杨明峰
- 作品数：41 被引量：100H指数：6
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 莱茵衣藻CrGPAT基因的克隆及分析
- 2023年
- 【目的】探究CrGPAT在莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)油脂合成中的作用。【方法】通过RT-PCR方法克隆了莱茵衣藻CrGPAT基因,对其理化性质、信号肽、蛋白结构域、高级结构进行分析,构建系统发育树。采用荧光定量PCR检测CrGPAT基因表达量。【结果】结果表明,CrGPAT基因编码区全长为1233 bp,共编码410个氨基酸。GPAT相对分子质量为102 kDa,等电点为4.94,平均疏水性为0.805,脂肪系数为17.85,分子式为C_(3536)H_(5841)N_(1233)O_(1442)S_(415),不稳定指数为45.30,属于不稳定蛋白质,为非分泌蛋白且不具有信号肽和蛋白跨膜区。二级结构预测表明CrGPAT蛋白由4种结构组成,其中α螺旋占43.17%,是CrGPAT蛋白最主要的二级结构。同时,系统发育分析表明,CrGPAT与团藻(Volvox)亲缘关系最近。【结论】CrGPAT能够在衣藻体内正常表达且在缺氮条件下表达量会显著提高,为进一步提高莱茵衣藻体内油脂含量提供理论依据。
- 贺志敏张峻鑫于丽平胡康石睿黄体冉杨明峰
- 关键词：莱茵衣藻基因克隆生物信息学
- 检测待测mRNA是否含有miRNA靶位点的方法及其应用
- 本发明公开了检测待测mRNA是否含有miRNA靶位点的方法及其应用。该方法包括：1)提供目的miRNA表达载体和待测mRNA表达载体；待测mRNA表达载体能在生物细胞中转录出名称为起始密码子区‑待测mRNA‑kozak‑...
- 杨明峰何炫程马兰青吕鹤书刘灿马伯宁项晨韦航涛
- 文献传递
- 观赏海棠McWRI1基因克隆与分析被引量：1
- 2017年
- 【目的】WRI1是一个参与调控植物种子油脂合成的转录因子,其与下游靶基因启动子区域特异的DNA序列结合,调控植物种子油脂合成相关基因的表达,但其在植物表面蜡质合成中的功能很少报道。【方法】运用PCR技术克隆McWRI1基因全长的cDNA,实时荧光定量PCR测定McWRI1在苹果属花红、楸子、槟子以及新疆野苹果中的表达,选择楸子作为代表,测定McWRI1与蜡质合成相关基因,如McWAX,McKCS,McKPHMT,McPKM2,McLACS表达的关系,GC-MS测定果皮蜡质成分。【结果】结果表明,McWRI1基因全长1 221bp,共编码406个氨基酸;氨基酸序列比对、系统进化树分析表明McWRI1具有典型的AP2家族结构域;观赏海棠McWRI1与苹果MdWRI1的氨基酸序列一致性较高。在供试的4个苹果种果实中,花红的McWRI1表达量最高,新疆野苹果最低,槟子与楸子居中。以楸子为试材,设置低温处理组,可见低温处理抑制McWRI1的表达,同时下调McWAX,McKCS,McKPHMT和McLACS,并且导致二十三烷、二十九烷、亚油酸、油酸以及十六烷酸-十八烷酯的含量有明显的上升。分析认为,McWRI1可能直接和间接调控超长链脂肪酸的合成、蜡质的脂肪酸的合成以及CoA供给参与观赏海棠果实表面蜡质的合成。
- 马依依赵爽张杰田佶杨明峰姚允聪
- 关键词：观赏海棠转录因子
- 一种利用桐油制备烷烃型生物柴油的方法
- 本发明涉及可再生能源技术及环境保护领域，特别涉及一种利用桐油制备烷烃型生物柴油的方法，包括如下步骤：以多孔无机材料为载体，采用分步浸渍法制备催化剂；将催化剂通氢气进行催化剂的还原活化；通入气态的桐油与氢气进行加氢裂化反应...
- 刘灿荣龙赵晓萌杨明峰王燕李钧涛常明明黄体冉张婧
- 文献传递
- 蛆激酶及其用途
- 本发明涉及蛆激酶及其用途，所述蛆激酶具有溶栓功能，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1‑15所示。本发明的蛆激酶具有降解纤维蛋白、分解纤维蛋白原、激活纤溶酶原的功能，为多靶点、高效、廉价的溶栓药物以及治疗高纤维蛋白原血症...
- 刘灿刘秋荻杨婧艺马彤瑶张凯欣马兰青荣龙杨明峰薛飞燕
- 烟草4CL与虎杖STS融合基因的构建、表达及融合蛋白纯化被引量：2
- 2014年
- 白藜芦醇具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、保护心血管、抗氧化等众多药理作用.4-香豆酰辅酶A连接酶（4-Coumarate-CoA ligase,4CL）和芪合酶（Stilbene synthase,STS）是其生物合成的关键酶和限速酶.本研究利用悬挂PCR （Overlap PCR）技术将白藜芦醇生物合成的最后两个关键酶4CL和STS的基因融合,构建原核表达pET30a-Nt4CL∷PcPKS5重组质粒,原核表达Nt4CL∷PcPKS5融合酶蛋白.预测其共编码945个氨基酸,含15个氨基酸的过渡氨基酸链（Linker）,编码蛋白质分子量（Mr）为102.8 kDa,等电点（pI）为5.69.原核表达筛选结果表明：温度为25℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导起始OD600值在0.4～0.6之间,诱导4h时目标蛋白的表达量最高.细胞破碎后,经Ni2＋亲和柱纯化、PD-10柱脱盐后可纯化得到融合蛋白.本研究为通过分子生物学途径合成白藜芦醇奠定基础.
- 杨亚东郭辉力刘文彬杨明峰马兰青王有年
- 关键词：白藜芦醇融合基因双功能酶原核表达
- 4-香豆酰-CoA连接酶(4CL)和聚酮合酶(PKS1)的融合蛋白在莱茵衣藻中表达促进树莓酮积累被引量：2
- 2021年
- 树莓酮具有重要的医药价值,如抗流感、预防糖尿病等。为了在莱茵衣藻Chlamydomonas reinhardtii中获得树莓酮,本研究将树莓酮合成的最后两个步骤中的酶,即4-香豆酰-Co A连接酶(4-coumaryl-Co A ligase,4CL)和聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS1)通过甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸(Gly-Ser-Gly,GSG)三肽接头融合在一起,构建莱茵衣藻表达载体p Chla-4CL-PKS1。通过电转化的方法将由PSAD启动子驱动的融合基因4CL-PKS1插入野生型莱茵衣藻(CC125)和细胞壁缺失型莱茵衣藻(CC425)中。结果在表达4CL-PKS1融合蛋白的野生型莱茵衣藻和细胞壁缺失型莱茵衣藻中,树莓酮含量分别为6.7μg/g (鲜重)和5.9μg/g (鲜重),高于天然植物中树莓酮的含量(2–4μg/g)。
- 牛文清韦航涛薛飞燕杨明峰
- 关键词：聚酮合酶融合基因
- 草莓组织培养脱毒技术研究进展
- 2023年
- 该文主要介绍在生产实践中常用的、与组织培养有关的茎尖培养脱毒的方法。从茎尖脱毒法、高温脱毒及超低温脱毒处理等茎尖培养脱毒的方法,对草莓组织培养脱毒技术的研究方向进行了归纳。
- 韩思雨杨明峰常琳琳李双桃张运涛张运涛柴博昊王桂霞董静王桂霞孙瑞董静魏灵芝孙健
- 关键词：草莓脱毒
- 定点突变提高虎杖聚酮合酶的苯亚甲基丙酮合酶活性被引量：1
- 2023年
- 虎杖(Polygonum cuspidatum)聚酮合酶(polyketide synthase 1,PcPKS1)同时具有查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)及苯亚甲基丙酮合酶(benzylidene acetone synthase,BAS)催化活性,能够催化生成聚酮类化合物柚皮素查尔酮和苯亚甲基丙酮,进而催化合成黄酮类或覆盆子酮等具有多种生物学活性的化合物。本研究通过分析虎杖PcPKS1与掌叶大黄(Rheum palmatum)BAS、拟南芥(Arabidopsis thaliana)CHS等家族成员的序列以及酶催化位点的构象,确定可能影响酶功能的3个氨基酸位点:Thr133、Ser134、Ser339。采用定点突变对PcPKS1进行分子修饰,成功获得2个突变体并进行相关体外酶促反应,高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)产物分析结果表明,在pH 7.0和pH 9.0的体外酶促条件下,突变体T133LS134A和S339V维持BAS和CHS双功能活性,且BAS活性显著高于原PcPKS1。本研究为利用PcPKS1进行基因工程调节黄酮类和覆盆子酮化合物的生物合成提供理论依据。
- 贺志敏马文瑞于丽平吕鹤书杨明峰
- 关键词：查尔酮合酶定点突变
- 高山红景天UGT72B14-2基因克隆及其原核表达被引量：5
- 2016年
- 【目的】旨在构建UGT72B14-2的原核表达体系,为进一步研究其功能与应用奠定基础。【方法】利用RT-PCR技术从高山红景天茎叶中分离获取UGT72B14-2基因,在大肠杆菌中表达后,经Ni 2+亲和柱纯化、PD-10柱脱盐处理,利用SDS-PAGE检测目标蛋白。【结果】测序结果表明UGT72B14-2基因长度为1 422bp,预测其编码473个氨基酸,蛋白质相对分子量(Mr)为51.49kDa,等电点(pI)为6.30;SDS-PAGE检测结果表明当初始菌液OD600约0.6时,诱导4h后目标蛋白即可大量表达,纯化、脱盐和浓缩处理后可获得较高纯度的重组蛋白。【结论】UGT72B14-2属于UDP-葡萄糖基转移酶家族的一员,能够在大肠杆菌中表达。
- 胡滢滢薛飞燕杨明峰吕鹤书柳春梅马兰青
- 关键词：高山红景天原核表达
