探索P2X7受体的诱导表达模式。结果表明,单个核细胞和单核细胞可检出P2X7受体的表达;白细胞介素2、4、6(interleukin-2、-4、-6,IL-2、IL-4、IL- 6)、肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)等细胞因子和金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ株(Staphylococcus aureus Cowan strain I,SAC)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)能上调PBMC的P2X7受体表达,而γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimu- lating factor,M-CSF)和植物血凝素(phytohemagglutinin-M,PHA-M)等则没有作用;LPS和M-CSF可以提高单核细胞的P2X7受体表达,IFN-γ、TNF-α、GM-CSF作用较弱,但是这些因子的预处理并不能增强LPS对P2X7受体表达的诱导。炎症因子促进P2X7受体的表达,提示P2X7受体可能在对抗细菌感染的免疫反应中起一定作用,这有待于进一步研究。
- 张秀军郑国光马小彤林永敏宋玉华吴克复
- 关键词：P2X7受体细胞因子外周血单个核细胞单核细胞
- 急性髓系白血病M2a和M2b患者细胞因子基因和癌基因表达比较被引量：1
- 1995年
- 用生物素标记的cDNA探针原位杂交检测了8例急性髓系白血病(AML)M2a患者,12例M2b患者及7例良性血液病患者(对照组)骨髓细胞表达细胞因子(TGF-β,TNF-α)基因和原癌基因(N-ras,c-myc,v-sis)的水平。结果表明:①M2a患者TGF-β及N-ras基因表达阳性率明显高于M2b患者。其它基因表达M2a与M2b相比无显著差异。②M2a和M2b患者c-myc基因表达阳性率均显著高于良性血液病对照组。M2a和M2b患者其它基因表达与对照组相比无明显差异。我们的结果提示M2a与M2b在基因表达方面存在差异。
- 马小彤宋玉华林永敏桂福民孔祥银韩明哲钱林生李戈
- 关键词：原位杂交细胞因子癌基因白血病
- 稳定表达mM-CSF白血病细胞株的建立及体外性质研究
- ＜正＞目的：巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF） 是多功能细胞因子,可调节多种细胞的功能;膜结合 M-CSF（mM-CSF）是它的一种选择性剪接产物,已有的研究表明其异常高表达与肿瘤、白血病等相关,并且在卵巢癌和乳腺癌等肿...
- 郑国光王琳马媛媛林永敏吴克复
- 文献传递
- M-CSF可溶性受体在烟草中的表达及其抗M-CSF作用研究被引量：1
- 2005年
- 目的：在烟草中高效表达人M-CSF可溶性受体并研究其抗M-CSF活性。方法：采用基因重组技术构建表达C端含组氨酸标签和内质网滞留信号的M-CSF可溶性受体植物表达载体,通过根瘤土壤杆菌转化烟草,获得转基因植株。PCR、蛋白印迹实验鉴定转基因植株,ELISA方法测定重组蛋白表达水平,集落形成实验测定重组蛋白活性。结果：获得50余株转基因烟草植株,PCR证实目的基因已整合到烟草基因组中,蛋白印迹实验证实转基因植株表达目的蛋白；M-CSFsR在烟草中获得高效表达,但不同转基因植株的表达水平存在差异,其中表达水平最高的一株M-CSFsR占叶片可溶性蛋白的1．92％；集落形成实验证明M-CSFsR可以抑制J6-1细胞的集落形成。结论：在烟草中高效表达有生物学活性的重组人M-CSFsR。
- 郑国光杨应华饶青林永敏吴克复
- 关键词：可溶性受体烟草生物活性
- mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化被引量：3
- 2011年
- 目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。
- 姚兴荣马小彤杨宾霞段永娟林永敏
- 关键词：急性髓系白血病单核细胞分化
- 一种构建β－防御素2肿瘤疫苗的方法及其用途
- 本发明公开了一种构建β－防御素2肿瘤疫苗的方法及其用途，所述的β－防御素2用MBD2表示，包括以下步骤：用脂多糖LPS刺激哺乳动物的皮肤，获得表达MBD2的皮肤组织；采用RT－PCR方法将上述获得的皮肤细胞克隆MBD2成...
- 马小彤徐玢安莉莉林永敏吴克复
- 文献传递
- miR-146a在HepG2.2.15细胞中对c-Myc基因表达影响的研究被引量：8
- 2017年
- 目的构建has-miR-146a真核过表达载体pmR-146a,探究其在HepG2.2.15肝癌细胞中对c-Myc基因的表达调控作用。方法 PCR扩增has-miR-146a的前体基因片段(pre-has-miR-146a),双酶切后连接到pmR-mCherry载体上,通过菌落PCR、双酶切和测序验证重组载体的准确性;将重组载体转染到HepG2.2.15肝癌细胞中作为实验组,同时设空载体组(转染pmR-mCherry空质粒组),空白组(转染试剂Lipofectamino 2000+PBS),24、48h后观察载体荧光蛋白表达量,qPCR检测各组细胞has-miR-146a表达情况;转染24、48h后qPCR检测c-Myc基因mRNA表达量,48h后Western blot检测c-Myc蛋白表达水平。结果经菌落PCR、双酶切和测序证实,pre-has-miR-146a基因片段插入pmR-mCherry载体中;实验组和空载体组转染24、48h荧光显微镜观察可见强荧光,与非荧光条件下作对比,转染效率在50%~60%;实验组has-miR-146a表达量明显高于空载体组和空白组(P<0.01);转染24、48h后实验组细胞c-Myc基因mRNA表达量较空载体组和空白组低(P<0.05);转染48h后,蛋白表达量较空载体组和空白组低(P<0.01)。结论成功构建has-miR-146a真核过表达载体pmR-has-146a,该重组载体可稳定表达has-miR-146a;has-miR-146a可以下调c-Myc癌基因的表达,可以作为治疗原发性肝癌的潜在靶点之一。
- 谢聪任广立许蔓春张卫云张速林蔡启茵林永敏
- 关键词：C-MYC
